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石蜡包埋石蜡切片及HE染色过程 一石蜡切片 1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2~0.3cm为宜. 取材时间越快越好. 2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定. 注意: (1). 固定液量应为组织块体积的40倍. (2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h. (3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长. (4)固定容器应大些. 3. 漂洗: 流水冲洗2—10h. 4...

石蜡包埋
石蜡切片及HE染色过程 一石蜡切片 1. 取材: 刀片要求锋利而薄,组织厚度约2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2~0.3cm为宜. 取材时间越快越好. 2. 固定: 组织取下后应立即放入10%福尔马林(相当于4%甲醛)固定. 注意: (1). 固定液量应为组织块体积的40倍. (2) 固定时间固定时间与使用的固定液种类和组织块大小, 温度等有关. 一般为3—24h. (3)固定温度大多可在室温固定, 在低温(4℃)时间应延长. (4)固定容器应大些. 3. 漂洗: 流水冲洗2—10h. 4. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精. 70%(数分钟)→80%(60-120’)→90%(60-120’)→95%(60-120’)→95%(60-120’)→100%(60-120’)→100%(6 0-120’). 5. 透明: 组织块脱水后必须经过一种既能与酒精混合又能溶解石蜡的溶剂, 而使石蜡进入组织块. 常用二甲苯, 一般浸泡30m即可. 6. 浸蜡: 组织经透明后在熔化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡. 一般需经2—3次浸渍才能完成, 总时间为3—4h. 用于浸蜡的石蜡熔点为52—56℃. 7. 包埋: 先将熔化的石蜡倒入包埋框再用加热的镊子将组织块放入. 包埋面必须平整. 包埋后石蜡稍凝后可移入冷水或冰箱中加速凝固. 8. 切片: 修块→切片→展片→捞片→烤片. 二HE染色 1. 染色前切片处理 (1) 脱福尔马林色素. (2) 脱汞盐结晶. (3) 脱黑色素. 2. 染色步骤 二甲苯脱蜡(10’)→ 无水乙醇洗去二甲苯(1’×2次)→95%酒精(1’)→90%酒精(1’)→85%酒精(1’)→自来水洗(2’)→苏木精染色(1—5’)→自来水洗(1’)→1%盐酸酒精分化20s→自来水洗(1’)→稀氨水(1%)反蓝30s→自来水或蒸馏水洗(1’)→伊红染色(20s—5min)→自来水洗(30s)→85%酒精脱水(20s)→90%酒精脱水(30s)→95%酒精(1’)→95%酒精(1’)→100%酒精(2’)→100%酒精(2’)→二甲苯(2’)→中性树胶封片. 3. 染色结果: 细胞核呈兰色, 胞浆呈红色. 三盐酸酒精的配制 浓盐酸0.5—1ml + 75%酒精99ml. 此液用一段时间后需延长或更换液体, 新液体分化时间要短. 脑组织的石蜡包埋过程中有很多干预因素,一个环节处理的不好就会影响整个实验,我把我们的制作 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 说一下,供参考。 1,后固定充分的脑组织放于0.01mol/L PBS中,40minx3次 2,50%的酒精4小时 3,70%4小时 4,80%4小时 5,90%过夜 6,95%6小时(1.5x4次) 7,100%6小时(1.5x4次) 8,二甲苯透明的时间要看组织块大小了,一般我们的经验是4毫米厚的组织块一般是45分钟,基本可以。薄一点呢就取40,后一点就取50,这步其实很关键,建议taratara 先用一个空白组的大鼠脑组织先做一次,看条件怎么样,然后再调整一下时间。 