血清5‘—核苷酸酶测定

血清5‘—核苷酸酶测定血清5‘—核苷酸酶测定血清5‘—核苷酸酶测定 7 欲右畋荤螽乔嵩5 I自口c夸rDz 215 血清5一核苷酸酶测定天津市蓟县人民医院检验科塑垒天津医科大学医学检验系强甚适中图分类号:R446.112文献标识码:B文章编号:10068147(200O)02一.2l5o2 ,0 5LNT催化各种核苷5一磷酸和脱氧核苷5 磷酸水解,生成相应的接苷或脱氧核苷和无机磷酸.临床检验中5NT的测定主要有比色法,紫外分光光度法,放射性同位素法等.其比色法试剂价廉,操作简便,可作自动分析,目前国...

血清5‘—核苷酸酶测定血清5‘—核苷酸酶测定 7 欲右畋荤螽乔嵩5 I自口c夸rDz 215 血清5一核苷酸酶测定天津市蓟县人民医院检验科塑垒天津医科大学医学检验系强甚适中图分类号:R446.112文献标识码:B文章编号:10068147(200O)02一.2l5o2 ,0 5LNT催化各种核苷5一磷酸和脱氧核苷5 磷酸水解,生成相应的接苷或脱氧核苷和无机磷酸.临床检验中5NT的测定主要有比色法,紫外分光光度法,放射性同位素法等.其比色法试剂价廉,操作简便,可作自动分析,目前国内最常用的方法需要除去蛋白,操作繁琐.结果精密度低笔者采用Wood方法并加以改良SDS作为蛋白增溶剂, 是一种不除蛋白,标本用量少,反应灵敏,快速,试剂较稳定的直接测定方法. l材料与方法 11试剂(1)0.04mol/L的巴比妥缓冲液 (pH7.5).(2)0.04mol/I的硫酸锰溶液.(3) 0.1mol/L的氯化镍溶液.(4)5一AMP基质液:精确称取5磷酸腺苷174mg,溶于9ml的 01mol/LNaOH.溶解后加蒸馏水至50ml后,4? 冰箱保存.(5)01mol/LNaOH.(6)米吐尔试剂:称取米吐尔(对甲氨基酚硫酸盐)4g,溶于100ml蒸馏水中,加10g无水硫酸钠.用蒸馏水加至200ml, 混匀放棕色瓶内4C冰箱保存.(7)酸性钼酸盐试剂:称取25g钼酸铵,溶于蒸馏水,然后慢慢加人浓硫酸175ml,再加蒸馏水定容至500ml.(8)4 SDS.(9)标准磷应用液60~Lmol/L 12方法 121原理:5一NT催化5'一AM水解,释放腺苷及磷酸.加人钼酸铵后与磷酸结合成磷钼酸,磷钼酸颜色的深浅与释放的磷酸成正比,即与5NT 的活性成正比,与磷标准物对照,即可得出血清中盹,5一NT活性单位. 1.22操作步骤;取试管4支,标明测定(U),对照 (B),空白(C),标准(S),如表 1步骤进行 ,主管拄师,研究方向:医学植验:张作者筒丹:胡建强(1965),男洪清(1965),男,宴验师,研究方向;医学检验裹1操作步囊加^UBsc 血清巴比妥缓冲棱 Ni溶聩硫酸锰基质渍 0.050.05 0.150.】5 0.020.O2 37?水溶5rain 37?水溶30min H200.202 Nid2溶棱0.050.0,5005 标准一005 4SDS202.02.O20 朱吐尔试剂】.0101.010 钼醴试剂1.0l0101.0 将各管棍匀室温放置15rain,波长710am比色 12.3单位定义:每升血清在37C与底物作用 1min产生lt~mol磷酸(以磷计)为一个5LNT括性国际单位. 1.24计算公式 s.-r活性u,一I}×..s ×30×005一"一标准管空白管, 2结果与讨论 2.1最适波长的选择: 本法测定吸收曲线如图1. 