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台盼蓝排斥试验和LDH.doc

台盼蓝排斥试验和LDH

辣辣的雪沫子
2019-05-25 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《台盼蓝排斥试验和LDHdoc》,可适用于工程科技领域

台盼蓝排斥试验和LDH试验表明,没有明显的毒性作用在浓度水平(–毫克毫升)使用的研究。这些的调查结果提高的可能性,可能代表了一种新的PFD为预防术后的治疗剂。PFD是一种抗炎和抗纤维化剂,展品范围内许多类型的细胞的抑制作用浓度至毫克毫升,没有或很少的毒性作用TGFβ(转化生长因子β)信号通路在调控干细胞活性和器官形成中发挥着重要的作用,当TGFβ信号通路各成员活性未激活时,体内会自发性发生多种癌症,这表明TGFβ定向调节干细胞对癌症形成也具有不可或缺的功能。TGFβ超家族包含接近个生长和分化因子,其中有TGFβs,活化素(activin),inhibins和骨形态发生蛋白(BMPs)。下游的跨膜TGFβ受体是多个SMAD蛋白,这些蛋白是TGFβ超家族信号传递的重要调控分子,并在不同层面上受多种多样精确的调控。TGFβ与TGFβII型受体(TGFβRII)结合后,再激活募集TGFβI型受体(TGFβRI)组合后形成二聚体形式的受体复合物。TGFβRII磷酸化TGFβRI的甘氨酸丝氨酸富集区域(GS序列)并活化TGFβRI的丝氨酸苏氨酸活性。活化的TGFβRI反过来又磷酸化受体相关smad蛋白。脊椎动物中目前发现的smad蛋白至少有种,分别是(a)受体调节的Smads(RSmads):Smad,Smad,Smad,Smad,andSmad(b)共调节Smads:SmadandSmad(c)抑制性Smads(ISmads):SmadandSmad。Smad,和Smad参与TGFβ和活化素信号通路,而Smad、Smad和Smad调节BMP信号通路。RSmads和Smad主要位于细胞质中,它们的活性主要受衔接蛋白调节,如Smad锚定受体激活蛋白(SARA)和ELF。Smad和Smad直接被TGFβRI磷酸化,使得构象发生改变从而从受体复合物中释放出来。Smad蛋白的MH结构域识别RSmadsC端的磷酸丝氨酸从而形成异质二聚体复合物(RSmadCSmad)。这些复合物转运至细胞核,核内Smad蛋白与同源DNA结合,吸附力较低,但在转录共激活因子的作用下可增强亲和性。Smad和Smad结合于称为SBE的DNA序列,而Smad通过与Smad的相互作用与DNA复合物反应。Smad蛋白在细胞质和细胞核间进行依赖性磷酸化的穿梭对于TGFβ信号的动态调控具重要意义。本信号转导涉及的信号分子主要包括:Shc,GRB,SARA,Smad,Smad,Smad,Smad,Smad,Smad,Smad,Smad,SOS,Ras,RhoA,Rac,Cdc,Erk,Erk,mDia,MLC,ROCK,LIMK,PAK,cAbl,Cofilin,Par,PKC,PIK,Akt,mTOR,P,P,SK,PPA,TAK,MLK,MEKK,MKK,MKK,MKK,JNK,Smurf,Smurf,CBP,TF等PFD对SRA细胞增殖的抑制作用细胞PFD显示对HLECs增殖其抑制作用(图)。细胞增殖减弱在毫克毫升小时与对照组(P=)相比,后组。效果更明显的为mgml组在,,和小时(P,)。增殖几乎完全抑制用毫克毫升的PFD在所有的时间点(P,)。