【doc】外阴与宫颈HPV感染型别分析

【doc】外阴与宫颈HPV感染型别分析 外阴与宫颈HPV感染型别分析 18临床皮肤科杂志2012年41卷第1期JClinDermatol,January2012,Vo1.41,No.1 外阴与宫颈HPV感染型别分析 黄熙,姚军,李曼,严文杰 (1.桂林医学院附属医院皮肤科,广西桂林541000;2.桂林医学院附属医院妇产科, 广西桂林541000) 【关键词1HPV感染;外阴;宫颈 【中图分类号]R752[文献标识码]B[文章编号]1000—4963(2012)01—0018—02 人乳头瘤病毒fhumanpapillomavirus,HPV)感染已被公 认为多种疾病发生的必要病因.现已鉴定出HPV约有100余 种型别[11,目前国内外对HPV致病性有了广泛的研究,但在外 阴与宫颈的联合研究较少见,我院皮肤科联合妇产科对门诊外 阴和宫颈疑似HPV感染就诊者进行了HPV—DNA型别联合分 析,现报告如下. 1材料与方法 1.1材料 标本来自2007年5月一2o09年12月在桂林医学院附属 医院皮肤科,妇科门诊就诊的1661例疑似HPv感染就诊者, 其中男469例,女1192例,年龄18—65岁,平均年龄28-4岁. 宫颈取材1068例,外阴取材575例,外阴HPV—DNA检查取材 于肛周86例,阴茎冠状沟,包皮338例,女性大阴唇151例.所 有患者均进行HPV—DNA分型检测. 1.2方法 1.2.1标本的采集与处理?宫颈部位标本采集:以窥阴器暴 露宫颈,擦净宫颈口分泌物,以配套专用拭子深入受检者宫颈 IYl内2~3am,顺时针旋转4,5周以获得足够的上皮细胞样本, 取出后放入洗脱管中.沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断,旋紧洗 脱管盖,做好样品标记,一20.c保存待测.?外阴部位标本采集: 首先将浸于生理盐水的纱布敷于待取材部位(包括阴茎冠状 沟,包皮,女性大阴唇等外阴HPv易感部位)10min,然后用专 用拭子在待取材部位反复刮擦8,10次,然后放入洗脱管中,旋 紧洗脱管盖,做好样品标记,—20?保存待测. 1.2.2HPV—DNA分型 1.2.2.1脱落细胞DNA提取将宫颈刷或专用拭子在洗脱管 中充分漂洗后,把洗脱液全部转移到1.5mL微量离心管中,13 000r/min离心10min,弃去上清,管底的细胞加50L裂解液 并吹打均匀.将微量离心管放入100oC水浴加热10min,13000 r/min离心10rain,保留上清液待用. 1.2.2.2HPV基因分型检测HPV基因分型检测试剂盒 (PCR一反向点杂交法)购自深圳亚能生物技术有限公司.? PCR扩增:取PCR反应管做好标记,5000r/min离心2s,而后 加入已提取的待测样品DNA5IxL,反应总体系为25.?杂 交:取15mL塑料离心管.放入标有患者编号的膜条,加入A液 收稿日期:2011-01—19;修回日期:2011-07—27 基金项目:广西省自然科学基金(桂科自0848018;0728235) 资助项目 通讯作者:姚军,E—mail:706864119@qq.corn 论着 5mL及PCR产物,混匀将离心管放入沸水浴中加热10rain,置 杂交箱51?杂交1h.?洗膜:取出膜条,移至含有预热B液的 5OmL管中,于51?轻摇洗涤15rain.?显色:用A液配制1: 2000的POD溶液,室温轻摇浸泡30min,弃液.用A液室温轻 摇洗2次,每次5rain.用0.1moL柠檬酸钠室温洗膜1~2min.将 膜条浸泡于显色液中避光显色1h左右即可观察结果. 1.2.3结果判断倒去显色液,用清水冲洗膜条1次,有蓝色 斑显现位置即可断定HPV的型别.其中,高危型包括:HPV16, 18,31,33,35,39,45,51,52,53,56,58,59,66,68,73,83,MM4;1氐 危型包括:HPV6,11,42,43,44.膜条在Pc位点处有蓝色斑点 出现视为有效;阴性对照膜条应除Pc位点位置外无蓝色斑点 出现.否则有可能是发生污染或实验不成功. 1.3统计学处理 采用SPSS17.0软件包,以P<0.05为差异有统计学意义. 2结果 在1661例标本中检出HPV阳性病例819例,阳性检出率 为49.31%.共检出HPV—DNA型别18种. 在1086例宫颈脱落细胞标本中检出HPV阳性病例477 例.阳性检出率为44.92%;HPV型别检出次数共627次,以16, 58,18,56多见.低危型别检出114次,占阳性标本的17.19%(包 括多重感染1,以HPV6,1l,43多见(表1);高危型以HPV16检 出率20.81%为最高,其次是HPV58检出率为12.52%,HPV18 是第3常见的高危感染类型.双重感染23例:8例HPV6+16(8/ 477),9例BPV16+18(9/477),4例kiPV6+11(41477),2例 HPV6+58(2/477);多重感染(包括3或4个亚型同时感染)52 例:12例HPV6+16+18(12/477).8例HPV16+18+58(8/477),5 例HPV6+58+59(5/477),4例HPV6+11+16(4/477),10例 HPV6+I1+16+18(10/477),6例HPV16+18+56+59(6/477),5例 HPV6+16+43+58(5/477),2例HPV6+45+58+59(2/477). 在575例外阴脱落细胞标本中检出阳性病例342例,阳性 表1外阴和宫颈低危HPV—DNA型别检出率 外阴和宫颈感染低危HPV型别中HPV6,11感染率之间的P值 均<O.05,HPV42,43感染率之间的P值均>0.05 临床皮肤科杂志2012年41卷第1期JCljnDermatolJanuary2012,y9:.1 检出率59.49%,由于存在双重感染和多重感染各HPV型别 检出数共402个,以HPV6,11,16多见.