葡萄灰霉病生物学特性研究11-3

葡萄灰霉病生物学特性研究11-3 葡萄灰霉病生物学特性研究 白晓蒙 生命科技学院 植物保护0802班 指导教师:齐慧霞 摘要:为进一步了解葡萄灰霉病的发病规律, 对其病原菌生物学特性进行了系统的研究。结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明:葡萄灰霉病菌生长的最适宜温度是20?,25?，在各种营养条件的培养基上均能生长，其 中最适宜的是在以蔗糖为碳源的培养基和以硝酸钾为氮源的培养基。最适宜于灰霉菌丝生长的 固体培养基是胁本哲式培养基，最适宜的液体培养基是PDA培养基，光照对菌丝生长也有一定 的影响，连续黑暗最适宜于菌丝的生长。分生孢子的致死温度是58? ， 5min。 关键字:葡萄灰霉;生物学特性;分生孢子。 灰霉病是由灰霉菌(B otry tis cinerea) 引起的一种世界性的重要病害, 能危害蕃茄、 [1 2][3]草莓、黄瓜、葡萄等多种植物, 引起果实蔬菜腐烂, 损失比较严。1999 年张继民对灰葡萄孢菌的生理和形态特征进行了研究; 但对灰霉病菌的生物学特性缺乏系统的报道.本试验汲取前人的经验, 在培养基、温度和孢子萌发的试验范围上更加广泛, 试验更加系统。试验与前人多数结果一致, 以期为今后葡萄灰霉病的发生与防治提供更为可靠的参考依据。 1 1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.1 材料 供试菌株:2010年10月从秦皇岛市昌黎县中粮集团华夏葡萄酿酒公司的葡萄基地上采集 [4]带有灰霉病菌的果实，经过组织分离，单孢纯化，镜检观察分生孢子和分生孢子梗的形态，[5)6]经鉴定属于Botryis cinerea .，将纯化的病原菌转入PDA试管斜面中保存备用。 A: 分生孢子梗 B:分生孢子 C:菌核 1.2 病原菌生物学特性研究 1.2.1 温度对菌丝生长的影响 在马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)平板中央接入菌龄相同的直径为0.04cm的菌饼, 每皿1 片, [7]分别别置于5?、10?、15?、20?、25?、30?、35?、40?下的恒温培养箱中培养每 [8]处理3皿，3次重复，用十字交叉法逐日测量菌落直径并记录。 1.2.2 温度对病原菌分生孢子萌发的影响 将病原菌在PDA平板培养基上培养7天，刮取其上的菌落，用无菌水配成孢子悬浮液，用纱布过滤得到分生孢子液，3000r/min离心10min，用灭菌的蒸馏水将分生孢子稀释至10×40视野下100个孢子左右备用。 用载玻片萌发法:培养皿中放一张滤纸(滤纸上打两个孔)，上面放一个载玻片，用干 热灭菌。使用时，在载玻片上加两滴孢子悬浮液，位置在滤纸孔上方，培养皿中加适量的水，润湿滤纸，并除去玻片下滤纸空隙处的气泡，将培养皿置于5?、10?、15?、20?、25?、30?、35?、40?下进行培养，每处理3皿，3次重复，24小时后检查分生孢子的萌发率 1.2.3 分生孢子致死温度的测定 取10ml孢子悬浮液(400倍镜下50,100个孢子/视野)于灭菌试管中，分别于40?、45?、50?、55?、56?、57?、58?、59?、60?不同温度处理5 、10分钟后，接种到培养基上，4d后观察菌落生长状况，以不产生菌落为致死温度。 1.2.4光照对病原菌菌丝生长及分生孢子萌发的影响 在PDA平板上移入直径4mm的菌苔，在25?下分别置于连续光照，12h光暗交替，完全黑暗3组光照条件下培养，用十字交叉法逐日测量菌落直径，每处理3皿，将滴有分生孢子悬浮液的载玻片置于3组光照处理下保湿培养24小时后镜检其萌发率。 1.2.5不同固体培养基对病菌菌丝生长的影响 将直径为5mm的病菌菌饼接种到燕麦片、玉米粒、PDA、PSA ，胁本哲式、大米汁、Czapek7种固体培养基上，置25?恒温光照条件下培养， 用十字交叉法逐日测量菌落直径，每处理三皿 1.2.6不同液体培养基对病菌菌丝生长的影响 配制Czapek、小麦汁、胁本哲氏、PDA、PSA、大米汁和燕麦片7种液体培养基，各取100mL于体积为250mL的三角瓶内，每瓶接入两块直径5mm的病菌菌饼，置于摇床上28?、120 r/min振荡培养，7天后测量产孢量和菌丝干重。 