该测定法在重复通过精炼的浓度,,,和毫克毫升在三个独立的实验。小时后治疗,抑制开始在毫克毫升和达到在毫克毫升的最大效果。百分之五十抑制浓度PFD对HLECs增殖(IC)为。根据方差的重复测量分析,还有就是PFD浓度之间显著互动和持续时间(P,)。鉴于这些结果,下面的进行实验与使用和毫克毫升PFD小时的观察。SRA的细胞的细胞活力治疗后PFD在台盼蓝排除试验,经过小时的治疗用PFD,活细胞的百分比分别为,,,而对于控制,,,和毫克毫升的PFD组,分别为(图)。那里是组间差异无统计学差异显著(P)。在LDH测定中,小时后,“治疗具有PFD,所述细胞介导的裂解的比例分别为,,而对于控制,和为mgml的PFD基和细胞介导的百分比裂解后小时的人,,和为控制,和毫克毫升的PFD基。PFD对SRA细胞无毒性显著影响(P)(图)。PFD抑制的TGFB诱导成纤维细胞表型在SRA细胞Epithlial间质转化经过小时的治疗,纳克毫升TGFB时,TGFb在SRA细胞诱导的形态学改变检测。所述细胞被拉长,并开始为纺锤状形状。诱导由TGFB的形态学改变明显地抑制通过共治疗用毫克毫升的PFD小时。有在SRA没有明显的形态变化小时处理,用毫克后细胞ml的PFD只。(图)。免疫细胞荧光表明,TGFβ显著上调间充质表型标记纤维连接蛋白(FN)在SRA细胞与对照组相比。及FN被显著下调后小时用毫克毫升的PFD治疗在不存在或存在纳克毫升TGFβ。(图)。PFD对TGFB引起的迁移抑制作用SRA的细胞HLEC的迁移后显著减少小时后(图)中处理的PFD(和毫克毫升)的没有或纳克ml的TGFB存在。在没有TGFB,迁移率分别为,,,,和用于控制,为和毫克毫升基,分别。在TGFB处理组,在迁移率分别为,,,和,为控制,分别为和毫克毫升基,(P,群体之间)。PFD对TGFB和Smad蛋白基因表达的影响在SRA细胞蛋白一个显著下调TGFB,SMAD和SMAD的mRNA的HLECs示于PFD的治疗组(P,)与对照(图)相比较。TGFb的表达式,SMAD和SMAD蛋白在抑制显著浓度(P,)和毫克毫升(P,)通过免疫印迹分析(图)的控制。其效果是剂量依赖性。我们扫描的TGFB,SMAD表达和SMAD蛋白HLECs还通过免疫荧光法根据共聚焦显微镜(图)。这些蛋白质可以是检测表达内的细胞,几乎在细胞质根据免疫荧光测定。治疗后的和毫克毫升的PFD小时后,TGFB,SMAD和SMAD蛋白免疫细胞化学染色HLECs非常微弱根据共焦显微镜。PFD对TGFB诱导表达的抑制作用Smad蛋白的蛋白质对TGFb的存在下,PFD降低TGFB诱导Smad和Smad蛋白在显著表达的毫克毫升(P,)与对照组相比浓度组由免疫印迹分析。的抑制作用可能是检测到,但没有在毫克毫升统计学显著PFD组。(图)。PFD抑制的TGFB引起的核转Smad蛋白在不存在的TGFB,核SMAD染色的和SMAD蛋白HLECs是通过免疫荧光非常微弱检测。刺激由纳克ml的TGFB后小时,共聚焦下可检测的Smad核易位显微镜:核SMAD的染色增强,而对SMAD在细胞质被削弱SMAD的蛋白被组装在核膜和其中的一些进入细胞核。对TGFb的存在下,晶核SMAD和细胞核SMAD减少在和毫克毫升的PFD的用激光共聚焦下的对照组相比,治疗组显微镜用倍率为,并且抑制效果为mgml的PFD更强(图)。因此,根据我们的免疫细胞化学,PFD可能结果阻断的Smad的TGFB诱导核易位和SMAD在HLECs。讨论这是首次有研究显示在PFD的抑制作用TGFB引起的增殖,迁移和epithlial间充质HLEC(SRA细胞)的过渡中,关键的细胞是参与PCO的发展。