【doc】MTHFR基因多态性与下肢DVT的相关性研究

【doc】MTHFR基因多态性与下肢DVT的相关性研究 MTHFR基因多态性与下肢DVT的相关性 研究 宴用医药杂志2o0l5年05月第22卷第05期PawJMedPha— rm— .Vo— l222005-— 05No.05?385? ? 临床研究? MTHFR基因多态性与下肢DVT的相关性研究 周玉斌吴丹明王成刚易威贾琪孙雨莘 (辽宁省人民医院血管外科,辽宁沈阳110003) 【摘要】目的探讨NS,N'0亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetrahydmfolatereductase,MTHFR)基因 多态性与我国东北地区人群下肢深静脉血栓形成(Deepvenousthrombosis,DVT)的关系.方法采用 PCR一唧检测73例DVT患者和lo9名健康对照者MTHFRC677T,A1298C突变,计算患者组与对照 组的基因型频率,等位基因频率以及突变与DVr的相关性.结果患者组6771fr,677CT基因型频率和T 等位基因频率分别为38.4%,49-3%和63%,明显高于对照组(分别为l5.6%,46.8%和39%.x:=19.393,P< 0.01;X~--20.200,P<0.01).677"11"和677GT基因型的个体比677CC基因型的个体发生DVT的相对危险分 别约高7或3倍(OR.7.503,95%可信区间为2.931-19.207;OR~c=3.215,95%CI为1.391,7.434).患者组 与对照组MTHFR1298各基因型和等位基因分布无显着性差异 (X.=3.533,P>0.05;x=o.100,P>0.05),但 1298CC677CC基因型的个体比1298AA,677CC基因型的个体发生DVT的相对危 险约高l6倍(OR: l6.50o,95%CI为1.353,201.290).结论MTHFR基因C677T和A1298C突变可能 为我国东北地区人群 下肢DVT的危险享 【关键词】静脉血栓形成亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性 【中图分类号】R394.3,5;Q75;Q347【文献标识码】A AnassociationstudyofmethylenetetrahydrofolatereductasegenepolymorphismwithdeepveRotls thrombosisZHOUYtibin,WUDanming,WANGCHenggang,eta1.DepartmentofVascularSurgery. LiaoningProvincePeople"sHospital,Shenyangl10003,China [Abstract】 ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweenMTHFRgenepolymorphismanddeep venousthrombosis.MethodsWh01ebloodspecimenfrom73patientswithdeepvenousthrombosisand 109healthycontrolswereobtainedfordetectionofgenotype.ThegeneticpolymorphismsofMTHFR C677TandMTHFRA1298CwasdeterminedbyPCRRLPprotoco1.ResultsIncreasedfrequenciesof TrorTCgenotypeandTalleleforMTHFRC677Tinpatientswerefoundcomparingtohealthy controls(38.4%VS15.6%,49-3%VS46.8%,)(2=19.393尸 <0.01;63%VS39%,)(2=20.200,P<0.01).Subjects withthe677TTor677TCgenotypehadamorethan7一 foldor3-foldincreasedriskofdevelopingDVT (0R 不:7.503,95%CI'2.931-19.207;OR1c--3,215,95%CI,1.391-7,434)comparedwiththosewhohadthe 677CCgenotype,NodifferencewasfoundbetweenthefrenqueneiesofMTHFRA1298Cge notypeor alleleinpatientsandthoseincontrols,butsubjectswiththe1298CCand677CCgenotypehada more than16-foldincreasedriskofdevelopingDVT(OR=16.500,95%CI,l,353-201.290)compar edwiththose whohadthe1298AAand677CCgenotype.Conclusion11legeneticpolymorphismsofMTH FRC677T andA1298CmaybeassociatedwiththedevelopmentofDVT. 【Keywords]VenousthrombosisMethylenetetrahydrofolateredutase(MTHnGenepolym orphism 高同型半胱氨酸血症是静脉血栓形成(VT)的 独立危险因素【l1,而同型半胱氨酸代谢的关键酶之 一—— N5,N10_亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的 基因C677T,A1298C突变可使该酶活性降低,从而 引起高同型半胱氨酸血症[21.