呋喃唑酮
NitrofuranAOZ
作用和药动力学的特性,曾经被广泛应用,作为猪、禽类和水产促酶标免疫分析定量检测呋喃唑酮残留试剂盒德国R-Biopharm公
生长的添加剂。但在长时间的实验室研究过程中发现,硝基呋喃类司制造(中文
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件仅供参考,以试剂盒内附的英文原件为准)。
的药物和代谢物均可以使实验动物发生癌变和基因突变,正因为如RIDASCREEN呋喃唑酮检测试剂盒(产品编号:R3701)
此才导致此类药物禁止在治疗和饲料中使用。硝基呋喃类药物中呋
喃它酮、硝基呋喃托英和硝基糠腙(硝基呋喃腙)在1993年被欧
洲(EU)禁用,呋喃唑酮在1995年也被禁用。 竞争酶标免疫法定量测定肉类,蜂蜜,鱼虾,肉(鸡、猪、牛)
由于硝基呋喃类药物在体内很快就能被代谢,而在组织中结合和牛奶中的呋喃唑酮药物残留。试剂盒中包括了所有检测用的试
的代谢产物则能存留较长的一段时间,所以在分析此类药物的残留剂。该试剂盒有96个试验孔包括标准试验,如果进行定量分析,
时经常要分析其代谢后的产物,管理部门就以检测代谢产物为手段必须有微孔板酶标仪。
达到检测硝基呋喃类残留的目的。具体代谢产物见下
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
硝基呋喃类 代谢产物
呋喃唑酮 AOZ 均质(牛奶样品需要沉淀) 呋喃它酮 AMOZ
转移、提取、离心、浓缩和脱脂 硝基呋喃托英 AHD
硝基糠腙(硝基呋喃腙) SEM
AOZ的检测是LC-UV,LC-MS和LC-MS/MS用来检测呋喃唑酮的(样品制备以10个样品为例)
最常用
方法
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,酶联免疫方法结合了色谱技术,采用AOZ的特异性抗第1天 大约2小时
体,可以有很高的精确度,更灵敏的反应,不高的技术要求和更短过夜孵育 大约16小时 ? 呋喃唑酮酶联免疫试剂盒可以测定肉的检测时间。用RIDASCREEN第二天 大约2小时
类,鱼虾,肉(鸡、猪、牛)和牛奶中的呋喃唑酮药物残留。 检测过程(与样品数量无关)大约1.5小时
测定的基础是抗原抗体反应(双抗体反应)。微孔板包被有针 呋喃唑酮 大约100
ppt
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对呋喃唑酮抗体的抗体。加入呋喃唑酮抗体,酶标记物,标准或样
品溶液。游离呋喃唑酮与酶标记物竞争呋喃唑酮抗体结合位点(竞
争性酶免疫分析),同时呋喃唑酮抗体也与微孔板上固定的抗体结 鱼虾 大约90-100%
合。没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将酶基质/发色剂肉 大约70-80%
加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色蜂蜜 大约102-113%
的产物。加入反应终止液后使颜色由蓝色转变为黄色。在450nm处
测量(选择参比波长?600nm)。吸光度值与样品中的呋喃唑酮浓度
成反比。 呋喃唑酮 < 0.01%
硝基呋喃托英 < 0.01%
硝基糠腙(硝基呋喃腙) < 0.01%
每一个盒中的试剂足够进行96个测量(包括标准测定孔),盒
?中的材料如下 关于呋喃它酮的检测可以用RIDASCREEN Nitrofuran(AMOZ)
1 X 96孔板(12条 X 8孔) 试剂盒(产品编号R3711)
6 X 呋喃唑酮标准液,1.3ml/瓶
0ppt,50ppt,150ppt,450ppt,1350ppt,4050ppt
?1 X 酶标记物(6ml)…….……….…….…….…….…..红色帽 RIDASCREEN 呋喃唑酮检测试剂盒测定肉类,鱼虾,肉(鸡、
1 X 呋喃唑酮抗体液(6ml)…….………….….….…..黑色帽 猪、牛)和牛奶中的呋喃唑酮药物残留。
1 X 发色剂/基质(10ml)…….………….…….….…..蓝色帽
1 X 反应终止液(14ml) 1N硫酸…….….….…….…..黄色帽
1 X 样品及洗涤缓冲液粉剂:为10mM的磷酸盐粉剂。pH7.4。其硝基呋喃类药物是人工合成的广谱抗生素,它有非常好的抗菌
中包括0.05%土温20 /4-12?(39-54?)。如果没有冷冻离心机,则先将样品降温
?(46?),然后离心 至大约8
----接9.3的描述方法
----微孔板酶标仪(450nm)
----取1g的均质物或1.1ml的离心上清液(相当于1ml的奶样),----离心机
分别加入4ml的蒸馏水, 0.5ml 1M的HCL和100ul 10mM的----振荡器
2-硝基苯甲醛(在二甲基亚砜),充分振荡 ----旋转蒸发器
----在37?过夜孵育(大约16小时) ----磁力搅拌器
----分别加入5ml 0.1M KHPO,0.4ml 1M NaOH和5ml的乙酸乙酯,----50ul,100ul,1000ul微量加样器 24
----多道移液器 剧烈振荡30秒钟
o----在室温下(20-25C/68-77?)离心:3000g/10分钟 ----混合器(旋转或超声)
----取出2.5ml的乙酸乙酯上层液到另一个新的容器中蒸干燥
----用1ml的正己烷(或正庚烷)溶解干燥物,用1ml的样品稀释----2-硝基苯甲醛
液适当的混合 ----0.1MKHPO 24
o----正己烷(或正庚烷) ----在室温下(20-25C/68-77?)离心:3000g/10分钟 ----乙酸乙酯 ----用50ul的下层液体进行分析 ----Carrez I:0. 36 M亚铁氰化钾(?)X 3 HO 2
