1. 培养基
(1) LB平板制备
① LB培养基的制备(100ml),应在90ml去离子水中溶解:
胰蛋白胨 1g
酵母提取物 0.5g
NaCl 1g
用5M NaOH调pH值至7.0,加去离子水至100ml。
② 制备含氨苄青霉素(Amp)的LB平板
在上述100ml的LB培养基中加入1.5g琼脂粉,121℃灭菌20min。待培养基冷却至55℃左右,加入50mg/ml Amp至终浓度50ug/ml,立即将培养基倒入培养皿中(25ml/平板),冷却凝固。
③ 含Amp、X-Gal、IPTG的LB平板
④ 在含Amp的平板中加入4μl IPTG(200mg/ml)和40μlX-Gal(20mg/ml),用无菌的涂布棒把溶液涂布于整个平板,静置直至溶液消失。
(2) SOC培养基的制备
① 制备20mlSOC培养基,应在15ml去离子水中溶解:
胰蛋白胨 0.4g
酵母提取物 0.1g
NaCl 0.05g
250mM KCl 0.2ml
② 用5M NaOH调pH值至7.0,加去离子水至20ml,121℃灭菌20min。
③ 待上述溶液冷却至室温,加入2M MgCl2(20.3g MgCl2?6H2O加H2O至50ml,121℃灭菌20min)和2M葡萄糖(3.96g葡萄糖,加H2O至10ml,0.22μm滤膜过滤除菌,1ml分装保存)各0.2ml,至终浓度分别为20mM。
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