因此,MTHFR基因的 多态性与VT的发生可能存在相关性,但国外的几 项相关研究结果仍不明确期,国内目前还尚未见到 此类报道.为此,我们采用聚合酶链反应一限制性片 段长度多态性 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 技术(PCR—RFLP)检测了73例 下肢深静脉血栓形成(DVT)患者和109名健康对 照者MTHFRC677T,A1298C突变情况,旨在探讨 我国东北地区人群MTHFR基因多态性与下肢 DVT的相关性. l资料与方法 1.1对象患者组为经超声或静脉造影诊断明确 的下肢DvT患者73例;对照组109名中献血者87 名,健康体检者22名.患者组73例中,男47例,女 26例.年龄23~73岁,平均41,90+11.52岁.对照组 ? 386?2005年05月第22卷第05PracJMed&Pharm.Vol22,2005-05No.05 109名,男69名,女40名,年龄16-73岁,平均 42.95?13.73岁.两组间年龄无显着性差异O=一 0.539,p=-o.591),年龄构成和性别比例无显着性差异 (X2=1.071,P=-0.301,~2=-0.022,P=-0.882). 1.2方法 1.2.1DNA提取空腹抽取周围静脉血3ml, EDTA抗凝,淋巴细胞分离液分离白细胞,酚氯仿法 提取基因组DNA. 1-2.2MTHFR基因分析MTHFRC677T:引物 (上海生工合成)P1:5-TGAAGGAGAAGGTGT CTGCGGGA一3"P2:5一AGGACGGTGCGG TGAGAGTG一3"PCR反应总体积为251xl,反应体 系包括引物P1,P2各0.5lxmol/L,Taq酶(上海生 工)0.5U,MgC122.5mo~L,10xBuffer2.51xl,dNTP 2001xmol/L 模板 个人简介word模板免费下载关于员工迟到处罚通告模板康奈尔office模板下载康奈尔 笔记本 模板 下载软件方案模板免费下载 DNA各3lxl(约100ng).扩增条 件:MJ—ResearchPTC一200型PCR仪,94oC2min, (94~C30s,55~C30s,72~C30s)共35个循环,72?延伸 7min.RFLP:反应体系总体积为501xl:PCR产物 251xl,HinfI1l(10U),10xBuffer51xl.37~C水浴 4h,8%PAGE电泳,溴化乙锭染色后数码凝胶扫描 成像系统(上海天能)扫描成像. MTHFRA1298C:引物P1:5"-cTrTGGGGA GCTGAAGGACTACTA一3P2:5一CACTIT GTGACCA1rrCCGGTI'TG一3"PCR反应总体积 为251xl,反应体系包括引物P1,P2各0.5lxmol/L, Taq酶0.5U,MgC122.5mol/L,10xB~fer2.5Ixl,dNTP 2001xmol/L模板DNA各3lxl(约100ng).扩增条 件:MJ—ResearchPTC一2oo型PCR仪,94oC2min, (94~C30s,55~C30s,72~C30s)共35个循环,72~C延伸 7min.RFLP:反应体系总体积为501xl:PCR产物 251xl,MboII1l(10U),lOxBuffer51xl.37?水浴4h, 8%PAGE电泳,溴化乙锭染色后数码凝胶扫描成像 系统扫描成像. 1-3统计学分析计算患者组和对照组MTHFR C677T,A1298C基因型频率和等位基因频率,基因 型比较和基因型Hardy—weinberg平衡检测,应用 SPSS统计软件进行t检验,x检验,相关风险值 (oddsratio,OR)和95%可信区间(95%confidence interval,95%CI)界定. 2结果 2.1MTHFR—C677T无酶切反应只有一条 198bpDNA片段者为野生型(一/一CC纯合型),酶切 后有175bp和23bp2条带者为突变纯合子(+/+ 1rr纯合型),有198bp,175bp和23bp3条带者为 杂合子(+/一TC杂合型),见图1. 2.2MTHFR—A1298C无酶切反应有84bp,31bp, 30bp,和18bp2条带者(3lbp,30bp,和18bp差别 太小为1条带)为突变纯合子(+/十CC纯合型),酶 切后有56bp,31bp,30bp,和18bp2条带者为野生型 (_/一AA纯合型),有84bp,56bp,3lbp,30bp,和 18bp3条带者为杂合子(+/一CA杂合型),见图1. +,.++,.,.M^rkef.,.+,一+,+一,一 图lMTHFRC677TA1298C的3种基因型 2I3对照组C677T基因型频率分布1rr15.6%, TC46.8%,CC37.6%符合Hardy—Weinberg定律(遗 传平衡定律理论值1rr15.21%,TC47.58%,CC 37.21%,X2=0.005,P'=-O.997).对照组A1298C基因型 分布(CC0.9%,CA29.4%,AA69.7%)也符合 Hardy—Weinberg定律(遗传平衡定律理论值CC 2.43%,CA26.33%,AA71.23%,X2=1.169,P=-0.557). 2.4患者组6771rr,677CT基因型频率38.4%和 49.3%,明显高于对照组(15.6%和46.8%),有显着 性差异(x=19.393,<0.01).而患者组1298CC, 1298CA基因型频率分别为4.1%和20.6%,对照组 为0.9%和29.4%,二者无显着性差异(X=3.533 0.05, 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1). 