三种PttKN1转基因植株的分子鉴定以及色素变异表型植株的分析.pdf.doc

三种PttKN1转基因植株的分子鉴定以及色素变异表型植株的分析.pdf.doc 兰州大学 硕士学位论文 三种PttKN1转基因植株的分子鉴定以及色素变异表型植株的分 析 姓名:阮美煜 申请学位级别:硕士 专业:生物学 细胞生物学 指导教师:王崇英 20100501 条 带 。上 述 结 果证 明 烟 草 、 彩叶草 和 红叶甜 菜 相 应表型 变异 应由 ,,,转 化所 引起 。 , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,, ,,,,籥 ,,,,, , , , ? ,籆 ‘, , 保 密 论 文 在 解 密 后 应 遵守此 规 定。 论文作 者签名:陋导 师签名: 兰州大学硕 ?学位 论文 第 一章前 言 区包 含 一个 三 氨基酸 环 模式。 根 据 序 列相似 性 和表达 模式的不 同 ，, , 基因可被 , , , , , , , , , , 。 尉 , ?， 类 基因在 茎顶 端 分生组 织, , , 男 纬 珊 臀 , 种 蟹 ? 又 匾 W饔 玫 鑑 , , , , , , , ， , , ; , , , ， , , ; , , , , ， , , ; , , , , , , , , ,,， ,,? 咴登 ,,,,,, , , , , , , : : : : : : : : 分 别 在 各 自 的: 转基 因 烟 : : : ( 草 中过 量表达 时，导 致 叶片 叶脉 紊 乱 、 ， 叶形 显著变 化 : : : : : ( ，: : : 。 : : , : : : : : : 因 拟 南芥 形成 缺刻: ( ，: : : , : 泶颣 : 叶: : : : : 的番 茄 形 : : : 蛞 煳 还 : 勘泶铮 : 匆 斗 种Τ 潭 缺纫 吧 : 吞 岣 : — : 拟 南芥 叶片 皱缩，叶裂 ，茎 的节 间 缩短，: ( ，: : : : : 花序小 而簇生: : : 在 : 烟 草 中过 量表达 时，产 生未 展 开 的有缺刻 的白 色 花冠 : : : : 能够下 调 : : 谋泶 铮: 佣 : 蠢〉 鹘 赟 : 中 中 央 区干 细胞 的数目 。存 在这样 一个 : 的 表达 : : : : : : : : 植物 激素 对 : : 的 作用 : : 鞍卓晌 : 諷 : 的低 : 状能也受到激素 水 平调 节 。 : : 态。也有研究 认为 : : , ,( ， ,,; ,,, , , , ,( ， ,,; ,,, 相 比 没 有 角度 的 扁平细 胞 ， 有 角度 的 圆锥形 细胞 可 以 增 加入射光 进 入表 皮细 胞 , , , , 苹果 树 , , , , 四 、 本 研究 的 目 的 与意 义 综 上所述 ，, , ，类 基因 ，作为 一种 转 录因 子 同 时 控 制 着 众 多 靶 基因 的 转 录 材 料与方 法 : : : 博 士 惠 赠 。红 花 烟 草: : : : : : : 迫 : (: : : : : : ， : : : : 尤 朐: : : 笥 遥 : 椅: : : : : : 胄 : 心 : : : : ヒ 掖 枷 闯 恋: 次 ， 在 超 净 台上 或 用 吹 风 机 吹 沉淀除 去 残留 乙 醇 。 : : : : : : : 簉: : ’ , , , 瓽 , , , , , , , , , , 篒, , ’ , , 瓵 , , , , , , , , , , , , ’ 反 应 体系 : , , , , , , , , , 反 应 程 序: 预变 性 , ? , , , , , , ， , , , , ? , ， , , , , 反 应 结束 后， 取 , , 电 泳 ， 照 相 。 材 料与方 法 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 膁 , , 溶液 溶 解过 夜 。 , , , 锛 , 倍 体积无水 乙 醇 和 , , , 寤 , , , , 胄 某恋 鞤 , 。 , , , 腨 , 液 体培养 基 中，, , 震荡 培养 。 , , , 尤 氡, 涞, ，充 分混 匀 ，迅速 腟, 冰 浴, , , 材 料与方 法 , , 。 体系 及 反 应 程序 同 , , (, , 褂 靡 , 顰 ? , 及 引 物 , , , , , 目 瞻 捉 海, 笊辖 乔 械, , 块 ; , , 鹁 , , 羲, 匆 淮 魏螅 , , , 航, 诒 湫 砸 褐 校, 椅乱 〈 , ×, , , 鹁 , , 羲, 匆 淮 魏螅 , , , 航, 谥 泻 鸵 褐 校, 椅乱 〈 , ×, , , , し湃 , , , , 胁 簧儆, 放 在尼龙膜上 ，一 次性 成 型 。 材 料与方 法 : : 转基 因 植 株 色 素相 关指 标测 定 : : 迫 〔 牧: : : : 谄 恐校: 靠 谠: 簦 : 糜 : : 婧阄孪 渲: : : : 魑 ?瞻 锥 哉 眨 : 舛: 艘 篛: : 值 。 : ， 过 滤 。 : : 值 : : 的 缓 冲 溶 液， 研磨 挤 : ， 摇 匀 。 : : 内 每 : 已 稀释 过 的 提取液重复 上 述 试 验 ， 得吸 光度分 别 为 : 、 : 、 : 。 : : ， : ? 过 夜 。 磨 碎 干 叶 片后 称 取: : , 酒 精 ， : ? 水 浴 : : : : : 迫 : , 乙 醇 和少量 碳酸 钙 、 石 : (: : 比色 皿 ， 测 : : 扑 恪, 堵趟 嘏 ǘ 龋篊 : : (: ×: : : : (: 卜 素浓 度: : : : : : : : : : : (: 为 样 品鲜 重， : : 为 稀释 倍 数 。 兰州大学硕 士 ,宦 踚 第 三章 实 验 结果 , , , 田 ,滩 荨? 耙 短 鸩 撕 筒 室 恫較 删 内 部 序列 ,,扩增结果 ,礟, 一 , 一 外 源 基 因 转 化 成功 ， 表 型 变 异 应 由, , , 转 化 所引 起 。 三 、 转 基 因 红 叶 甜 菜 的 , , , 的 鉴 定 譬 四 、转 基 因 植 株 的 基 因 组斑 点杂 交 及,,,,,,杂 交 为 探 针 ，检 授 ,;,蜓 滩荨? 鸩 撕 筒 室 恫荩 琍,,,,,,均 得 到阳 性 条带 ，阴 性 对 ,籇 ,,,,,,,蟗 ,, ,蕖 韑 女 ,,;,: ,,,,? “。 五 、色 素 音 量 变 化 生理 生化 分 析 彩 叶 草花 青 素相 对 含量 , 甌 , , , , , , , , 转 基 因 红 叶 甜 菜酪 氨 酸 酶含 量 分 析 , 。, , , 埂, 】 ， 高 于 转 化 型绿 色 株 , , , 甌 , , , , , , , , , , , , , , , , , , 转基 因 红 叶 甜菜 叶 绿 素 , , 和 类 胡 萝 卜素 含量 分 析 , , , , , 壬(,甶(,,畖 诩 冒 , 生 一 生 长咖 第 四章 讨论 与 结 论 , , , 目及 叶 序 的 改 变 ， 如 子叶 融合 、 缺 刻 、 子叶 大小不对 等 和 子叶 下 着 生异 源 分生组织 等 表 型 ;, , 仓 暄 丈 ǖ谋浠, , 绾 煲短鸩 擞 梢 吧, 秃 炀 ズ 煲侗 湮 ;凭 ヂ 桃叮 , , 植 株形态 的 改 变 ， 包 括茎 结 构 、 数 目、 形状等 的 改 变 ， 如 节间 距 缩 短植 株矮 化、 三 轮叶 序 彩 叶 草 的 六 棱柱 茎 、 扁 茎 、 次 级茎 和 主 茎 , , , ɑㄐ 蚓 , 显 著 增多 等 ; , , ( ， , , ;丁 伟 乔 真叶 形态 的 改 变 ， 包 括叶 片皱 缩 、 凹 凸 不平， 极性 消等 ， , , ;, , 失 ， 叶 脉 紊 乱 ， 成 熟叶 的 主 脉 , , , , ( ， , , ;如 叶 片相 关 的 形态 上 再 生叶 片、 叶 片边缘 或 顶 端产 生缺 刻 、 叶 片主 脉 一分, , 改 变 , , , , , , , , , ( ， , , , 为二 叶 片也 随 之 裂 开 等 表 型 。 