一捻金及其去朱砂制剂的初步毒性试验研究

一捻金及其去朱砂制剂的初步毒性试验研究 一捻金及其去朱砂制剂的初步毒性试验研 究 PharmacyToday?20105V.1.20N..5? 一 捻金及其去朱砂制剂的初步毒性试验研究 金伟军,张志东,欧健薇 (1.暨南大学附属第一医院,广东广州510630;2.暨南大学药学院2005级,广东广州510630) 摘要:目的观察一捻金及其去朱砂制剂的急性毒性和亚急性毒性,比较两者与朱砂有关的毒性差异,为含朱砂制剂安全性再评价提 供依据. 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 (1)急性毒性试验:测定小鼠口服一捻金及其去朱砂制剂最大给药剂量;(2)亚急性毒性试验:采用2W龄SD大鼠随机 分为一捻金组(2.4g/kg),去朱砂组(2.4g/kg)和生理盐水对照组.各剂量组均每日灌胃给药1次,连续2W,测定血清生化指标,肝 肾脑的汞含量,并观察肝,肾,脑等主要脏器的组织形态学变化.结果(1)一捻金小鼠口服的最大给药剂量为19.2s/kg,相当于小儿 临床给药口服剂量的160倍,未见急性毒性反应.(2)亚急性毒性试验:动物的体重,脏器系数,血液生化学检查均未发现由于给药而 引起的变化.但一捻金组肝,肾,脑的汞含量明显高于去朱砂组和生理盐水对照(P<0.01);病理组织学检查发现,一捻金组大鼠的 肾脏有药物性病理改变.结论反复使用一捻金,主要脏器如肝肾脑的汞蓄积明显,并使蓄积较多的肾出现病理改变,一捻金的安全 性值得引起重视. 关键词:一捻金;朱砂;毒性;汞含量 中图分类号:R285.5文献标志码:A文章编号:1673—4610(2010)05—0010—03 PreliminaToxicologicalResearchofYinianjinandItsDecinnabarPreparation JINWei-jun,ZHANGZhi—dong,OUJian.wei (1.TheFirstAffiliatedHospitalofJinanUniversity,Guangzhou,Guangdong510630,China; 2.CollegeofPharmacy,JinanUniversity,Guangzhou,Guangdong510630,China) Abstract:ObjectiveToobservethetoxicreactionofYinianjinanditsdecinnabarpreparationoncinnabar,SOasto providereferenceforrevaluingtheclinicaldrugapplicationsafetyofYinianjin.Methods(1)Acutetoxicitytest:Maxi— mumdosewastestedbyoraladministration.(2)Subacutetoxicitytest:2WSDratswererandomlyassignedto3groups: Yinianjingroup(2.4g/kg),decinnabargroup(2.4g/kg),andsalinecontrolgroup.Allratswereintragastricallyad— ministrateddailyfor2W.Theinformationaboutbodyweight,bloodbiochemicalanalysis,concentrationofHg(CHg)and histopath0l0gicalexaminationofkidney,liver,andbrainweretestedandobserved.Results(1)Intheacutetoxicity test,themaximumdoseofYinianjinanditsdecinnabarpreparationwereboth19.2g/kg,equivalentto160timesofclini— caldailydoseforaninfant,andnoobviousadverseeffectwasobservedatthisdose.(2)Inthesubacutetoxicitytest, therewere110apparentchangesinducedbyYinianjininthestudyfindingsconcerningbodyweight,bloodbiochemistry test,andorganweights.TheconcentrationofCHginratsoftheYinianjingroupwashigherthanthoseofthedeeinnabar preparationgroupandthesalinecontrolgroup(P<0.01).TherewasalittledamageinthekidneyofratsintheYinian? jingroup.ConclusionLongtermuseofYinianjincancauseCHgaccumulationinmainorgans,asliver,kidney,and brain,andpathologicalchangeinkidney.ThesafetyofYinianjinshouldbepaidcloseattentionto. Keywords:Yinian3in;cinnabar;toxicity;concentrationofHg 基金项目:广东省医院药学研究基金(编号:2008A006) 作者简介:金伟军,副主任药师,Tel:020—38688466,E—mail:jinwj66@sina.corn 1O ? 