效果似乎遵循以剂量依赖性的方式。台盼蓝排斥试验和LDH实验表明,在无显著毒性作用在这项研究中使用的浓度水平(毫克毫升)。这些研究结果提出了PFD可能代表一种新的可能性治疗剂用于预防PCO的。PFD是抗炎和抗纤维化剂和它表现出的范围内的宿主细胞类型上的抑制作用浓度为至毫克毫升,没有或很少的毒性作用TGFB和的Smad蛋白SRA细胞图表达处理后,用吡非尼酮通过免疫组化根据共聚焦显微镜检测。TGFB(A)中,SMAD(B)和SMAD(C)在细胞质中(红色)和细胞核(蓝色)的HLECs被染色(A,B,C),和毫克毫升(A,B,C)的吡非尼酮,分别处理后免疫细胞化学。(A,B,C)对应阴性对照。放大倍数,。DOI:journalponeg吡非尼酮与人类晶状体上皮细胞线体外。PFD显著抑制肝星状细胞增殖细胞(含有毫克毫升的最大效果),大鼠肾成纤维细胞(毫克毫升),子宫肌层和平滑肌瘤细胞(毫克毫升)。PFD也对眼部的抑制作用细胞。我们以前的研究表明,PFD抑制细胞增殖,HTFS体外的迁移和胶原蛋白收缩浓度范围从至mgml的无毒性作用,。金H等。报告说,PFD(毫克毫升)也抑制眼眶成纤维细胞的生长,从患者获得与甲状腺相关眼病(TAO)。财等。证明PFD的抑制作用(至毫克毫升)关于在人视网膜色素上皮细胞株的TGFB介导的纤维形成ARPE。在目前的研究中,我们还发现,该PFD对增殖最大抑制浓度,HLECs迁移为mgml和没有引起毒性作用。我们所使用的无限细胞系(SRA)中的转含有SV的从T抗原的质粒载体DNAHLECs在年原代培养,它已被广泛在体外用于研究白内障的潜在机制形成。TGFB信号起着PCO发展的关键作用后发性白内障手术。TGFB可以激活其下的流SMAD途径和调解跨分化的调节和基质收缩,并最终向PCO的形成。我们组和其他研究有以前曾表明,PFD可以下调的表达TGFBS在HTFS和其他许多人的细胞(如HLECs,肝星状细胞和肾成纤维细胞),,,。财等。已经阐明了TGFβ的信号传导途径作为目标的PFD和PFD的抑制作用抑制TGFb信号通过阻止积极的Smad复合物的核积累而不是在视网膜色素上皮细胞的磷酸化的Smad的。在目前的研究中,我们提供了新的证据表明,PFD展出了其抑制作用通过抑制TGFBSmad信号通路:PFD抑制TGFB的蛋白和基因表达,压下Smad蛋白的蛋白质的TGFB诱导表达,并且还防止Smad蛋白核积累和转移蛋白质HLECs。因为我们知道,旁边SMAD核易位,TGFB受体诱导的反应介导的通过众多的信号传导途径,如TGFβ的诱导ERK活化和酪氨酸磷酸化,TGFβ的诱导JNKp的活化和PKAkt途径,诱导各种不同的反应。并有之间的交叉对话TGFBSmad蛋白和其他细胞信号通道。再论研究来研究其他分子medhanismsPFD的用于TGFB诱导纤维化的抑制作用在晶状体上皮细胞。两者合计,这些发现支持了概念PFD是一种广谱抗纤维化剂和效应可能由TGFBSmad信号通路介导。总之,PFD显示了具有抑制效果增殖,迁移和epithlial间质转化SRA细胞在体外甚至对TGFb的存在刺激,而且效果如下剂量反应的方式。这是不太可能的抑制作用是通过毒性作用介导的。该抑制效果可能与TGFb的调控SMADmRNA和蛋白表达。我们建议吡非尼酮可能是潜在的抗纤维化剂,以防止白内障手术后患者发生PCO的。

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