【doc】大鼠耐苯妥英钠和苯巴比妥钠杏仁核点燃模型及多药耐受基因的表达

【doc】大鼠耐苯妥英钠和苯巴比妥钠杏仁核点燃模型及多药耐受基因的 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达 大鼠耐苯妥英钠和苯巴比妥钠杏仁核点燃 模型及多药耐受基因的表达 中华神经科杂志1999年12月第32卷第6期ChinJ—d 一 ; 大鼠耐苯妥英钠和苯巴比妥钠杏仁核 点燃模型及多药耐受基因的表达凸,7/ 肖争晏王学峰 【摘要】目的探索耐苯妥英钠和苯巴比妥钠(r,rrr-pn)杏仁核点燃大鼠模型的建立并评价其 可靠性. 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 采用苯妥英钠(PHT),苯巴比妥钠(Pn)对柏只杏仁核点燃大鼠进行筛选,按照国际 通用 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 ,根据后放电阈值(血erchsehargethreshold,ADI")的变化判断点燃大鼠对P}rr和PB的敏感 性,并测定大鼠脑部P-糖蛋白(e-glycoprotein,P凹)的表达,证实耐药的客观性.结果点燃鼠对 PHT,PB具有不同程度的敏感性,6只点燃大鼠对PHT,PB不敏感;6只点燃大鼠PHT,PB能显着增高 其ADI".耐药组鼠大脑广泛脑区的PGP表达较药物有效组显着增强.结论用PHT,PB对点燃大鼠 进行筛选以制备耐PHT-PB点燃模型的方法是可行的;可利用其建立难治性癫痫模型,进行耐药机制 即 词】疾病动物抗惊厥药抗多药署爱稠零巴内【关键词】疾病模型,动物抗惊厥药抗药性,多药芸刷协巳 Devdolmm0fH?H玮幽t岫tmy~tla-kindledratsandext3rn~m0ftulDlllXIAOz孵,YAN Yon.g,WANGX,,~feng.n巾憾吡ofNo~!ogy,丁kFirst翩咄Ito.~oltal,~hon~ng时 Medical Sclenees,C.hongyng4(]0016 【An~etlObjeetl*e1"ost.aythemethod.fdevelopmentct"FltT-PB-msistantamygdala-ki Mledrats. M黼Byn鲋血theeffects0ffile棚如c血P|rrandPBina讪I=irIdled胁,the柏 Ii?aIstlldiffel~ats目强id钾如山嗍e黼吕elected.ThenI】8i?gin?岫l00che珊划如 de把m血la土etIle麒ioIl0fPC-P.m0f哪s.R瑚m崦uBiIde把m血ct"血erdi吕c es}101dhev?.fsaIldPBs肌伽nvI】l8蚰t龇.6锄出0?i皿附intl,.eir栅at r嘲tedteBt咄tlIP}rr0rPB(哪PB-胁),aIld6曲l~tuciblein A肌about100%如inj.fP}rrorPB(PH1PB-f.衄胁).i脚删h P-glyeol~in吕hw.dir.忸髓?d靠r曲ginc叩棚日Iyendbthe1i啪inthesamples帅哪PB-Te吐蚰Ir毗s船 o:mp日,witII咖in肝PB-D0nI|蛐nr出,inextemive6拙.f瑚砷珊eerdmdh伽叩he瑚(P< 0.05).0睡h_帅F工.睫d1吨.PHT,PB如B口nikiIIdlj?g眦de18如rnakePIPB-Ie日 a【曰dakindl砒s,w0uldbereli~e.ov既-啪0fHinPITT-PBiI加nrabw叫ldm璃en岫tIle I=irIdledr出witllP}玎.PB啾BI.cecd3em船Idiablerrde1s0fdn】gT吐蚰Ie】e.Thekinddr出witlI t~'T-PB瑚i8忸noemiI|tbeaIe日0urceftIleinv髓g叩.ftIlemec工li即f1g曲mceinep丑.P. 