淋巴细胞分离液-人
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淋巴细胞分离液-人
Lymphocyte Separation Medium (Human)
货号: P060027
描述:聚蔗糖商品名为Ficoll 400,泛影葡胺是临床使用的造影剂。二者组成的淋巴细胞分离液(Lymphocyte Separation Medium)具有低粘度、低渗透压、无毒等特点,因而在过去几十年里一直是分离血液单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)的标准操作方法。分离时将淋巴细胞分离液置试管底层,上面铺加抗凝全血,两者形成一个清晰的界面。室温水平低速离心后出现几个不同层次的液体和细胞带。红细胞和多核粒细胞密度大于分层液而沉积于管底。血小板和单个核细胞与分层液密度相当,在血浆层和分离液的界面形成白膜状条带,吸取该层细胞洗涤去除血小板得到纯净的单个核细胞。其中单核粒细胞纯度~95%,淋巴细胞纯度90~95%,得率约80%以上其高低与室温有关,分离温度低于10ºC或超过25ºC会降低细胞得率。
人与不同动物血中单个核细胞对分离液的密度要求各不相同。我们提供两种密度的淋巴细胞分离液:淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium (Human),用于分离人血液单个核细胞/淋巴细胞。淋巴细胞分离液Lymphocyte Separation Medium (Animal),用于分离小鼠、大鼠、豚鼠、兔、鸡、猫、牛的血液单个核细胞/淋巴细胞。
产品信息:
100 ml 淋巴细胞分离液-人 Lymphocyte Separation Medium (Human),目录号C1077,用于分离人血;
100 ml 淋巴细胞分离液-动物 Lymphocyte Separation Medium (Animal),目录号C1083,用于分离动物血;
均含Ficoll-400和泛影葡胺,pH8.0。高温除菌。避光2-8 ºC稳定2年。
操作方法:
1. 取新鲜血液,用肝素或枸橼酸钠或EDTA抗凝。或者,取血后静置自然沉降1h,取上层血浆及交界面的细胞。
2. 用等体积PBS或0.9% NaCl稀释血液或血浆。1:1稀释血液可降低红细胞的凝聚,提高淋巴细胞收获量。
3. 取3 ml淋巴细胞分离液加入离心管管底,并升温到室温。
4. 用巴斯德玻璃吸管吸取6 ml稀释后的血液样品,或者取3 ml未抗凝全血或未稀释血浆,注意:本制品仅供研究使用,请勿用于临床治疗等其他用途
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延管壁缓慢铺到淋巴细胞分离液上面,勿打乱液层界面。
5. 水平转子离心2000 rpm/min或700g离心20 min,室温约20 ºC。存放2h以上的血液应离心30 min。
6. 离心后管底是红细胞,中间层是分离液,最上层是血浆。血浆层与分离液之间是一薄层较致密的白膜,含单个核细胞(包括淋巴细胞和单核粒细胞)。推荐用吸管直接插入到单个核细胞层并吸取该层,放入另一试管中。
7. 加10 ml生理盐水稀释分离的淋巴细胞,250g离心10 min,弃上清。重复洗涤1-2次,除去血小板和抗凝物质。最后用PBS或合适的培养基将淋巴细胞稀释备用。
注意事项:
1. 为保持淋巴细胞的活性,应该采血后马上进行分离。分离的细胞层实际上是单个核细胞层,包括淋巴细胞和单核细胞。
2. 小动物如小鼠大鼠可断头取血,抗凝,用PBS 1:1稀释血液增加回收率。分离时按照比例,每一份淋巴细胞分离液加两份稀释后的血液。如果操作无误但离心后的界面之间不能形成单个核细胞层,可能是血液量不足,或未使用新鲜血液,或者不适于分离该种动物血液。
参考文献:
1. Boyum A. (1968): Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J. Clin. Lab.
Invest. 21, Suppl. 97.
2. Harris R. & Ukayiofo EV. (1969): Rapid preparation for lymphocytes for tissue typing. Lancet
327, 7615.
3. Boyum, A., Isolation and removal of lymphocytes from bone marrow of rats and guinea-pigs.,
Scand J. Clin. Lab. Invest., 21, Suppl.97, 91-109 (1968).
注意:本制品仅供研究使用,请勿用于临床治疗等其他用途
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