2.5患者组与对照组677T等位基因频率分别为 63%和39%,二者之间有显着性差异(X=20.200,P< 0.01).患者组与对照组1298C等位基因频率分别 为14.4%和15.6%,二者之间无显着性差异(X= 0.100,19>0.05,表1). 2.6MTHFRC677T,A1298C突变纯合子和杂合子 与DVT风险相关性见表1.677TT和677CT基因 型的个体比677CC基因型的个体发生DVT的相对 危险分别约高7或3倍(ORw=7.503,95%CI为 2.931,19.207;OR~c=3.215,95%CI为1.391-7.434), 提示6771rr和677TC突变与DVT有相关性. MTHFRC677T,A1298C突变的联合分析与DVT风 险相关性计算结果见表2.1298CC677CC基因型 实用医药杂志2oo5年05月第22卷第05期PraeJMed&Pharm..Vol22-—05N — o.05 的个体比1298AA677CC基因型的个体发生D?' 的相对危险约高16倍(OR=16.500,95%CI为 1.353-201.290),提示1298CC与D?'有相关性. 裹l两组MTI-IFR677,MTHFR1298各基因型 分布及与DVT风险相关性 0.10o_3.7钾 13501.290 lIo44_l1.185 l384—18.839 2.663一794 3讨论 人MTHFR基因定位在lp36.3上,eDNA全长 约2.2kb.目前发现最常见的2个基因突变位点为 C677T和A1298C.MTHFRC677T突变是由于碱基 T置换了C,编码的丙氨酸由缬氨酸取代,而缬氨酸 可能与MTHFR活性中心密切相关,使酶的耐热性 和活性都大大降低.MTHFRA1298C突变是由于胞 嘧啶替代腺嘌呤,因而编码的谷氨酸被丙氨酸取 代,虽然不影响酶的耐热性,但使酶的活性大大降 低,而且两个基因的突变对酶的活性影响有协同作 用.当两个基因均有突变时,该个体血中同型半胱 氨酸水平明显增高田. 高同型半胱氨酸血症在白种人和中国台湾人 ? 387? 已被证实是静脉血栓形成的独立危险因素【41. Salomon,Grandone,Gemmati和Margaglione的研究 表明MTHFR6771,I'与D?'相关[on(95%ci)分别 为1.8(1.2—2.9),2.1(1.2-3.7),1.7(1.1—2.5),2.1(1.O一 4.5)],而Grossmann,Hanson,Akar和Lin等人的 研究结果却相反[9-埘. 在本文中,患者组6771,I',677CT基因型频率和 T等位基因频率明显高于对照组,6771,I'和677CT 基因型的个体比677CC基因型的个体发生DVT的 相对危险分别约高7或3倍,提示6771-r和677TC 突变与DVT有相关性.虽然患者组与对照组 A1298C各基因型和等位基因分布频率差异无统计 学意义,但是联合分析发现1298CC677CC基因型 的个体比1298AA677CC基因型的个体发生DVT 的相对危险约高16倍,可以提示1298CC与DVT 的发生有相关性.因而考虑可能由于C677T的干扰 而使患者组与对照组A1298C各基因型和等位基因 频率差异不显着. 参考文献 lRayJG.Meta-analysisofhyperhomocysteinemiaasariskfactor forvenousthromtx~mbolicdise~.ArchInternMed,1998,158: 2101 2朱慧萍,刘明珠,刀京晶,等.mthfr基因第1298位核苷酸多态性与 酶话性的关系.北京医科大学.2000,32(3):262 3Alhene—lasM,^删udE,NicaudV,eta1.Venousthromtx~mbolic diseaseandthepmthrombinznethylenetetrahydrofolatereductase andfactorVgenes.ThrombHaemost,1999,81:506 4Tsu-ShluHsuLung-AnHsu.eta1.Importance0fhyperhomoey- steinemiaasariskfactorforvenousthromtx~mbolisminTai— Wfill~population.Acase-controlstudy.ThrombRes,2001,102: 387 5SalomonO,SteinbergDM,ZivehnA,eta1.Singleandcombined pmthromboticfactorsinpatientswithidiopathicvenousthrom- beemtx~ism:prevalenceandriskassessment.ArteriosclerThromb VaseBiol,1999,19:511 6GrandoneE,MargaglioneM.Co~zzoD,eta1.Geneticsusceptibility topregnancy-relatedvenousthromboembolism:roles0ffactorV Leiden,pmthrombinG20210A,andmethylenetetrahydrofolateIedu— cts,seC677Tmutations.AmJObstetGynecol.1998,179:1324 7GemmatiD.PrevimiM.