占皂乜韶圈l定嗄收曲姥渡长rnm) 216 嘞藏f 豢蒿天JT律M医U科大学学20报00VNo0.],26 最大波长吸收光谱峰在710nm,故本文最适波长是710nm. 2.2最适酸碱度(PH)选择: 配制不同PH的巴比妥缓冲液,用其对同一份标本进行测定所得结果见图2. 围2不同PH条件下5NT爵的{舌性由图可见5一NT最适PH为7.5. 2.3十二烷基硫酸钠(SDS)浓度试验: SDS能破坏蛋白质分子之间与其他物质分子之间的共价键,消除混浊,而避免了去除蛋白质的步骤.实验中,加人SDS的浓度为1,1O.笔者发现1,2SDS管中出现混浊.3稍微浑 fe—门浊.4Voo,9清晰透明.lO%以上因l浓度太高,放置时间长出现沉淀物,不宜选用,而选用4,5 SDS较适宜. 2.4重复性实验: 取混合血清标本一份,批内连续测定1O次,其结果为6.4?0.26(i?S),CV4.O.批问试验,每批做5次,做4批共20次,其结果为6.3?0.29(x ?S),CV4.6.说明本试验精度较好. 2.5排除抗干扰因寨:血清中碱性磷酸酶(ALP) 同样地催化水解5一AMP生成同样产物而引起5J_ NT活性升高.本法中B管加人氯化镍试剂抑制 5一NT活性,产生的磷酸仅由ALP活性释放,而测定管(U)中不加氯化镍产生的磷酸是由5.1_NT及 ALP活力所致,两管光密度之差即为5一NT活性. 排除了ALP的干扰. 2.6参考值测定本文对120名成年人,年龄18,54岁的健康人进行了5'-NT的测定,其结果为(9~6)U/I.与文献报道基本一致. <199911—18收穑) ?5例胰腺癌诊治分析f;, 天津医科大学总医院普外科康淑群齐清套中图分类号:R735.9文献标识码:B文章编号:1006—8147(2000)020216—02 胰腺癌是消化系统恶性肿瘤之一,近年来发病率呈上升趋势,死亡率较高.胰腺癌早期无特异表现,实验室方法缺乏特异性,早期诊断困难,误诊率高.出现典型症状,病程已达晚期,失去手术时机. 为提高对胰腺癌的认识,现对我院1987,1997年 10a间115例胰腺癌进行回顾分析. 1资料与方法 1.1一般资料本组胰腺癌患者115例,其中男性75例.女性40例.男女比例为1.8:1,年龄最小 24岁,最大84岁,平均年龄63岁.55岁以上患者 80例,占69.病史最短一周,最长达3a. 1.2临床表现首发症状为上腹胀痛71例,黄疸作者简介:壕淑群(1961一),女,主治医师,学士学位,研究方向:普通外科;齐清会(1945),男,主任医师.博士学位.研究方向:中西医结音治疗急腹症. 39例,消瘦39例,食欲减退29例,腰背部疼痛16 例,腹泻7例,大便灰白色6例,上腹部肿块4例, 伴有血糖增高11例,合并胰腺炎4例.上消化道造影异常4例,经ERCP诊断胰腺癌2例. 1.3病变部位与实施手术的比较少数胰头癌出现典型症状较早,手术切除率相对较高,本组胰头癌切除率达20,而其它部位的切除率则较低,本组仅7. 1.4病史的长短和治疗方法的关系我们对病史的长短和手术的方法进行了比较,结果显示t病史在1个月之内者37例,有8例行彻底的肿瘤根治手术,占21.6{病史1,3个月之内37例t只有5 例行根治性手术,占13.5;大于3个月者41例t 死亡4例,仅4例行根治手术,只占7. 1.5病理分期与手术方式的关系根据 Hermreck方法对胰腺癌进行肉眼病理分期:I限

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