★EBER检测试剂盒(原位杂交)
规格: 20 人份 50 人份 S30172 S30173 产品型号:
EBER检测试剂盒(原位杂交) EBER检测试剂盒(原位杂交)
(操作之前请详细阅读此说明书)
检测原理和意义 ,
EBER是EB病毒编码的小RNA,是EB病毒的
表
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达产物,在EB病毒感染的细胞核中以高拷贝数存在。根据EBER的特有序列
设计
领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计
的EBER单链 DNA探针能特异地与EBER靶序列互补、杂交,从而检测EB病毒是否存在。此方法检测石蜡组织切片中的EB病毒具有极高的特异性和灵敏性。目前EBER原位杂交已成为组织和细胞中EB病毒的标准检测方法,在国际上广为使用。
, 试剂盒提供的
材料
关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料
和试剂
提 供 量 成 份 保存方法 20人份 50人份 1 EBER杂交液 -20? 400ul 1.0ml 2 蛋白酶K 4? 40ul 100ul 3 一抗 4? 1ml 2.5ml 4 二抗 4? 1ml 2.5ml 5 HRP聚合物 4? 1ml 2.5ml 6 DAB底物 4? 1ml 2.5ml 7 DAB 4? 20ul 50ul
8 18X18mm盖玻片 4?/室温 20片 50片
30ml 30ml 9 湿盒增效液 4?/室温
(注意:EBER杂交液请 -20?保存)
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EBER检测试剂盒 EBER检测试剂盒 泰普生物TRIPLEX
, 用户自备材料和试剂
1. 8. 55?恒温培养箱 二甲苯
2. 9. 37?恒温培养箱 酒精
3. 10. PBS(pH=7.6) 光学显微镜
4. 11. 移液器 苏木素
5. 12. 计时器 氨水
6. 13. 玻片染色缸和染色架 盐酸酒精
7. 湿盒2个
, 实验前需配试剂
30,湿盒增效液
取湿盒增效液及蒸馏水,按3:7配制成30%湿盒增效液备用。 , 实验时需配试剂
1XK A、蛋白酶
将蛋白酶K与1×PBS按1:25的比例配制备用。 (现配现用)B、DAB显色液
50的比依据需要配制DAB显色液,以可覆盖整个组织的量为宜。取DAB与DAB底物,按照1:
例混匀,避光保存备用。(现配现用)
, 操作步骤
1(切片处理:将4um厚度的组织粘附在APES处理的载玻片上,切片于60-70?烘烤60分钟以上。
(建议每次实验同时附加阳性、阴性对照片)
2(脱蜡及水化:
溶液 次数×时间(分) 二甲苯 3 × 10 100%酒精 1 × 3
95,酒精 1 x 3
80%酒精 1 × 3
蒸馏水 1 x 3
(注意:使用过的二甲苯,应相应延长脱蜡时间,以保证脱蜡完全)
(蛋白酶K消化:甩干切片, 将组织周围液体用滤纸吸干, 每张切片滴加适量1×蛋白酶K工作液(约3
50 ul,根据组织大小增、减量), 室温孵育5分钟。蒸馏水洗涤1×1分钟,小心擦干组织周围液
体。
4(杂交:
4.1 每张切片滴加适量杂交液(约20 ul,根据组织大小增、减量),并加盖玻片(本试剂盒配备,可
; 根据加入杂交液量进行剪裁)
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4.2 放置水湿盒中,55?恒温箱孵育60-90分钟;
4.3 转至37?孵育4-16 小时30%。建议过夜16以保证低(放置于湿盒增效液湿盒中)(,小时)
拷贝样本的杂交效果;
4.4 48?(PBS 预温)浸泡切片,小心移去盖玻片,继续浸泡5分钟;
4.5 48? PBS洗涤3x 5分钟 (轻微振荡容器);
注意:盖玻片规格应与杂交液量匹配,(切片在整个试验过程中要保持湿润状态,防止干片)5(信号放大与显色:
(50 ul)约,根据组织大小增、减量5.1 小心擦去组织周围液体,滴加适量一抗,37?,水湿盒中孵
(轻微振荡容器) 育30分钟;37? PBS浸泡3x2分钟;
5.2 小心擦去组织周围液体,滴加适量二抗(约50 ul,根据组织大小增、减量),室温,水湿盒中孵育
20分钟;室温PBS浸泡3x2分钟 (); 轻微振荡容器
5.3 小心擦去组织周围液体,滴加适量HRP聚合物(约50 ul,根据组织大小增、减量),室温,水湿
盒中孵育30分钟;室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。
5.4 小心擦去组织周围液体,滴加适量DAB显色液(约50 ul,根据组织大小增、减量),室温,水湿
盒中孵育约10分钟(不同样本的显色时间可能有所差别,建议镜下观察显色过程);室温PBS
浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。
5.5 自来水冲洗,苏木精复染(可用盐酸酒精分化及氨水返蓝)。梯度酒精脱水,中性树胶封片。
, 阳性结果判断标准:仅为细胞核着色。胞浆和胞膜着色不能视为阳性,只有当核分裂时可以出现胞浆阳性着色。
其他事项: ,
本试剂保质期为12个月。客户在收到产品时请及时检查,如发现有外包装破损、试剂盒成分不全等产品问题,或者在使用过程中有任何疑问,请及时与泰普客户服务中心联系,我们将及时为您解决。
公司信息: ,
公司名称:福建泰普生物科学有限公司
总部:福建省福州市金山金洲北路7号金山科技企业孵化器7号楼4层 邮编:350002
电话:800-804-8333,0591-2805 3600 传真:0591-2805 3700
研发中心:北京市昌平区北清路中关村生命科学园创新大厦A座207室 邮编:102206
电话:010-8072 0071 传真:010-8072 0072
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操作步骤简表 ,
操 作 参 数 1 二甲苯 3X10’ 2 100%酒精 1X3’ 3 95%酒精 1X3’ 4 80%酒精 1X3’ 5 蒸馏水 1X3’ 6 酶消化 室温,5’ 7 蒸馏水 1’ 8 加杂交液 适量 9 55?变性 60’-90’ 10 30,湿盒增效液的湿盒中孵育37?,4-16h
1-5+5 11 PBS(用前48?预温)脱片,浸泡 ’’
3X5 12 PBS(用前48?预温)浸泡 ’13 加一抗 37?,30’ 14 PBS(37?)浸泡冲洗 3X2’ 15 加二抗 室温,20’ 16 PBS浸泡冲洗 3X2’ 17 HRP聚合物 室温,30’ 18 PBS浸泡冲洗 3X2’ 19 DAB显色 室温,2-10' 20 PBS浸泡 3X2’ 21 自来水冲洗 1’ 22 复染,脱水,封片 常规
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