QIAGEN试剂盒提取DNA步骤QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀,使用前检查,必要时65摄氏度预热溶解(注意加完乙醇后就不能再加热)
缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇(96%-100%)
1.研磨前擦拭工作台。
2.研钵里加入液氮,预冷。研磨材料,加3-5次材料,充分研磨。液氮预冷离心管后
加入材料,加至1/2或2/3处。若暂时不加缓冲液,就放入至液氮冷冻,用时拿出。拿出后立即轻轻开盖,防止材料喷出。
3.加入440μl缓冲液AP1(必须为预热好的),。盖好后使劲颠倒混...
QIAGEN试剂盒提取DNA步骤
缓冲液AP1和AP3/E可能在储藏过程中沉淀,使用前检查,必要时65摄氏度预热溶解(注意加完乙醇后就不能再加热)
缓冲液APW和AP3/E第一次使用时要加入适量乙醇(96%-100%)
1.研磨前擦拭工作台。
2.研钵里加入液氮,预冷。研磨材料,加3-5次材料,充分研磨。液氮预冷离心管后
加入材料,加至1/2或2/3处。若暂时不加缓冲液,就放入至液氮冷冻,用时拿出。拿出后立即轻轻开盖,防止材料喷出。
3.加入440μl缓冲液AP1(必须为预热好的),。盖好后使劲颠倒混匀材料和缓冲液。
4.加4μlRNase后,剧烈涡旋,使管底的材料也与液体混合。
5.将混合物在65摄氏度下温浴15min,每5min中上下轻轻颠倒试管2-3次。准备冰盒。
6.加入130μl缓冲液AP2,上下颠倒混匀,在冰上放置5Min。
7.14000rpm/min离心5min.
8.仔细缓慢将上层液体(500μl)置于QIAshredder Mini Spin Colum(柱)中(紫色)。
14000rpm/min离心2min.
9.将上步中的滤液(450μl)缓慢吸至一新的离心管(自己准备的Axygen离心管)中,注
意别吸到管底细胞碎片小球。
10.在溶解清液中仔细缓慢加入1.5倍体积(675μl)的缓冲液AP3/E。一定要仔细,慢
慢抽吸至两者充分混匀。
11.将上步中650μl混合液(包括形成的沉淀)加入Dneasy Mini Spin Colum(柱)中(白
色),其余的混合液留着,用于再次抽提。≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1Min,丢弃废液。准备灭菌的去离子水于65摄氏度水浴锅中预热。
12.剩余的混合液继续加入上一步的Dneasy Mini Spin Colum(柱)中,≥8000rpm/min(一
般用14000rpm/min)离心1Min,丢弃废液和收集管。
13.将Dneasy Mini Spin Colum(柱)下置试剂盒提供的2ml离心管(取时手不要伸进去,
隔着塑封袋捏出离心管)。加入500μl缓冲液A W,放置3-5min,≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1Min,丢弃废液,收集管再用一次。
14.Dneasy Mini Spin Colum(柱)中加入500μl缓冲液A W,放置3-5min,14000rpm/min
离心3Min,丢弃废液, 收集管再用一次。
15.Dneasy Mini Spin Colum(柱)中加入500μl无水乙醇,放置3-5min,14000rpm/min离
心3Min,丢弃废液和收集管
16.在Dneasy Mini Spin Colum(柱)下置1.5或2ml离心管(自己准备的Axygen离心管),
吸取100μl灭菌的去离子水(必须为预热的)加到Dneasy膜上。65摄氏度水浴5min。
≥8000rpm/min(一般用14000rpm/min)离心1min洗提DNA。
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