【Key邗Dr由】【地emodel,舶iT?日lAI此D玎vul阻山1g瑚i8咖】oe,珊血 难治性癫痫是目前尚未攻克,但急需解决的问 题.难治的原因除成因复杂外,还与对其发作机制 不了解,不能根据发作的关键环节开发新药物,寻求 新的治疗途径有关.癫痫病人脑组织取材困难,即 使获取标本,在离体脑组织上模拟发作的真实情况 也极为困难.因而建立难治性癫痫模型,在实验条 件下研究其耐药机制是临床医学摆脱目前治疗被动 局面的有效途径.为此,我们利用杏仁核快速点燃 大鼠模型,用P}rr,P8进行耐药筛选,测定耐药组与 作者单位:411~16重庆医科大学附属第一医院神经内科 论着. 有效组大鼠脑部PGP表达情况,多角度探讨耐药性 癫痫模型的建立,评价其可靠性.现报道如下. 材料与方法 一 ,材料 1动物:6,8周龄雄性Wist~r大鼠40只(重庆 医科大学实验动物中心提供),体重250—3110g,分 隔喂养,随机提取.点燃后进行药物筛选,根据其对 药物的不同反应分为耐药组和有效组,并测定其脑 部PGP的表达. 2器材:二道生理 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 仪(LM.~2B型,成都仪器 厂),琚.2型智能刺激器及XCG-1型光偶线性刺激 隔离器(中国科学院上海生理研究所),动物大脑定 位仪(DGY.79A型,长春锻压设备厂),c2l9单克隆抗 体(日本Centoeor公司),即用型链霉素抗生物素蛋 白.过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒(SABC,武汉 博士德公司),螺旋式双极漆包镍铬电极(直径 0.10lm,尖距0.02lmn),牙科水泥,连接器. 二,方法 ,串长1O 1.刺激参数:频率16,波宽1毫秒 毫秒,刺激间隔时问7分钟,点燃刺激强度0.4mA. 电流具有恒流,方波特性. 2.电极埋植与固定:2%戊巴比妥钠腹腔注射 (40rag/ks体重),分批麻醉40只大鼠,固定于脑立 体定位仪,将双极漆包镍铬电极植于右侧杏仁基底 外侧核(坐标定位:前囟后1.0mm,旁开5.3一,颅 骨表面下8.5mill,门齿高于耳杆平面5.0mil1),钟表 螺钉固定于额窦上作为接地电极.所有电极引入连 接器,并用牙科水泥固定于颅顶. ,刺激强度从20 3.杏仁核快速点燃:术后7天 起步,每次递增20,刺激间隔1分钟,直至出 现后放电,此时电流强度即为点燃前ADT;5分钟 后,以0.4mA的电流强度反复刺激动物杏仁核直至 出现RacinelV—V级行为,即点燃(癫痫大发作);点 燃动物连续出现l0次强直.阵挛发作后24小时,以 同样方法测定点燃后ADT. 4.药物筛选:确定点燃后,在ADT24小时后进 行药物筛选实验.动物腹腔内注射PHr(75,nl【g 体重,已证实该剂量在用药后1小时可以增高 A【yI.2),给药后1小时测定用药后ADT,同步取血 用高效液相色谱仪测定药物浓度并观察药物副反 应.每只动物每周给药1次,共重复3次.1周后 腹腔注射PB(30rag/ks体重)_J,重复上述步骤. 对照ADT在给药前24小时腹腔注射等体积生理盐 水后1小时测定. 5.PGP的测定:大鼠断头取脑,制成冰冻切片, 纯丙酮固定1O分钟,0.o3%H2o2中孵育5分钟; PBS液冲洗,切片组织滴加10%正常山羊血清,室温 孵育10分钟;去除血清.切片组织以c2】9单抗(1: 150)37?孵育1小时;PBs漂洗,滴加生物素化山羊 抗小鼠/兔IsG,37?孵育30分钟;PBS漂洗,滴加 sA且c试剂,37?孵育30分钟;PBS漂洗,以二氨基 联苯胺显色,常规苏木精复染,脱水透明封固.主要 观察小脑,额叶,颞叶,顶叶及杏仁核区域.用测微 格技术进行计数,单位:细胞数/每平方毫米(cells/ irfi~2). 6.