丙酮酸激酶法检测冰冻红细胞解冻后残留甘油含量研究

丙酮酸激酶法 检测 工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训 冰冻红细胞解冻后残留甘油含量研究 丙酮酸激酶法检测冰冻红细胞解冻后残留 甘油含量研究 794TianjinMedLOct2007,Vol35No10 新技术交流 丙酮酸激酶法检测冰冻红细胞解冻后残留甘油含量研究 刘春燕张孝山李浩泷安蓬蓬刘玉河樊晶李彤彤刘晗王维 关键词红细胞甘油丙酮酸激酶乳酸脱氢酶类 低温冰冻红细胞保存技术是红细胞保存的重要方法之 一 ,通常使用甘油作为红细胞冰冻保护剂.甘油可以通过红 细胞膜使溶液的冰点降低,具有冷冻保护作用,但是甘油对红 细胞又有溶血作用,因此冰冻红细胞在输注前必须去除甘油, 使解冻后的甘油残留量控制在国家规定的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 (?10g/L)C, 以下,才能在输注后获得适当的存活率[21.笔者利用自动生化 分析仪建立了测定甘油含量的甘油激酶偶联丙酮酸激酶和 乳酸脱氢酶法(GK—PK—LDH),该方法测定简便,准确性和精 密度均适合甘油浓度的测定,而且无干扰, 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下. 1材料与方法 1.1材料(1)主要仪器:自动生化分析仪(AU-400,Olympus), 电子天平(MettlerToledo,ALl04);pH计(MettleToledo. Delta320).(2)试剂:甘油激酶(glycerolkinase,GK)日本东洋 纺绩株式会社生产;三羟甲基氨基甲烷(Tris,分析纯)购自上 海丽珠制药有限公司;ATP购自SIGMA;甘油(分析纯)天津 市大茂化学试剂厂生产;PK,LDH,NADH均购自天津联星生 物技术有限公司.(3)GlK_LDH工作液:每100mLTris-HC1 缓冲液(300mmol/L,pH7.6,25oC)中含1000U/LPK,1000 U几LDH,0.50mmol/LArrP,0.56mmol/LNADH,250U几GK. 冰箱2oC,8oC冷藏保存至少稳定半年以上.(4)甘油标准液: 用称量法精确配制5%(50000mg/L)的甘油储存液,然后根 据需要稀释成各种所需浓度的甘油标准液. 1.2方法 1.2.1测定原理NADH氧化速率与标本中甘油含量成正 比,NADH的最大吸收峰在340nm处,因此在340nm连续 监测吸光度的每分钟下降速率,计算甘油的浓度. 1.2.2测定参数主波长340nm,副波长410nm,试剂量 200IxL,样品量1O. 1.2.3线性测定范围精确配制甘油浓度为50,200,300, 500,800,1000,1400,1600,2000,2500,4000mg/L的标准 液,每个浓度同时测3份取其均值,观察线性测定范围. 1.2.4精密度试验(1)批内不精密度(CV%):取3份不同 浓度的甘油溶液,每个样品同时连续检测2O次,计算均值, 标准差及不精密度.(2)日间不精密度(Cv%):取3份不同浓 度的甘油溶液,每日每份样品连续检测3次,连续1O个工作 日,分别计算均值,标准差和不精密度. 1.2.5回收试验在一份含甘油基础浓度为500mg/L样品 中分别加入40O,600,800,1000,1200mg/L的甘油溶液,每 份标本同时测定3次,以其均值计算回收率. 1.2.6干扰试验参考Fujita等131的方法,用含甘油2异门L的 标准液,分别加入等量不同浓度的血红蛋白溶液,维生素C 溶液,胆红素,制备成含甘油浓度统一为1000mg/L的若干 份样本,每份样本连续测定3次. 1.2.737oC破坏实验取1O套试剂放在37温箱中,每隔 24h后取出1套试剂,分别对3个浓度的甘油进行检测,每 日每份样品连续检测3次,计算结果的准确性和精密度,以 此确定试剂的稳定性. 2结果 2.1线性测定范围甘油浓度在50,4000mg/L线性关系 良好,=0.0048+0.0001,r=0.9982,P<0.O1.为甘油浓 度,矿为OD值. 2.2精密度GK—PK—LDH法测得含低,中,高浓度甘油的 标本批内不精密度(CV%)分别为0.75%,O.82%和O.69%.日 间不精密度(CV%)分别为2.92%,2.30%和2.80%. 2.3回收率GK—PK—LDH法测得平均回收率为98.6%. 2.4干扰实验样品中血红蛋白高于1.5g/L或胆红素浓度 在51-229.5Ixmol/L时对GK—PK—LDH法无干扰;样品中维 生素C浓度在0.02,3g/L时亦无干扰. 2.537破坏实验通过计算结果的准确性和精密度,发 现GK—PK—LDH试剂在37保存直至第8天测定结果稳 定,说明本试剂稳定性好. 3讨论 长期以来在采供血系统一直沿用过碘酸钠氧化滴定法和 GK—GPO—POD}4li去.前者操作繁琐,耗时长,且为指示剂终点滴 定法,结果靠肉眼判断,后者抗干扰性差,试剂不易保存.本文 结果显示,GK—PK—LDH法测定冰冻红细胞中解冻后残留甘 油含量具有快速,特异,灵敏度高,重复性好,试剂稳定,无干 扰等优点,使测定结果更加客观,准确.