载脂蛋白e基因多态性对高海拔区藏、汉、回族人群血脂的影响

载脂蛋白e基因多态性对高海拔区藏、汉、回族人群血脂的影响 载脂蛋白E基因多态性对高海拔区藏、汉、 回族人群血脂的影响                                                    作者: 张卫泽 李星辉 陈永清 马凌 张明旭 乔燕 【摘要】  目的:检测载脂蛋白E,Apo E,基 因多态性并探讨其与高海拔区藏、汉、回族人群血脂水平之 间的关系. 方法:藏族人120例～汉族人131例～回族人100 例,采集静脉血～检测三酰甘油,TG,、总胆固醇,TC,、高 密度脂蛋白胆固醇,HDL c,、低密度脂蛋白胆固醇,LDL c,等～提取DNA～以聚合酶链反应 限制性片段长度多 态性方法(PCR RFLP)进行DNA多态性分析～电泳判断基因 型. 结果:三民族携带E4等位基因者与携带E2, E3者相比 具有TG, TC, LDL c逐渐增高的趋势～藏族人尤为明显 ,P<0.01). 结论:高海拔区藏、汉、回族人群中～Apo E 基因E4等位基因与高血脂相关. 【关键词】  载脂蛋白E 基因多态性 血脂 藏 汉 回族      0引言     载脂蛋白E,apolipoprotein E, Apo E,是血浆脂蛋白的一个重要组成部分～是一种多态性蛋白. 流行病学资料表明Apo E基因多态性对血脂浓度有十分明显的影响,1,. 我们对高海拔区藏、汉、回三民族Apo E基因多态性进行了观察研究～旨在探讨Apo E基因多态性与这些人群血脂水平的关系.     1对象和方法     1.1对象2005 10/2006 04甘肃省甘南藏族自治州人民医院与藏医院门诊体检者351人～其中藏族人120,男73～女47,例～年龄(47.8〒9.3)岁,汉族人131,男74～女57,例～年龄,48.1〒11.2,岁,回族人100,男63～女37,例～年龄,44.3〒10.5,岁. 以上样本之间无血缘关系～为世居高原地区相对隔离的遗传人群.  并进行有关检查排除了肝肾功能疾患、糖尿病等疾病.     1.2方法常规酚 氯仿法提取DNA～聚合酶链反应 限制性片段长度多态性,PCR RFLP,方法进行DNA多态性分析. 设计引物～上游(P1) 5′ AACAACTGACCCCGGTGGCG 3′～下游(P2) 5′ ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC 3′,进行PCR. 扩增产物用Hha I 酶切,将酶切产物聚丙烯酰胺凝胶电泳～银染色～基因型判读. 检测到E2/2, E2/4, E3/3, E3/4, E4/4五种基因型～电泳分离显示:E2/2为91 bp～83 bp～63 bp,E2/4为91 bp～83 bp～72 bp～63 bp,E3/3为91 bp～63 bp,E3/4为91 bp～72 bp～63 bp,E4/4为72 bp～63 bp. 所有人群采用日立7170型全自动生化仪检测清晨空腹时静脉血甘油三酯,TG,、总胆固醇,TC,、低密度脂蛋白胆固醇,LDL c,、高密度脂蛋白胆固醇,HDL c,等血液生化指标. 参照1997年全国血脂异常防治对策专题血脂测定的新参考值,2, . 统计学处理:所有计量资料以x〒s表示～计数资料以频数表示～采用SPSS 10.0统计软件进行数据分析. 组间均数比较采用方差分析及两两比较～基因频率之间的比较采用四格表χ2检验.     2结果     2.1汉、藏、回族人血脂测定值见表1.表1三民族受试者血脂测定值     2.2汉、藏、回族Apo E基因型分布本实验我们检测到E2/2～E2/4～E3/3～E3/4～E4/4五种基因型～未检测到E2/3基因型. 汉、藏、回族之间有统计学差异,P<0.01)～汉族以E3/3常见～而藏、回族以E3/4常见,表2,. 表2三民族Apo E基因型分布频率比较     2.3汉、藏、回族Apo E基因型与血脂水平的关系根据Apo E基因型将研究对象分为Apo E2携带者E2,X(E2,2+ E2,4), E3/3携带者和E4携带者E4,X (E4/4+ E3/4)三类. 发现TG值E4携带者高于E2携带者,P=0.019,～藏族高于汉族,P=0.026,,TC值E4, E3携带者高于E2携带者,P=0.010～P=0.023,～藏族高于汉族与回族,P=0.019～P=0.039,,LDL c值E4, E3携带者高于E2携带者,P=0.001～P=0.004,～藏族高于汉族与回族,P=0.017～P=0.026,,表3,.     