疗效判断:据Lo~her等一报道和预试验结果 显示,ADT有20%变异范围,故PHT-PB有效鼠标准 为:与对照ADT相比,每次用药后ADT增高100%的 大鼠;耐PHT-PB点燃鼠标准与对照ADT相比,每次 用药后ADT不增高或仅增高20%的大鼠. 7.统计处理:数据以?表示,用OXSTAT医 学统计软件,进行两样本均数比较t检验,配对t检 验和检验. 结果 40只大鼠中,点燃31只,成功率为78%.点燃 的31只鼠中,21只动物通过PHT3次药物筛选:6 只动物3次PlaT试验中ADT不增高或仅增高20%; 7只动物每次用药后ADT增高100%以上;另有8只 大鼠3次用药后AI)T变化不定.上述21只动物1 周后再以PB进行筛选,PB3次药物筛选均全部通 过:7只动物3次PB试验中ADT不增高或仅增高 20%;7只动物每次用药后ADT增高100%以上;另 有7只大鼠3次用药后ADT变化不定. 将6次PlaT,PB试验结合起来,共有6只动物6 次PHT,PB试验ADT不增高或仅增高20%,归人耐 药组,耐药率为29%;6只动物6次用药后ADT增高 100%以上,归人药物有效组,有效率29%;另有9只 大鼠6次用药后ADT变化不定,未纳人进一步 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 与试验.耐药组,有效组点燃前后ADT变化见表1. 点燃前,耐药组ADT显着高于有效组(P< 0.05),点燃后,两组ADT比较,差异无显着意义(P >0.05);耐药组及有效组点燃前后ADT比较,差异 均无显着意义(P>0.05). 衰1耐药组和有效组点燃前后ADT比较(?,re,) 与耐药组比较,P<005 部分动物用药半小时后有不同程度的副反应如 共济失调,站立不能等,但耐药组与有效组比较差异 无显着意义(P>0.05).血药浓度均在有效范围 内,耐药组与有效组问比较差异无显着意义(P> 0.05). 测定5只耐药鼠与6只有效鼠脑部PGP表达情 中华神经科杂志1999年12月第32卷第6期O.inJNettvd,Deeerabet1999,Vd32.No 况:耐药组杏仁核,额叶,颞叶,顶叶PC.P表达较有 效组显着增多(表2);耐药组动物的毛细血管内皮 细胞有大量PC.P表达,有较多星形胶质细胞PGP表 达阳性;有效组仅见少量毛细血管内皮细胞有PGP 表达,星形胶质细胞罕见PC.P表达(P<0.05),见 图1,2.小脑PGP阳性表达见于毛细血管内皮细 胞,颗粒细胞,两组比较差异无显着意义(P> 0.05). 寰2耐药组和有效组不同脑区PGP表达 (i?s,~.1ls./nm?) 组别鼠数杏仁核颧叶预叶顶叶小脑 耐药组5209?2A.122?3089?3110?770?13 有效组615?11'9?8''0?0—0?0,69?28 注:与耐药组比较,P<0.001,一P<0?}实验过程中,耐药 组1只动物意外死亡 讨论 常用抗癫痫药并不针对疾病的病因.原发性或 由多种原因所致的继发性癫痫,甚至由颅内肿瘤这 样有明确病因,需手术处理的疾病,常用抗癫痫药也 有不同程度控制发作的作用.难治性癫痫最突出的 特征就是对有不同化学结构,不同作用机制的3种 以上一线抗癫痫药有明显的耐药性.目前,在动物 实验中判断这种耐药性公认最敏感,可靠的指标是 A.本实验据此判断动物对药物的敏感性,筛 选出耐药鼠与有效鼠,耐药组诱发ADT的阈值在用 药后无明显变化,提示PHT-PB没有改变癫痫发作 的阈值;有效组诱发ADT的阈值在用药后明显提 高,支持前者对PHT-PB有耐药性.对两组动物点 燃前后的ADT进行比较,发现点燃前耐药组ADT明 显高于有效组(P<0.05),点燃后两组问ADT比较, 差异无显着意义(P>0.05),点燃前后ADT比较,两 组均无显着变化(P>0.05),提示耐药鼠的癫痫易 感性比有效鼠相对较低,但点燃后其癫痫易患性似 与有效鼠无明显差异,因而不影响结果的判断. 癫痫病人的耐药性是客观存在的.我们曾在血 药浓度监测条件下,对510例癫痫病人进行一线抗 癫痫药耐药性研究,发现其耐药性为10%一20%, 并有交叉耐药性_6J.