1.2.7不同营养条件对病菌生长和产孢、孢子萌发的影响 Richard培养基为基础培养基，以30 g蔗糖的含碳量为 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ，分别用相同含碳量的葡萄糖、麦芽糖、乳糖和可溶性淀粉替换蔗糖，配制成含有不同碳源的培养基。以10 g硝酸钾的含氮量为标准，以分子量计算，分别用相同含氮量的硝酸铵、硫酸铵、尿素、蛋白胨替换硝酸钾，配制成含有不同氮源的培养基。 2 结果与 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 2.1 不同条件对病原菌菌丝生长的影响 2.1.1不同温度对菌丝生长的影响 表1不同温度对菌丝生长的影响 菌丝生长直径(cm) 温度 (?) 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d 5 0.40 0.40 0.4 0.75 1.27 2.70 3.12 10 0.40 0.40 1.183 2.83 4.82 7.20 8.08 15 0.62 1.67 2.77 3.67 5.00 6.62 7.62 20 0.65 2.67 3.85 7.35 8.12 8.40 8.40 25 0.98 3.927 6.27 7.77 8.40 8.40 8.40 30 0.59 1.56 2.65 3.75 4.76 6.67 8.35 由表1可知灰霉病菌在5,30?的范围内均可生长，5,10?范围内菌丝生长缓慢，最适宜菌丝生长的温度是20,25?，在第5d和第六天即达到到满皿，显著高于其他温度，35?以上的温度条件下菌丝停止生长。说明，灰霉病菌中、低温环境较适宜其生长发病。 2.12不同营养条件对病菌生长的影响 表2不同碳源培养基对菌丝生长的影响 菌丝生长直径(cm) 碳源 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d 蔗 糖 0.93 1.88 4.76 7.83 8.40 8.40 8.40 乳 糖 0.85 1.13 3.30 5.32 8.40 8.40 8.40 葡萄糖 0.77 1.28 2.80 4.77 7.02 8.40 8.40 麦芽糖 0.90 1.27 3.17 5.03 7.10 7.47 8.40 可溶性淀粉 0.77 1.12 1.95 3.85 6.20 7.57 8.40 表3不同碳源菌丝生长的差异 碳源 3d菌落直径 4d菌落直径 PPPP0.05 0.01 0.05 0.01 蔗 糖 4.76 a A 7.83 a A 乳 糖 3.30 b B 5.32 b B 葡萄糖 2.80 b B 4.77 bc BC 麦芽糖 3.17 c C 5.03 c C 可溶性淀粉 1.95 d D 3.85 d D 由2、3表可知葡萄灰霉在各种碳源的培养基上均能生长，在第7天时均达到满皿状态，但不同碳源培养基生长速度有所差异，在乳糖和葡萄糖为碳源的培养基上第3d时的菌落直径之间无显著差异但与其他碳源之间存在极显著差异，在第4d时在以麦芽糖为碳源的培养基上菌落生长加快与葡萄糖、乳糖之间无显著差异，与其他三种碳源的培养基仍然达到极显著差异的水平，因此不同碳源培养基菌丝生长的顺序依次又大到小依次是蔗糖>乳糖>葡萄糖>麦芽糖>可溶性淀粉。 表4不同氮源培养基对菌丝生长的影响 菌丝生长直径(cm) 氮源 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d 尿素 0.83 1.42 2.23 4.04 4.70 5.32 5.42 硝酸铵 0.83 1.73 4.32 5.87 7.35 8.40 8.40 硫酸铵 0.75 1.77 4.08 5.73 7.32 8.40 8.40 硝酸钾 0.93 1.88 4.76 7.83 8.40 8.40 8.40 蛋白胨 0.90 2.15 5.67 8.05 8.40 8.40 8.40 表5不同碳源菌丝生长的差异 碳源 3d菌落直径 4d菌落直径 PPPP0.05 0.01 0.05 0.01 尿素 2.23 4.04 a A a A 硝酸铵 4.32 5.87 b B a A 硫酸铵 4.08 5.73 bc BC b B 硝酸钾 4.76 7.83 c C b B 蛋白胨 