3讨论 Apo E是血浆脂蛋白的组成成分之一～在脂蛋白代谢中起重要作用,3,. Apo E基因有三种主要的异构体Apo E2～Apo E3～Apo E4～人群中具有6种表型～即三种纯合子,E2/2～E3/3～E4/4,和三种杂合子,E2/3～E2/4～E4/3,. Apo E基因多态性的分子基础源于在112位和118位上半胱氨酸,Cys,和精氨酸,Arg,单个氨基酸的相互取代～E3为112位上是Cys～158位上是Arg,E2则为112位和158位上均是Cys～E4则为112位和158位上均是Arg. 这种单个氨基酸不同造成的异构体就是由Apo E基因多态性决定的,4,.表3三民族Apo E基因型与血脂水平的比较(汉=131,藏=120,回=100,mmol/L, x〒s) Apo E调节血脂代谢～不同Apo E基因型可能会影响个体的血脂水平. 众多的研究结果已普遍认同:E4等位基因与高水平血TC和LDL c显著相关～而E2等位基因的作用恰恰相反. Apo E2人群血TC～LDL c水平最低～Apo E4人群血清TC～LDL c水平最高～Apo E3人群位于二者之间,5,～Apo E2的“降胆固醇作用” 1是Apo E4的“升胆固醇作用”的2，3倍,6, . 在整个人群中～E2,2～E4,4～E2,4者的血浆TG明显高于E3,3者～提示E2～E4等位基因均与血浆高TG浓度有关. 但有些学者认为E4对TG无明显影响,7,. Apo E作为血浆脂 蛋白的一个重要组成部分～直接参与脂蛋白的构成、转化和代谢(其对血脂代谢的调节可能与各等位基因编码的Apo E异构体与脂蛋白的受体的亲和性及其在体内的代谢不同有关,8,. 我们测定了高海拔区汉、藏、回族共351名研究对象的Apo E基因型～结果发现:汉族以E3/3常见～而藏、回族以E3/4常见～三民族TG～TC和LDL c值E4携带者高于E2携带者～而藏族明显高于汉族和回族. 高海拔区藏族群众在饮食上多以牛羊肉、奶酪、酥油等高脂肪类食品为主～并其特殊的宗教信仰关系多禅坐诵经～加之气候寒冷～较少室外运动～因此较汉、回族有血脂更紊乱的趋势～这进一步证明了Apo E不同等位基因与血脂代谢的相关性. 总之～本研究初步从分子基因水平对高海拔区汉、藏、回族Apo E基因与血脂水平的关系进行了分析～更大样本量的研究可能会有更大意义的发现. 综上针对高海拔区藏族群众更应当加强宣传和教育,提倡合理饮食,坚持运动煅练等～并应有计划、有重点的对这些人群予以Apo E基因的检测～从而对预防、筛选及早期诊治这些人群血脂异常具有一定的意义. 【参考文献】   ,1, Srinivasan SR, Ehnholm C, Elkasabany A, et al. Influence of apolipoprotein E polymorphism on serum lipids and lipoprotein changes from childhood to adulthood: The Bogalusa Heart Study,J,. Atherosclerosis, 1999, 143(2): 435-443. ,2, 血脂异常防治对策专题组.血脂异常防治建议,J,. 中华心血管病杂志, 1997, 25,3,: 169. ,3, Richard P, Thomas G, Zulueta MP, et al. Common and rare genotypes of human apolipoprotein E determined by specific restriction profile of polymerase chain reaction amplified DNA,J,. Clin Chem, 1994, 40(1): 24-29. ,4, 都莉～彭梅. 载脂蛋白E基因的多态性及意义,J,. 江西医学, 2002, 37,6,:467-468. ,5, Hagberg JM, Wilund KR, Ferrell RE. Apo E gene and gene environment effects on plasma lipoprotein lipid levels,J,. Physiol Genomics, 2000, 4(2): 101-108. ,6, 赵水平, 王钟林, 陆宗良. 临床血脂学,M,. 长沙:湖南科学技术出版社, 1997, 12:29-33. ,7, 朱铁兵, 王中林, 赵水平, 等. 载脂蛋白E基因对血脂代谢的调节及其与冠心病的关系,J,. 湖南医科大学学报, 1998, 23(2): 149-151. ,8, 刘艳环, 苏长来. Apo E基因多态性和运动与脂质代谢及冠心病的研究进展,J,. 天津体育学院学报, 2003, 18,3,: 42-43.