籐 , , , , ( , , ;, 上 述 这 些 表 型 并 不是罕 有 ， 在多 种 , , , 转 化品 , 种 中 都 可 以见 到 , , , , 兰州大学硕 士 学位 论文 , , , , , , , ? ? ? ? ? ? ? ? ? , ? ? , ? ? ? ? 花 色改 变 ? 三 、 , , , 转 化植 株颜 色变 化机 制初探 经典 的 , , ， 过 表 达 表 型 涉 及 植 株局 部 或 整 体 形态 的 变 化， 却罕 有 色泽的 变 化。 在, , , 转 化彩 叶 草 和 红 叶 甜 菜中 ， 都 发 现 有 红 色色素 消失 的 表 型 。 由 于 两 类 植 株红 色素 组成 及 合 成 通 路 均 不同， 在彩 叶 草 中 形成 红 色的 色素 主 要 为花 青苷类 色 素 ， 而 红 叶 甜 菜中 为甜 菜红 素 ， 两 类 色素 一般 在同一植 物品 种 中 不会同时 出现 。 通 过 生理 分析 发 现 ， 转 基 因黄 茎 红 叶 甜 菜的 甜 菜红 素 和 转 化型 彩 叶 草 的 花 青素 含 量 都 , 发 挥重要 作 用 。 , , , 是从杂交 杨 茎 的维管束 形成 层中 分离 得 到 的一个, , 究选 取烟 草 、 彩 叶 草 和 红 叶 甜 菜三 类 植 株， 在鉴 定 了 其一系 列表 型 变 异 确由 , , , 转 化所 引 起 的 基 础 上 ， 对 彩 叶 草 和 红 叶 甜 菜两 种 转 化植 株中 出现 的 颜 色变 化表 型 做 了 一定 分析 ， 获 得 了 关 于 这 一表 型 发 生原因的 初步 认 识 ， 原因之 一可 能 为组成 型 表 达 的 , , , 与其他 调 控 色素 合 成 的 转 录 因子相 互 作 用 ， 且后者位 于 花 青素 和 甜 菜红 素 合 成 途 径的 上 游 ， 其更深 入的 研 究有 待 继 续 进行。 参 考 文 献 , , ,,,,,,,,,,? , ,,,, ,,,, ,,, ,,,， ,,琀 ,,,,,,,甌 , ,,,,, , , , , , , , , , , , , 参 考 文 献 , ,甁( ， ,,,,( ， ,,,甋 ,,,,, , , ,,,,,,瓹 ,,, , , , , , ,,,,,璊 姒,,琒,,,(， ,,(,,,,,,, , , ,,( ,, , , ,,,,,琘 ,,,,,琋 ,,,,,,琄 ,,， ,,琓 ,,,,,珿 ,,琓 ( ， ,,( ,,,,, , ,,, ,,,,,,,,,( ,,, , , ,,,,,,琇 ,,琂( ， ,,,,,琂( ， ,,,,,( ， ,,， ,,, 参 考 文 献 , , , , , ,,, , ,,,,,, , , , , ,,, , , , , , , , 参 考 文 献 , , , ,,,,琈 ( ， ,,,， ,,琯 ,,,,,,,琘 ， ,,,,， ,,,,,瓻,,, ,,,,甈 ,, , ,,,,， ,珼 ,,， ,,,,,甌 , , , ,,,， , ， ,,,,,， ,甊( ， ,,,,( ,琀 ,,,,,,,,甌 , , ,,, 参 考 文 献 徐全乐 ,,,兰州大学毕业论 文 图 凸 不 平 ; ,琀植 株 部分叶 片花青 素消 失 ; ,,昊ㄇ 嗨叵 ,В 篔出 现 两个 主 叶 脉 ; ,琇 叶 片 兰州大学埔 士 擎位 论文 图 版 说 明:转 ,,,辧 烟 草的典 型变 异 表型( ,吧 ,ぱ滩 荩築 转 化型烟 草。 兰州大学硕 士 学位 论 文 本 论 文 是在 王崇 英教授的 指 导 下 完成 的 。