测定时间视所使用仪 器而定,一般需8,15min.本研究为解冻红细胞中残留甘油浓 度的测定提供了准确,简单易行的方法. 参考文献 【1】中华人民共和国质量监督检验检疫总局.全血及成分血质量要 求(GB18469-2001)【S】.北京:中国标准出版社,2001:5-6. 作者单位:300110天津市血液中心 天津医药2007年1O月第35卷第1O期 【2J王培华主编.输血技术学【MJ.第2版.北京:人民卫生出版社, 1998:63—65. 【3JFujitaT,KawakamiY,KohdaS,eta1.AssayofmagnesiuminSerum andurinewithUSeofonlyoneenzyme,isocitratedehydrogenase (NADP)[J1.ClinChem,1995,41(9):1302—1305. 795 【4】王庸晋主编.现代临床检验学【MJ.北京:人民军医出版社,2000: 341-344. (2006-10.31收稿2007-04.29修回) (本文编辑孙东建) 火海征对甲状腺功能异常的诊断价值 黄淑华 关键词甲状腺功能减退症甲状腺功能亢进症超声检查,多普勒,彩色诊断 甲状腺功能亢进(甲亢)或甲状腺功能减低(甲减)均为甲 状腺功能异常,是I临床常见内分泌疾病.笔者通过对121例甲状 腺疾病患者彩色多普勒(cDn)超声与实验室检查结果对照比 较,探讨彩色多普勒超声对甲状腺功能异常的诊断价值. 1资料与方法 1.1一般资料2001年10月一20o5年5月共收集我院 121例疑诊甲状腺疾病并出现火海征者,其中男20例,女 101例,年龄12,56岁,平均38.4岁.患者均经实验室检查证 实甲状腺功能有无异常. 1.2方法应用美国Aeuson128XP/lOc彩色多普勒超声诊 断仪,探头频率5,10MHz,患者取仰卧位,充分暴露颈部,探 头置于甲状腺区直接探查.首先应用二维超声观察甲状腺大 小,形态和内部回声,然后应用CDFI观察甲状腺内血流分布 情况,并于甲状腺上极处清晰显示甲状腺上动脉.观察其走 向,测量内径,应用脉冲多普勒取样,角度<60.,选择清晰频 谱测量其收缩期最大流速(Vmax).再行血清促甲状腺激素 (TSH),三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4)放射免疫检查. 2结果 放射免疫检查证实甲亢77例,甲减44例.甲亢患者二 维超声示甲状腺弥漫性肿大,回声增粗,分布尚均匀.CDFI 显示甲状腺内血流极为丰富,整个甲状腺实质内,包括腺体 周边部均可见许多搏动性血流,呈五彩缤纷,故称火海征.本 组甲减患者均为亚临床甲状腺功能减低(亚甲减),二维超声 示腺体增大,形态饱满,腺体光点回声增粗,分布欠均匀. CDFI显示血流信号明显增多,为点条状及斑片状搏动性五 彩血流信号,部分患者彩色血流信号相互融合成大片状,几 乎布满整个甲状腺组织,也呈火海征.两者甲状腺上动脉内 径均增宽,走行弯曲.甲状腺上动脉流速均增高,但亚甲减患 者甲状腺上动脉流速增高的程度不如甲亢患者(两者数据有 重叠).甲亢患者脉冲频谱为高速湍流频谱,频谱高耸,频带 增宽,舒张期波幅明显增高,常紧贴收缩期后陡坡下降.亚甲 短篇与病例报告 减患者脉冲频谱波峰较钝,流速相对低,舒张期血流下降较 缓慢. 3讨论 甲状腺腺体内布满斑片状彩色血流信号,呈搏动性闪 烁,称为火海征,一直被认为是甲亢所特有的声像图特征【I】, 这种火海样表现不存在于正常人和其他甲状腺疾病患者中. 然而,由于缺碘等因素引起的亚甲减患者也有类似的表现, 其CDFI特点与甲亢患者大致相同,甚至血流更丰富.原发性 甲状腺功能亢进是一种自身免疫性疾病,好发于中青年女 性,患者甲状腺功能增强,甲状腺激素(IH)合成,分泌过多, 交感神经兴奋性增高,腺体内血管增生,扩张,充血,血流量 增加目.亚甲减常见原因有慢性淋巴细胞性甲状腺炎和缺碘 等,缺碘等因素导致甲状腺内血管和腺体代偿性增生,血管明显 增多,管腔扩张充血.因此两者CDFI均出现火海征. 综上所述,火海征并非甲亢所特有,由于亚甲减时的火 海征在超声图像上很难与甲亢相区别,因此要参考甲状腺上 动脉流速及频谱特征,还必须结合临床,进一步行放射免疫 检查血清TSH,T,,T4以明确诊断.动态观察甲状腺内血流变 化可反映甲状腺功能恢复情况,但腺体结构恢复晚于功能恢 复131.彩色多普勒超声为两种疾病的治疗效果观察提供了一 种新的检查方法,其简便,快捷,无创,可重复多次检查,对临 床有一定的实用价值. 参考文献 【1】孔学军,刘莉.彩色多普勒超声在弥漫性甲状腺疾病诊断中的应 用【J】.临床超声医学杂志,2002,4(5):309. 【2】王蓓,许亮,来蕾,等.彩色多普勒超声对甲状腺功能异常诊断价 值m.中国超声诊断杂志,2004,5(12):897—900. 【3】张海福,李亚玉,赵世怡.GRAVES病甲状腺激素与彩色多谱勒 血流显像对照分析【J】.医学研究通讯,2001,30(4):53—54. (2oo6.10.27收稿2006.12.29修回) (本文编辑李淑杰) 作者单位:300140天津市第四中心医院超声科