本实验将临床最常用的P?1 和PB作为试验药物,发现Wistax大鼠耐药的发生率 为29%,两种药物之间有交叉耐受性,这与人类耐 药现象非常相似.本实验的结果还受到I?幽等 研究结果的支持.I?cller等曾用52只点燃鼠反 复评价PHT的急性抗癫痫效应,发现有20%的点燃 鼠耐药,同时指出点燃鼠对PHT的不同反应不是电 极埋植部位差异,药动学差异及药效学遗传差异所 引起,而是动物个体差异所致.以后的研究还发现, 对PHT耐药的点燃鼠对其他抗癫痫药如PB,丙戊酸 以及新药氨已烯酸都有相似的耐药性,说明这种耐 PHT的点燃模型可能是进行耐药机制研究的唯一途 径["].本实验建立的模型具有:(1)发作类型与临 床中的耐药类型类似(临床中常见耐药类型包括复 杂部分性和部分性癫痫发作);(2)模型发作时有脑 部阵发性异常放电,可供从电生理角度评价药物疗 效;(3)常规抗癫痫药不能满意控制发作;(4)能提 供抗癫痫药效能的长期研究(即发作后动物可存活, 慢性用药后可维持有效血药浓度)特征,完全符合国 际学术界难治性癫痫模型的要求J.故本实验建立 的动物模型是目前进行耐药性研究的一个较为理想 的动物模型. 在对癫痫病人耐药性研究中有人发现,国内癫 痫病人的耐药性主要有3种:先天,功能性和代谢性 耐受E5,6J.本实验评价的是PHT-PB的急性抗癫痫 效应,因而其耐药性应主要与先天性和功能性耐受 有关. PHT,PB,卡马西平及丙戊酸的化学结构,作用 机制完全不同,但难治性癫痫病人或耐药性癫痫鼠 对此都有不同程度的耐药性,提示可能有一种共同 的耐药机制在起作用.1970年Biedler等首次提出 多药耐受(multidrugresistance,MDR)的概念.以后的 研究发现,人类blDR基因族主要由blDR1,MDR3组 成,前者起主导作用,其表型标志是一种相对分子质 量为170000的胞膜糖蛋白,称为P.糖蛋白(PC.P), 其功能为能量依赖的跨膜外排泵,其活动增加可致 细胞内药物浓度降低,对不同的亲脂类药物产生交 叉耐药性n.PHT,PB及卡马西平等抗癫痫药物化 学结构各异,但均与PC.P药物外排泵的底物结构一 致_8],因而患者或大鼠对PHT,PB的耐药可能与此 有关.本实验中我们采用免疫组化方法,用c2.单 抗测定了耐药组,有效组点燃鼠脑组织中PGP表达 情况,发现所测区域除小脑外,杏仁核,额叶,颞叶及 顶叶等脑区的PGP表达两组间存在显着差异;耐药 组动物大脑广泛区域的PGP表达明显增强,除毛细 血管内皮有大量PGP阳性表达外,多数星形胶质细 胞PC.P表达也呈阳性;有效组中仅少量毛细血管内 皮PC.P呈阳性表达,星形胶质细胞罕见PGP表达. 中华神经科杂志1999年12月第32卷第6期Chin 耐药鼠大脑广泛区域PGP表达与ADT的变化呈现 高度一致性,支持本实验模型具有耐药特征.同时 也表明,PGP的药物泵出功能可能是癫痫病人耐药 的重要机制.这种耐药不仅表现为病灶部位的耐 药,而且是大脑广泛脑区的耐药.因而PGP表达增 强可以作为癫痫大鼠或癫痫病人耐药的标志. (本文图1,2见插页图第25页) 参考文献 1kBd甘WtJil删拯蛐ClIig肚aT呻dd0fdnr叫p日r凼l :epbr?-臌r啪嘣d吐且呲r出J 印il单町 Ph日I】mET.1991,258;483棚. 2Bd盯W,n嘲nd旰凹,G栅L,el.n舳砌?0 glIlm肌p1日Bmar叩id舯d击e}?,埘lb甜: ?betw嘲cBl脚eto斟越 GABAEp丑啊,1993,14:7~-255. 3kW.埘埘C,}hD.Ph蚰瑚册10Ich棚娃of pI.即—I卜曲皿【【,a珊m.dd血出 paIl挝一l-y.ql,19o]3,1s:卸.219. 4L0W,ElJ.h呻mDdelBiIIlrade印i1q.: Jd??e帅田,s山p【Gl^,Tc衄帅T,.hl响d曲k甲. Wli_h:Bi衄础l啦Ud11995.53-71. 5王学峰,沈鼎烈.卡马西平,苯妥英钠的耐受性研究.临床神经病 . 