高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参碱、氧化苦参碱.doc

高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参碱、氧化苦参碱.doc 高效液相色谱法测定康妇灵胶囊中苦参 碱、氧化苦参碱 【摘要】 目的:建立康妇灵胶囊的含量测定方法。方法:采用高效 液相色谱法。色谱柱:Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm，5μm，流动相:乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(PH6.8)(16: 16:68)，流速:1.0ml?min,1，检测波长:220nm，柱温:30?。 结果:苦参碱在0.02,0.40mg?ml,1范围内线性关系良好 (r=0.9995);平均加样回收率为98.2%，RSD=1.4%(n=6);氧化 苦参碱在0.01,0.20mg?ml,1范围内线性关系良好(r=0.9997); 平均加样回收率为97.6%，RSD=2.2%(n=6)。结论:该方法简便 易行，结果准确可靠，可适用于康妇灵胶囊的质量控制。 【关键词】 高效液相色谱法 康妇灵胶囊 苦参碱 氧化苦参碱 含量 测定 Determination of Matrine Oxgmatrine content in Kangfuling capsules by HPLC 【Abstract objective】To set up a method for quality control of Fuyankang tablets. METHOD:HPLC method ination. The separation ed on Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm,5μm.The mobile phase ethanol-phosphate buffer (pH=6.8) (16:16:68).The flol?min-1 .The UV detection . The column temperature atrine g?ml-1 (r=0.9995) and 0.01,0.20 mg?ml-1 (r=0.9997) respectively, the average recoveries(n=6) ethod is simple and accurate, it can be used for quality control of Kangfuling capsules. 【Key atrine; Determination 康妇灵胶囊为《国家药品监督管理局标准(试行)》收载的品种， 由苦参、杠板归、黄柏、益母草、鸡血藤、红花龙胆、土茯苓、当 归等8种中药组成。具有清热燥湿、活血化瘀、调经止带的功效， 为妇科常用中药[1]。苦参含有苦参碱、氧化苦参碱等成分，我们采 用高效液相色谱法测定制剂中苦参碱、氧化苦参碱的含量，该项方 法操作简便、快速、准确可靠，可用于康妇灵胶囊的质量控制。 1 仪器与试药 1.1 仪器 LC-2010A高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站。 1.2 试药 苦参碱对照品(批号:100078-200414)，氧化苦参碱对 照品(批号:110780-200004)，由中国药品生物制品检定所提供， 供含量测定用;康妇灵胶囊为市售样品(贵州和仁堂药业有限公 司，规格:0.4g?粒,1，批号:20061108，20061202， 20061216)。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 纯。 2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:Agilent Technologies ZORBAX Extend-C18 4.6×250mm，5μm，流动相:乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(PH6.8)(16:16:68)，检测波长:220nm，流速:1.0ml/min，柱温:30?。 2.2 溶液配制 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷减压干燥12小时以上的苦参碱对照品和氧化苦参碱对照品各适量，分别加甲醇制成每1ml各含0.4mg的对照品贮备液;再精密量取苦参碱对照品贮备液和氧化苦参碱对照品贮备液各适量，加甲醇制成每1ml含苦参碱0.2mg、氧化苦参碱0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液。 2.2.2 样品溶液的制备 取康妇灵胶囊10粒内容物，研细，取约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨溶液2ml使湿润，再加三氯甲烷(CHCl3)30ml，超声处理(功率250l，滤过，滤液合并，置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.2.3 阴性对照溶液的制备 取除苦参以外的处方中其余药材的十分之一量，按法制成片，再按样品制备方法，制成阴性对照溶液。 2.3 专属性试验 分别精密吸取样品溶液、阴性对照溶液及对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪， 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 色谱图(图1)。由图1可见，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间(1氧化苦参碱:6.866min;2苦参碱:15.422min)的色谱峰，阴性试验无干扰，证明本法可行。 2.4 线性范围考察 精密吸取对照品贮备液各适量，分别加甲醇配成浓度分别为苦参碱:0.02、0.05、0.10、0.20、0.30、0.40mg?ml,1，氧化苦参碱:0.01、0.03、0.05、0.10、0.15、0.20mg?ml,1的溶液，摇匀，滤过，精密吸取续滤液各10μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积(A)为纵坐标，其浓度(C)为横坐标，线性回归，苦参碱回归方程为:A=4.34×105C，3.87×102，r=0.9995;氧化苦参碱回归方程为:A=1.21×104C，8.07×102，r=0.9997。结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，苦参碱在0.02,0.04mg?ml,1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系;氧化苦参碱在0.01,0.20mg?ml,1范围内峰面积与其浓度呈良好线性关系。 2.5 精密度 取样品(贵州和仁堂药业有限公司，批号:20061108)按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液，重复进样5次，进样量10μl，在上述色谱条件下求得苦参碱峰面积RSD为0.9%，氧化苦参碱峰面积RSD为1.2%，表明精密度较好。 2.6 稳定性试验 取样品(贵州和仁堂药业有限公司，批号:20061108)溶液，在0、2、4、8、24h分别进行测定。结果表明样品溶液在24h内基本稳定，苦参碱峰面积 的RSD为1.1%，氧化苦参碱峰面积的RSD为0.8%。 2.7 重复性试验 取样品(批号:20061108)共6份，分别按“2.2样品溶液的制备”方法制备样品溶液，进行测定，求得苦参碱含量的RSD为0.7%，氧化苦参碱含量的RSD为1.6%，表明重复性较好。 2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品(贵州和仁堂药业有限公司，批号:20061108，苦参碱含量3.01mg?g,1，氧化苦参碱含量2.42mg?g,1，平均装量0.3916g?粒,1)适量，共6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入苦参碱对照品溶液(0.2001mg?ml,1)、氧化苦参碱对照品贮备液(0.1000mg?ml,1)各适量，挥去甲醇，按“2.2样品溶液的制备“方法操作，得回收率试验溶液，依法测定，结果见表1。 2.9 样品含量测定 分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定三批样品中苦参碱、氧化苦参碱峰面积，按外标法计算其含量(n=5)，结果见表2。根据三批样品所测结果，暂定每粒康妇灵胶囊的苦参碱含量质控定量限为1.8mg，氧化苦参碱含量质控定量限为0.5mg。表1 苦参碱、氧化苦参碱加样回收率试验表2 三批样品含量测定结果 3 讨论 3.1 流动相的选择 笔者选择了三种流动相:?乙腈-0.1%磷酸溶液(20:80)(三乙胺调节PH值至8.0)[2];?乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(PH6.8)-三乙胺(18: 18:70:0.1)[2];?乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(PH6.8)(16: 16:68)。经多次测试结果表明，前两种流动相所得峰形较宽，含杂质多，而采用?乙腈-甲醇-磷酸盐缓冲液(PH6.8)为流动相所得样品峰形好，干扰成分少，故选此做为含量测定的流动相。 3.2 溶剂的确定 笔者比较了用甲醇溶解供试品及用流动相溶解供 试品，结果以甲醇为溶剂分离效果好，且保留时间短。 3.3 通过对3批样品中苦参碱、氧化苦参碱的测定，结果表明苦参碱最高含量为1.38mg?粒,1，最低为1.18mg?粒,1;氧化苦参碱最高含量为1.08mg?粒,1，最低为0.94mg?粒,1。综合考虑确定限量，每粒含苦参碱不得低于1.8mg，含氧化苦参碱不得低于0.5mg。 本方法结果准确，方法简便，重现性及回收率均理想，可以有效地控制产品质量。 【