2010年5月第20卷第5期?日药学 汞的毒性已众所周知,以硫化汞为主要成分的朱 砂的毒性也已引起人们的高度警惕和重视J.但目前 仍有大量的中药成方制剂含有朱砂,这些制剂多以经 ,七 典方为主,而且有相当数量的儿科制剂,如一捻金珍丸,小儿惊风散,小儿百寿丸等.由于历史原因,这 些制剂的基础研究非常薄弱,这类制剂的安全性再评 价显得尤为必要.一捻金原出自明《古金医鉴》,又名 "小儿一捻金",是儿科经典方.现收载于2005年版 《中国药典》一部,由大黄,朱砂等5味药制成散剂,具 有消食导滞,祛痰通便的功效,用于脾胃不和,痰食阻 滞所致的积滞,一捻金含朱砂5.66%,其毒性研究未见 报道.本文进行一捻金及其去朱砂制剂的初步毒性对 比研究,为重新评价一捻金的安全性提供参考. 1材料和方法 1.1药品 一 捻金(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂, 规格为1.2g/袋,批号:6100072);去朱砂一捻金制剂 (以下简称QZS,自制,由大黄100g,牵牛子(炒)200g, 槟榔100g,人参100g粉碎成细粉过100目筛,混匀而 得,批号:20081022);生理盐水(自制,批号:20080903). 1.2仪器 CX9全自动生化分析仪(美国Beckman公司); AFS320a双道原子荧光光度计(北京万拓仪器有限公 司). 1.3实验动物 昆明种小鼠,体重18,22g,雌雄各半,SPF级,由 南方医科大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK粤 2006-0015;SD大鼠,2w龄,体重4O,60g,雌雄各半, SPF级,由南方医科大学实验动物中心提供,许可证号: SCXK粤2006-0015. 1.4实验方法 1.4.1小鼠急性毒性试验取昆明种小鼠40只,随 机分成2组,雌雄各半,每组20只,分别为一捻金组和 QZS组.一捻金组以最大可给浓度0.24g/ml,最大可 给容量0.4ml/10g给小鼠灌胃一捻金混悬液1次,8h 后再进行第2次灌胃,累饴药剂量为19.2kg,连续 观察14d.Qzs组同样处理.分别观察小鼠的外观, 行为,排泄物的情况, 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 体重变化. 1.4.2大鼠亚急性毒性试验取SD刚断奶大鼠36 只,体重40,60g,雌雄各半,每组12只,随机分成3 组,分别为一捻金组,QZS组和生理盐水对照组,3组的 给药剂量分别为,捻金2.4kg,Qzs2.4g/kg,生理 盐水10ml/kg,每天给药1次.给药周期为2w,连续 给药6d后,停药1d,给药期间给予正常饲料和饮水. 给药时观察外观体征和行为活动,进食量,粪便性状及 体重变化等.给药结束后每组活杀大鼠6只,测定血 液生化指标,取肝,肾,脑称重计算脏器系数,测定脏器 汞含量并做病理学检查.剩余每组6只大鼠用于进行 水迷宫试验,考察一捻金对大鼠学习记忆的影响,将另 文报道. 脏器汞含量测定:按原子荧光法J,取器官(0.5— 1.0g)精密称定,以硝酸:高氯酸(4:1)50ml加热消 解至液体呈澄明,冷却,将液体完全转移至10ml量瓶, 定容至刻度得样品液.精密移取1ml样品液注入原子 荧光光度计测定汞的浓度,扣除空白样品的汞,换算得 脏器汞含量. 1.4.3统计学处理数据均以(元?S)表示,采用 SPSS13.0的ONEWAY—ANOVA方法进行统计学分析, 多重比较采用SNK法进行显着性检验. 2实验结果 2.1小鼠急性毒性试验 昆明种小鼠灌胃一捻金的最大给药剂量为19.2g/kg, QZS的最大给药量为19.2g/kg.小鼠给药后行动较迟 缓,但30rain内即可恢复.给药后14d内,小鼠活动, 进食,排泄均正常,生长良好,毛色光亮,体重增加,无 死亡.小鼠平均体重随实验时问的延长而增加,2组动 物体重相比,差异均无统计学意义. 2.2大鼠亚急性毒性试验 2.2.1一般体征状态各组大鼠外观体征,行为活 动,进食量,粪便性状及体重变化等各项情况均正常, 组间无显着差异. 2.2.2对大鼠肝肾脑脏器系数的影响一捻金组与 QZS组动物肝,肾,脑的脏器系数与对照组比较,差异 均无统计学意义(P>0.05),见表1. 表1一捻金和QZS对大鼠肝肾脑脏器系数的影响(?S) 注:脏器系数=[脏器重量(g)/体重(g)]×100% 2.2.3血液主要生化指标一捻金组和QZS组动物 与对照组比较,与肾功能有关的血液生化指标差异均 无统计学意义(P>0.05),见表2. PharmacyToday?20105V.1.20N..5? 注:ALT:丙氨酸氨基转换酶;AST:门冬氨酸氨基转换酶;ALP:碱性磷酸酶;Cr:肌 酐;BUN:血清尿素氮. 2.2.4对大鼠肝肾脑汞含量的影响由各组动物中 肝,肾和脑的汞含量(见表3)可知,肾的汞含量最高, 肝次之,脑最少.一捻金组动物肝,肾和脑的汞含量均 表3一捻金和QZS对大鼠脏器汞含量的影响(?) 