----Carrez?:1. 04 M 硫酸锌X7 HO 2
----取1g的蜂蜜,放入容量为20-30ml的离心管中,分别加入5ml
的己烷,100ul 5M的HCL(或500ul 1M的HCL)和4ml的HO,2----标准液含有呋喃唑酮,应特别小心 充分振荡约1min
----反应停止液为1M硫酸,避免接触皮肤 ----室温(20-25?)3000g,离心10分钟 ----不要使用过了有效日期的试剂盒,稀释或搀杂使用会引起灵敏----在-80?冷冻30 min(或—20?冷冻1h)
度的降低 ----除去上层
----不要交换使用不同批号的盒中试剂 ----在50?水浴下,复溶冷冻层
----加200ul 10mM的2-硝基苯甲醛(溶于二甲基亚砜),充分振荡
----在37?过夜孵育(大约16小时)。
o----保存试剂盒于2-8C(36-46?)。----分别加入5ml 0.1M KHPO,0.4ml 1M NaOH和5ml的乙酸乙酯,24
----无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下 剧烈振荡1min
----将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂 ----室温(20-25?)3000g离心10分钟
一起重新密封 ----取2.5ml的乙酸乙酯层到另一个试管中,50-60?氮气流下蒸
干
----用1ml的样品稀释液溶解干燥物,剧烈振荡1min 红色的发色试剂有蓝色反应,表明发色剂/基质变质,应当弃之。 ----取50ul 进行分析
0标准的吸光度值小于0.6个单位(A<0.6)时,表示试剂可能450nm
变质。
样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存
1. 使用之前将所有试剂回升至室温20-25?(68-77?)。
2. 使用之后立即将所有试剂放回2-8?(36-46?)。 ----用均质器均质样品 3. 在使用中不要让微孔干燥。
----接9.3的描述方法 4. 在EIA分析中的再现性,很大程度上取决于洗板的一致性,仔
细按照推荐的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。
5. 在所有恒温孵育过程中,避免光线照射,用盖子盖住微孔板。 ----取出5ml的样品到玻璃离心管中
----分别加入Carrez I和CarrezII各250ul(配制见5.2)
----用振荡器充分混合样品后,用冷冻离心机离心3000g/10分钟 在试剂盒中提供一包样品洗涤缓冲液的粉剂,一包粉剂溶解于
1升的蒸馏水中,制备好的样品洗涤缓冲液在2-8?(36-46?)下最多保存4周时间。
将锡箔袋回至室温后,沿横向边压封线外侧剪开,取出需用数
量的微孔板及框架,将不用的微孔板立即放回原锡箔袋中并且与提
供的干燥剂一起重新密封,保存于2-8?。
1. 将足够标准和样品所用数量的孔条插入微孔架,标准和样品做
两个平行实验,记录下标准和样品的位置。
?呋喃唑酮试剂盒的回归曲线2. 加入50ul标准或处理好的样品液到各自的微孔中,每个孔加入图1:RIDASCREEN样品或标准时注意更换移液器的吸头。
3. 加入50ul酶标记物溶液(红帽)到每一个微孔底部,充分混合。
?RIDASCREEN4. 加入50ul抗体溶液(黑帽)到每一个微孔底部充分混合,在室呋喃唑酮试剂盒的特异性通过对相应的物质进行
交叉反应性分析而得到。 温孵育1小时(20-25 ?/68-77?),覆盖上薄膜(防止蒸发)。
呋喃唑酮…….………….…….….. ….< 0.01% 5. 倒出孔中的液体,将微孔架倒置在吸水纸上拍打(每轮拍打3
硝基呋喃托英…….………….…….…< 0.01% 次)以保证完全除去孔中的液体。 用250ul样品洗涤缓冲液充
硝基糠腙(硝基呋喃腙)…….……..< 0.01% 入孔中,再次倒掉微孔中液体,再重复两次上述操作。
6. 加入100ul基质/发色试剂到每一微孔中,充分混合并在室温
孵育15分钟。
由三个不同的实验结果确定了精密度,图2显示出7. 加入100ul反应终止液到每一微孔中,混合好在450nm处测量
RIDASCREEN?呋喃唑酮试剂盒的精密度情况,获得的标准吸收值的吸光度值以空气为空白,必须在加入停止液后60分钟内读取光
度值。 变异系数(%CV)对相应呋喃唑酮浓度作曲线,可以看到在全部范
围内变异系数如此之低,可以得到很好的再现性。
所获得的标准和样品吸光度值的平均值除以第一个标准(0标准)的吸光度值再乘以100,因此0标准等于100%,吸光度值以百
分比表示。
标准的吸光度值(或样品)
----------------------------- x 100= %吸光度值
0标准的吸光度值
计算标准的值并绘成一个以呋喃唑酮浓度(ng/kg)为半对数
坐标系统的曲线图,曲线在150-1350ng/kg(ppt)范围内基本趋近
?为直线,相对应每一个样品的浓度(ng/kg)可以从校正曲线上读图2:RIDASCREEN呋喃唑酮试剂盒的精密度
出。
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?RIDASCREEN呋喃唑酮试剂盒的平均检测下限约为50ng/kg。对地建立便捷、安全、高效的支付与兑换渠道,为每一位用户于肉样(鸡肉,猪肉,牛肉),鱼,蛋和牛奶检测限大约是100ppt。提供优质的文档交易和账务服务。
肝脏和虾的检测限大约是200ppt。