低危型别HPV6检 出率最高(169/402),其次为HPV11(61/402);高危型别 HPV16检出率最高(46/402).双重感染36例:13例HPV6+ 11(13/342),9例HPV6+58(9/342),12例HPV6+16(121 342),2例HPV6+MM4(2/342);多重感染7例:3例HPV6+ 11+42(3/342),2例HPV6+16+56(2/342),3例HPV6+45+58+ 59(2/342),1例HPV6+16+43+58(1/342). 3讨论 目前已经发现的HPV型别中与肛门,生殖器尖锐湿疣 (CA)发生有关的约30种左右.根据致癌危险性大小,HPV )和低危型(如HPV6,11等). 分为高危型(如HPV16,18等 有文献指出肛门生殖器疣与HPV6,11相关,鲍恩样丘疹病与 HPV16,34,37,42相关,可以感染宫颈的有40余种,宫颈尖 锐湿疣,上皮内肿瘤(I,?,?级)和浸润癌主要与HPV16, 18等有关[2-3].由于存在双重感染和多重感染,本研究各HPV 型别检出次数共为627个. 本研究显示在低危HPV—DNA型别中,外阴感染HPV— DNA型别种类主要以HPV6(49.41%),HPV11(17.84%)感染 为主.其次为HPV43(6.14%),HPV42(4.39%),宫颈HPV型 别种类主要以HPV11(11.19%),HPV6(6.08%)感染为主,其次 为HPV43(4.70%),HPV42(3.13%).从表1中可知外阴和宫颈 感染低危HPV型别中HPV6,11的感染率差异有统计学意义, HPV42,43的感染率无统计学差异,结果提示在HPV低危型别 中HPV6,11的在外阴感染率超过在宫颈的感染率,而在外阴 和宫颈的低危HPV感染中HPV42,43无统计学差别. 在高危HPV—DNA型别中,外阴感染HPV—DNA型别种类 主要以HPV16(13.45%),HPV58(8.48%),HPV18(3.22%)为主. 宫颈HPv型别种类主要以HPV16(30.87%),HPV58(18.57%), HPV18(15.38%),HPV56(12-30%),HPV33(7.61%),HPV52(7.61%) 感染为主,从表2中可知外阴和宫颈感染高危HPV型别中 HPV16,58,18,56,33,52,59,31,35,39感染率差异均有统计学 意义,而HPV45,51,53,MM4差异无统计学意义.结果提示外 阴和宫颈均可伴有HPV高危型别的感染,但其感染率存在统 计学差异. 陈松波等嘲研究表明,女性外阴尖锐湿疣患者宫颈HPV感 染型别与外阴HPV感染型别基本相同.但其只是限于尖锐湿 疣患者且未说明各亚型的分布情况.本研究从表1,表2可知, 外阴HPV感染的HPV—DNA型别阳性例数的标准差为40.08. 而宫颈HPV感染的HPV—DNA型别阳性例数的标准差为 34.18.外阴HPV感染的HPV—DNA型别分布较集中,主要为 HPV6,11,16,而宫颈HPV感染的HPV—DNA各型别的分布虽 然以HPV16,18为主,但剩余型别与外阴HPV感染的HPV— DNA型别分布相比分布较分散.结果提示外阴与宫颈HPV感染 表2外阴和宫颈高危HPV—DNA型别检出率 19 由于存在二重感染和多重感染,HPV—DNA阳性例数多于总例数,在表2 中分别对外阴和宫颈各个相同高危HPV型别阳性例数采用卡方检验,外阴 和宫颈感染高危HPV型别中HPV16,58,18,56,33,52,59,31,35感染率之 间的P值均<0.05,而HPV45,51,53,39,MM4感染率之间的P值均>O.05 的HPV-DNA型别比较,前者型别较单一,且趋于HPV低危型别 的感染.由于HPv—DNA型别种类存在地域差异【引,本研究结果 显示.外阴和宫颈在感染HPV—DNA型别种类上存在差异,并 且大部分相同型别的感染率亦存在差异.外阴HPV感染主要 以低危HPV—DNA型别为主(HPV6,11),高危型别(HPV16)可 合并感染;宫颈HPV感染主要以高危HPV—DNA~DJ(HPV16, 58,18等)为主,同时可伴有低危型别(HPV18,16).此特点是否 与外阴和宫颈组织结构,生理环境不同有关尚待考证. [3】 [4] [5】 参考文献 GilbertG,DondersG.MariaGabrovskaeta1.Knowledgeof cervixcancer,humanpapillomavirus(HPV)andHPVvaccination atthemomentofintroductionofthevaccineinwomeninBel- gium[J].ArchGynecolObstet,2008,277:291-298. ZurHausenH.Papillomavirusinfections一一amajorcauseofhu— mancancers[J].BiochimBiophysActa,1996,1288(2):F55一 F78. BeutnerKR.TyingS.Humanpapillomavirosandhumandisease 明.AmJMed,1997,102(5A):9-15. 陈松波,肖亮生,吴华红,等.女性外阴尖锐湿疣患者宫颈HPV 感染情况分析『J】.广东医学,2010,31(16):2089—2090. CliffordGM,SwithJS,PlummerM,eta1.Humanpapillomavius typesiniuvasivecervicalcancerworldwide:aweta-analysis[J]. BrJCancer,2003.88:63-73.