5.67 8.05 d D c C 由表4可知以硝酸钾和蛋白胨为氮源的培养基最适宜于灰霉菌落的生长，均在第五天就达满皿，由表5可知葡萄灰霉菌种在不同碳源培养基上的生长速度之间存在差异，第3d时以硝酸铵和以硫酸铵为氮源的培养基之间无显著差异，硫酸铵和硝酸钾之间亦无显著差异但与其他氮源之间存在显著差异，在4d时以尿素为氮源的培养基上菌落生长加快与以硝酸铵为氮源的培养基之间无显著差异，综合以上情况可知在不同氮源培养基菌丝生长的顺序依次又大 到小依次是硝酸钾>蛋白胨>硝酸铵>硫酸铵>尿素 表6不同培养基对菌丝生长的影响 菌丝生长直径(cm) 不同培养基 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d PSA 0.87 3.33 5.79 7.13 8.40 8.40 8.40 PDA 0.98 3.60 6.32 7.43 8.40 8.40 8.40 cazpek 0.40 3.22 4.23 5.08 6.90 7.58 8.40 大米汁 0.80 1.95 3.15 4.93 8.40 8.40 8.40 燕麦片 0.92 1.80 2.90 3.97 5.12 6.18 7.98 玉米汁 0.40 1.48 3.77 5.98 7.32 8.23 8.40 胁本哲式 0.40 1.67 6.95 8.40 8.40 8.40 8.40 表7不同固体培养基菌丝生长的差异 不同培养3d菌落直4d菌落直PPPP0.05 0.01 0.05 0.01 基 径 径 PSA 5.79 a A 7.13 a A PDA 6.32 b B 7.43 b B cazpek 4.23 c B 5.08 b B 大米汁 3.15 d C 4.93 c C 燕麦片 2.90 e C 3.97 d D 玉米汁 3.77 f D 5.98 d D 胁本哲式 6.95 f D 8.40 e E 由表6可知最适宜灰霉菌丝生长的培养基是胁本哲式培养基，其前期生长缓慢在第三天时生长速度加快，菌落直径明显大于其它各个培养基，在第四天即达到满皿状态。其次是PDA、PSA和大米汁培养基较适宜于菌落生长均在第五天达到满皿状态。玉米汁、cazpek均在第七天时达到满皿，最不适宜于灰美菌落生长的是燕麦片培养基。 2.1.3 光照对病原菌菌丝生长的影响 表8不同光照对菌丝生长的影响 不同光照对菌丝生长的影响 不同处理 1d 2d 3d 4d 5d 6d 持续黑暗 0.72 2.08 3.73 4.98 6.40 7.10 光暗交替 0.95 4.25 7.42 8.40 8.40 8.40 连续光照 1.53 4.33 8.22 8.40 8.40 8.40 由表8可知在持续黑暗、光暗交替、连续光照三个处理下，连续光照最适宜于菌丝的生长在第三天就达到满皿状态，其次是光暗交替较适宜于菌丝生长，第四天达到满皿，持续黑暗最不适于灰霉病的发生。 2.14不同液体培养基菌丝干重 20 菌15 丝10干 5重 0 PDA培养基 PSA 图1不同液体培养基菌丝干重小麦 cazpek 由图1可知最适宜于葡萄灰霉菌落生长的液体培养基是cazpek，各种液体培养基的适宜程度胁本依次是cazpek>PDA>PSA>玉米汁>胁本>大米汁>小麦. 2.2 不同条件对分生孢子萌发的影响 玉米汁 2.2.1 温度对分生孢子萌发的影响 大米汁 50孢 子40 萌30发 率20) %10 ) 0 温度5?10?15?20?25?30?35?40? 图2不同温度处理下孢子萌发率 由图2葡萄灰霉病菌的孢子在5 , 35 ?范围内均能萌发，5?和10?萌发率较低仅为3.7%和16.4%在20 ?和25 ? 条件下萌发率较高，分别为41.1%和38. 0%; 其次为15 ? 和30 ?，萌发率分别为21. 7% 和24. 8%; 35 ?萌发率极低，仅为1. 4%。在20 ?和25 ?条件下的萌发率最高。 2.2.2不同培养基对孢子萌发的影响 40 35孢30)子25 %萌20 )15发 10率5 0 培养基 玉米汁 图3不同培养基24h孢子萌发率胁本哲式 由图3可知在以上几种培养基中，灰霉孢子在24小时时均可萌发，其中以大米为主要材料PSA的培养基中萌发率的最大达37.83%，在不同培养基中孢子萌发率由大到小依次是大米>小麦>玉米汁 >PDA >PSA>胁本哲式 PDA2.2.3不同培养基对孢子萌发的影响 小麦 60孢大米 50子 萌40 发30率 20) %10 )0 蔗糖麦芽糖乳糖葡萄糖淀粉碳源 图4不同氮源24h孢子萌发率 由图4可知在以上几种培养基中，灰霉孢子在24小时时均可萌发，其中以麦芽糖最适宜于菌丝的生长，萌发率达到55.33%。