学杂,1993,6:226脚 6王学峰,扰鼎烈.国产丙戊酸的莨性和不良耐受性中国新药与 临床.1993,12:289-290 7^I丑rieJP,zit~o1.mR.SlideB.hIL【】Lresistance【m1)ne a?*Bio?in舢aqIkuke蕾:鼬l0r1itlIne8岫椰3一 曲dinvi乜odn蛾唧.m,1991,78:586-592. 8M?CS,G嗍n酬.ech衄i叫ellrde~髑D0f 峨细怫.0口c晰,1988,2:55彤. (收稿:19994)3415謦回:19994rt4~) (本文编辑:李文慧) 后颅窝肿瘤病人脑干听觉诱发电位与瞬目反射的意义 孙为群张传英滕良珠张磊 研究后颅窝肿瘤病人脑干听觉诱 发电位(BAEP)和瞬目反射(斑t)的改变 及肿瘤部位,大小和病理类型不同对 B.~kEP及肌的影响. 方法:1995,1998年间我科收治 的后颅窝肿瘤病人51例,男32例,女19 例,年龄5,64岁.所有患者均经手术 与病理证实.术前进行BA砰及BIt检 查.按肿瘤部位,大小及病理类型分 组:桥小脑角组24例,小脑半球组l5 例,中线组l2例.对照组为如名健康 体检者.并对照组均数?标准差为标 准,正常为阴性,反之为阳性. 结集:不同部位组间比较:(1)桥 小脑角组B.4EP阳性率为62%(15/24), 显着高于小脑半球组的27%(7./15)和中 线组的17%(1/12)(P<001);(2)BRR' )398?lff2, 波波幅对照组为(,全文同 显着高于桥小脑角(48?18),小脑半球 (78?27)及中线组(153?56)(P< 作者单位:251~1济南,山东省立医院神 经外科 005).桥小脑角组R.潜伏期阳性率 58%(14/24),显着高于中线组的17% (2/12);桥小脑角波幅阳性率为船% (21/24),显着高于小脑半球组的47% (7/15)及对照组(P<0.05,0.01). 不同病理类型组间比较:(1)听神经 瘤组B.~kEP阳性率为85%(11/13),显着 高于脑膜瘤组的17%(1/6),胶质瘤组的 22%(4/18)和其他肿瘤组的14~,(z/14) 和对照组(P<0.01);(2)听神经瘤组BR 渡渡幅为24?10,显着低于脑膜瘤组 (1213?6o),胶质瘤组(96?35)和其他肿 瘤组(95?36)及对照组(398?102).听 神经瘤组R.阳性率为77%(10/13),显 着高于胶质瘤组的22%(4/l8)及其他肿 瘤组的29%(4/14)(P<0.05):听神经瘤 组用性率为92%(12/l3),显着高于 脑膜瘤组的17%(1/6),腔质瘤组的 56%(4/l8)和其他肿瘤组的50%(7/14) (P<0.05,0.01). 大,小肿瘤组间比较:(1)大肿瘤组 BAEP的3个主波(I=1.51?0.04. ?=4.01?0.嘴,V=6叽?0.10.单位: . 论着摘要 毫秒)与小肿瘤组B.~kEP的3个主渡(I =1.49?0.O1,?=3.96?0.09,V= 6.??0.07,单位:毫秒)及对照组B.~kEP 的3个主渡(I=1.48?0.08.?=3.68 ?0.13,V=5.6o?0.21).单位:毫秒)的 潜伏期比较,差异无显着意义(P) 0.05);(2)BI11tl渡波幅大肿瘤组为盯 ?20,显着低于小肿瘤组(227?41)及对 照组(40l?104)(P<0【巧);R2波波幅大 肿瘤组为印?17,显着低于小肿瘤组 (1??3o)及对照组(398?l02)(P' 0.01).大肿瘤组1t.波幅阳性率为92% (2',26),显着高于小肿瘤组的52%(13/ 25)及对照组(P<0.【巧). 讨论:后颅窝肿瘤患者BA,BR 检查结果与对照组相比普遍存在潜伏期 延长,波幅降低或消失的现象.其中以 桥小脑角组,听神经瘤组及大肿瘤组更 加明显;这2种方法灵敏可靠,可以互 补,联合应用有助于早期发现后颅窝肿 瘤. (收稿:19994)3-29謦目:19帅) (本文编辑:李文慧)