比QZS组和对照组高(P<0.01),而QZS组和对照组 无显着性差异. 注:a:P<0.01,与对照组比较;b:P<0.叭,与QZS组比较. 2.2.5病理组织学检查各组动物均无肉眼可见的 病理改变.受检的6例一捻金组大鼠肾脏,有4例可 见肾小球轻度增生(100倍,图1);高倍镜下(400倍, 图2)可见系膜细胞轻度增生,肾球囊狭窄,内见红色浅 染污沉积,肾小管狭窄,内皮细胞肿胀,胞浆轻度颗粒 12 图1一捻金组大鼠肾脏病理切片(100倍) 图3对照组大鼠肾脏病理切片(100倍) 变性;问质未见充血和炎细胞.提示可能为药物毒性 所致.而QZS组和对照组大鼠的肾脏无明显病理学改 变,图3,4为对照组大鼠肾脏的病理切片(100,400 倍).一捻金组,QZS组和对照组大鼠的肝和脑均未见 明显的病理改变. 图2一捻金组大鼠肾脏病理切片(400倍) 图4对照组大鼠肾脏病理切片(400倍) (下转第21页) ? 2010年5月第20卷第5期?日药学 3讨论 研究 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 ,血清中TC,TG及LDL.C含量升高和 HDL-C含量降低是诱发动脉硬化和导致心脑血管疾病 的重要因素,高浓度LDL—C血症是动脉硬化的易患因 子.此外,动脉硬化的形成及肝损伤与脂质过氧化物 有关.血液中TC和TG的含量与血浆和肝脏中的脂 质过氧化物呈正相关J.血浆中LDL.C在过氧化作用 下形成氧化修饰的低密度脂蛋白(OX—LDL),ox—LDL 目前被认为是引起细胞内脂质聚集和泡沫细胞形成的 重要因素.目前国内外对于银杏叶提取物和茶叶提 取物单一成分已有较为深入的研究,但将二者配伍用 于防治心脑血管疾病的研究除本研究小组进行的工作 外鲜有报道"J.本实验通过血清学分析发现茶多酚能 有效的降低TC,TG,LDL—C,升高HDL.C,调节血脂水 平;升高MDA,降低SOD,具有抗脂质过氧化,保护肝细 胞的作用,可减轻自由基引起的肝损伤;同时促进肝内 脂质代谢,加速多余脂肪代谢,促进肝内脂质运转和排 泄,减缓肝脏脂肪变性程度和进度,有效抑制家兔高脂 血症的形成 参考文献 1吴锡宏,方显明.家兔实验性高脂血症模型的研究.广西中 医学院,2004,7(2):1—2. 2徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学.北京:人民卫生出 版社,2002.202—203. 3中华医学会肝脏病学会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒精 性脂肪肝病的诊断 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 .中华肝脏病杂志,2003,11:73. 4ChisolmGM,MarcSP.Oxidizedlipoprein.alteredcellfunction andatheroslersis.Atheroclerosis,1994,108(Supp1):521—529. 5金城,李会芳,魏丽,等.姜参胶囊对实验性脂肪肝的保护作 用研究.中成药,2009,1:135—139. 6IshigakiY,KatagiriH,GaoJ,eta1.hnpactofplasmaoxi— dizedlow—densitylipoproteinremovalonatherosclerosis.Circu— lation,2008,118(1):75—83. 7蒋琳兰,刘演波,赵树进.银茶胶囊心血管作用的实验研究. 中国药学杂志,2000,35:56. (收稿日期:2010—03—19) (上接第12页) 3讨论 3.1一捻金的小鼠急性毒性 一 捻金及其去朱砂制剂小鼠口服的最大给药剂量 均为19.2kg,相当于儿童(按1y儿童体重10kg计 算)临床给药口服剂量(1.2g/d)的160倍,无明显毒 性反应.文献报道,朱砂急毒剂量达24g/kg,对小鼠 未见明显毒性反应. 3.2一捻金的大鼠亚急性毒性 由于一捻金主要用于婴幼儿,因此,本研究采用刚 断奶的大鼠进行亚急性毒性试验.一捻金和Qzs对大 鼠的一般状况,肝肾脑的脏器系数以及反映肝.埒功能 的血液生化指标均无明显影响.但一捻金组大鼠肝肾 脑的汞含量明显高于QZS组和生理盐水对照组,表明 因一捻金含有朱砂而导致器官内汞的蓄积.病理检查 未发现一捻金组大鼠的肝和脑有异常,但肾已有药物 性病变,虽然反映肾功能的生化指标未见异常,说明组 织形态学对监测药物的肾毒性敏感性更高,这与文献 报道一致J.肾的汞含量明显高于肝和脑,汞在肾脏 的易蓄积性可能是导致肾脏毒性易于发生的主要原 因,提示临床不宜久服一捻金. 本文只是一捻金的初步毒性研究,旨在抛砖引玉, 以引起有关部门和同行对含朱砂且用于婴幼儿的制剂 的安全性的高度关注,希望能够投入必要的人力和物 力对这类制剂进行安全性再评价,以保障人民群众的 用药安全. 参考文献 1周超凡,林育华.传统中药朱砂应用概况及其安全性.药物 不良反应杂志,2008,10(3):184—186. 2毕雪艳.原子荧光法测定黄氧化汞眼膏中汞的含量.药物 分析杂志,2008,28(3):459—460. 3梁爱华,王金华,薛宝云,等.朱砂对大鼠的肝肾毒性研究. 中国中药杂志,2009,34(3):312—318. (收稿日期:2009—12—30) 21