在不同碳源培养基中孢子萌发率由大到小依次是麦芽糖>淀粉>蔗糖 >乳糖>葡萄糖。 40孢 子 30萌 发20率 )10% )0 氮源蛋白胨硫酸铵硝酸铵尿素硝酸钾 图5不同氮源培养基24h孢子萌发 由图5可知可知在以上几种培养基中，灰霉孢子在24小时时均可萌发，最适宜于孢子萌发的是以蛋白胨为氮源的培养基，其萌发率显著高于其它三种氮源的培养基。 2.2.4 光照对分生孢子萌发的影响 88 孢86子 84萌 发82 率80) 78% )76 光照条件全光光暗交替全暗 图6不同光照条件下24h孢子萌发率 由图6可知光照对灰霉菌孢子的萌发也有一定的影响，最适宜于其萌发的光照条件是全暗，其次是光暗交替，最不适宜的是全光照的条件。 2.2.5 分生孢子致死温度 处理温度 恒温水浴处理5min 恒温水浴处理10min (?) 重复1 重复2 重复3 重复1 重复2 重复3 40 ? + + + + + + 45 ? + + + + + + 50 ? + + + + + + 55 ? + + + + + + 56 ? + + + + + + 57 ? + + + + + + 58 ? - - - - - - 59 ? - - - - - - 60 ? - - - - - - 孢子在40 ?、45 ?、50 ? 和55 ? 恒温水浴中5min 和10min 后， 接种4d 后均能萌发形成菌落，60 ? 恒温水浴中5min 和10min 后， 接种4 d 后不能萌发形成菌落。因此， 再进一步试验， 将孢子置于56 ? 、5 7 ? 、58 ? 和59 ? 恒温水浴5min 和10min后接种， 结果表明: 56 ? 和57 ? 恒温水浴5min 和10min 后， 接种4d 均能形成菌落; 58 ? 和59 ?，5min 和10min 后， 接种4d 均不产生菌落。因此，孢子致死温度为58? ， 5min。 3.结语与讨论 3.1 葡萄灰霉病菌在5,30?下均可生长, 但生长速度存在显著差异,20,25?生长速度最[9]快次之. 胁本固体培养基最适合菌丝生长, 且有利于病菌产孢; 与雷百战等研究的葡萄灰霉病菌生物学特性有所不同，有待进一步探讨.他们的研究结果是最适宜的温度是15,25，最适宜的培养基是PDA培养基 3.2本试验中光照条件对灰霉菌的生长和孢子的萌发也有一定影响。本试验中光照条件对菌 [9]丝生长和产孢影响不大, 与前人报道光照影响不大的结果有差异. 因此光照对菌丝生长的影响有待进一步研究. [10]3.3在不同碳源，氮源培养基和不同温度下的孢子萌发情况其结果同童蕴慧等的研究结果基本一致。 参考文献 [1]王克勤. 灰霉病菌抗药性研究进展及防治对策[J].黑龙江农业科学2000, (5) : 40, 41 2,翟建军，翟衡(济宁地区葡萄花期灰霉病的发生及防治调查,J,(中外葡萄与葡萄酒，[ 2,,,(,):,,,,, [3]张继民灰葡萄孢生理与形态特征[J] . 安徽机电学院学报, 1999, 14( 3) : 37- 40 [4] 方中达. 植病研究方法[M] . 北京: 中国农业出版社, 1998 [5] 魏景超. 真菌鉴定手册[M] . 上海: 上海科学技术出版社, 1979 [6] 邵力平, 沈瑞祥, 张素轩, 等真菌分类学[M] . 北京: 中国林业出版社, 1984 [7] 雷百战, 李国英. 新疆葡萄炭疽病病原的鉴定及其生物学特性的研究[ J] . 石河子大 学学报: 自然科学版, 2004,22( 4) : 298- 300 . [8] 刘开启, 杨炜华, 郭 泺. 杏果实黑斑病病原鉴定及病原菌生物学特性[ J] . 仲恺农 业技术学院学报, 2003, 16( 4) :1- 6. [9] 雷百战, 李国英. 新疆葡萄灰霉病病原的鉴定及其生物学特性的研究[ J] . 石河子大 学学报: 自然科学版, 2003,17(3) : 167-132. [10] 童蕴慧, 徐敬友. 灰葡萄孢分生孢子萌发的条件研究[ J] . 江苏农业研究, 1999, 20( 4) 29-31.