9,浸蜡,一般是4.5--5小时,蜡一1小时,蜡二1小时,蜡三2.5--3小时。 以上就是我们的作法,希望对你有所帮助。 如果脑组织不能及时包埋,就用原来的固定液继续固定,放于4度冰箱中,最好不要时间太长,小于一个月,越早包埋越好。 祝实验顺利! 脑组织包埋过程基本上和其它组织是相同的。 但对于某个具体的组织块来说,脱水、透明、浸蜡的时间需要摸索。虽然相差不大,可是有些原则。比如: 1.在组织块大小相同的情况下处理疏松的组织需要较短一点的时间; 2.肌肉组织比脂肪组织时间短; 3.纤维组织比结构细腻、细胞成分多的组织时间长。 4.组织块越大需要处理时候越长;等等。 所以你处理脑组织的具体时间需要自己摸索,并不是有很现成的步骤的。 建议你去病理科, 是因为这些过程不是一次两次就可以摸索透彻的。 病理科一般不会擅自切你的标本的,也不会切掉你需要的组织。他们只是包埋,又不是帮你取材。 你的目的是做HE切片或者免疫组化之类的实验吧?如果不去病理科,难道你连片子也自己切吗? GOOD LUCK! 我们实验室的做法通常是: 固定: 组织取下后应立即放入4℃的4%甲醛过夜.(注意:固定液量应为组织块体积的20倍.)脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精依次:(注意:不能时间太长,否则组织易碎。) 70%酒精1min----80%酒精2-4小时----95%酒精2-4小时----95%酒精2-4小时----100%酒精2-4小时----100%酒精2-4小时。 透明: 常用二甲苯, 一般浸泡30min即可. 浸蜡: 组织经透明后放入熔化的石蜡(熔点为52℃)内,1小时/次,共三次。 可以试一下冰冻切片,我们实验室先是用石蜡做大脑的免疫组化,后发现冰冻孵片法方便,而且抗原丢失少,具有很多优点。 我们石蜡的过程如下: 1. 前固定:脑组织最好经心脏灌流进行前固定——麻醉动物,暴露心脏,从左心室灌注生理盐水或0.1M PBS几百毫升(一般为动物体积2-3倍),同时在右心房剪一口。然后再灌注几百体积4%多聚甲醛等固定液。 2. 后顾定:然后取脑,置于固定液中后顾定24小时 3. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精依次:(注意:高浓度酒精时间不能太长,否则组织易 碎。) 70%酒精可过夜--80%酒精2小时--95%酒精1小时两次--100%酒精1小时两次。 4. 透明: 1:1酒精二甲苯1小时--常用二甲苯, 一般浸泡30-45min即可。 5. 浸蜡: 组织经透明后放入熔化的软蜡(熔点为52-54℃)内,2小时;然后入硬蜡(熔点56-58℃)2-3小时。 6. 包埋: 将熔化的硬蜡倒入包埋框再将组织块放入,放入时不能有气泡。 建议:大鼠脑袋大,若不影响实验可切开,有利于上述步骤。 祝试验成功! 石蜡的过程如下: 1. 前固定:脑组织最好经心脏灌流进行前固定——麻醉动物,暴露心脏,从左心室灌注生理盐水或0.1M PBS几百毫升(一般为动物体积2-3倍),同时在右心房剪一口。然后再灌注几百体积4%多聚甲醛等固定液。 2. 后固定:取脑,置于固定液中后固定液24小时。 3. 脱水: 从低浓度酒精到高浓度酒精依次:(注意:高浓度酒精时间不能太长,否则组织易碎。)70%酒精可过夜80%酒精2小时95%酒精1小时两次100%酒精1小时两次。(50%酒精6小时,70%4小时,80%4小时,90%过夜,95%1.5小时x 4次无水1.5小时x4次) 4. 透明: 1:1的酒精和二甲苯1小时常用二甲苯, 一般浸泡30-45min即可。(二甲苯透明10分x4次) 5. 浸蜡: 组织经透明后放入熔化的软蜡(熔点为52-54℃)内,2小时;然后入硬蜡(熔点56-58℃)2-3小时。 6.包埋: 将熔化的石蜡倒入包埋框再将组织块放入,放入时不能有气泡.(注意:1.包埋面必须平整,否则不好切片!2.建议石蜡最好反复融化几次,以使其变得更加致密,便于以后切片。) 7.切片:组织厚度2mm 建议:大鼠脑大,若不影响实验可切开。 继续阅读
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分类:医药卫生
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