~rinoMLeta1.Lowfolatelevelsand thermolabilemethylenetetrahydrofolatereductaseprimarydeter- mlnantofmildhyperhomoeystinemiainnormalandthromboem— bollcsubjects.ArteriosclerThrombVaseBid,1999,19:1761 8MargaglioneM,DAndreaG.d'AddeddaM.eta1.Themethylene— tetrahydrofolatereductaseTII677genotypeisassociatedwithVe'- nousthrombosisindependentlyofthecoexistenceoftheFVLei— denandtheprothrombinA20210mutation.ThrombHaemo~t, 1998.79:907 9GrossmamaILSchwenderS,GeisenU,eta1.CBS844ins68.MTHFR TII677andEPCR4031ins23genotypesinpatientswithdeep一 一一 舭们舢 ? 竹H0"00 "?m?砒? 423n0篮00 ? 388?2005年O5月第22卷第05~PraeJMed&Pharm.gol22,2005-05No.05 veinthrombosis.ThrombRes,2002,107(1-2):13 10aallsonNQ,ArmO,YangF,eta1.C677TandA1298Cpolymor- phismsofthemethylenetetrahydrofolatereduetasegene:inei— denceandeffectofcombinedgenotypesonplasmafastingand post—methionineloadhomoeysteineinvasculaIdisease.Clin Chem,2001,470):661 11AkarN,AkarE,AkcayR,eta1.Effectofmethylenetetrahydrofo- latereduetase677C—T.1298A—C.and1317T-Confactor V1691mutationinTurkishdeepveinthrombosispatients.Th— mmbRes,2ooO,97:163 l2LinJS.ShenMC.TsaiW&LinB.TheprevalenceofC677T mutationinthemethylenetetrahydrofolatereductasegeneandits associationwi山venousthmmbophiliainTaiwaneseChinese. ThmmbRes,2000,97:89 『收稿日期:2005--02—18】【本文编辑:韩仲琪王庆法】 ? 临床研究? 多功能腹膜检查针在疑难腹水病因诊断中的价值 朱揉张忠兵谢渭芬胡和平张兴荣刘苏陈伟忠马述春 (第二军医大学附属长征医院消化科,上海200003) 【摘要】目的探讨多功能腹膜检查针在疑难腹水病因诊断中的价值.方法用多功 能腹膜检查针对 96例疑难腹水患者进行活检,刷拭活检及活检,刷拭活检后的腹水细胞学检查.结 果多功能腹膜检查 针对疑难腹水的检查病因确诊率可达83.3%.结论多功能腹膜检查针对疑难腹水 病因诊断具有较大的 诊断价值. 【关键词】腹水病因诊断 【中图分类号】R442.5【文献标识码】A Thevalueofthemulfifunctionalperitonealbiopsyneedleindiagnosingasciteswithuncertain etiologyZHULiang,ZHANGZHongbing,XIEWeifen,eta1.DepartmentofDigestion,theAffiliated ChangzhengHospitaltotheSecondMilitaryMedicalUniversity,SHanghai200003,China [Abstract】 ObjectiveThevalueofthemuhifunctionalperitonealbiopsyneedleindiagnosingascites withuncertainetiology.MethodsTheetiologyof96patien~withuncertainascitesweredetect edbythe multifuncfionalperitonealbiopsyneedle(MFBN)whichincludessuchfunctionsasbiopsy,b rushbiopsy, andthencytologicalbiopsyoftheirascitessample.RestdtsOfthe96casesofasciteswithuncer tain etiology.83-3%werediagnosed.ConclusionThemultifunctionalperitonealbiopsyneedleh asabetter valueindiagnosingthetheetiologyofuncertainascites. [1(eywords】AsciteEtiologyDiagnosis 腹水是临床常见的症候.许多疾病可引起腹 水,常见病因有肝硬化,结核性腹膜炎,恶性肿瘤腹 膜转移或种植,腹膜恶性肿瘤等.一般通过病史,常 规辅助检查以及腹水脱落细胞检查等能明确病因, 但临床上仍有不少病例通过上述检查不能明确诊 断,以至于影响治疗.腹腔镜可在直观下观察并于 病变处多部位取活检作病理学检查,对腹水的病因 诊断有较大的诊断价值,但因有一定禁忌证,必须 在手术室进行,且仪器设备价格较昂贵,临床应用 受到限制.因此寻找一种既廉价又具有较高诊断价 值的方法成为诊断疑难腹水的迫切 要求 对教师党员的评价套管和固井爆破片与爆破装置仓库管理基本要求三甲医院都需要复审吗 .为此,我 们在传统胸腹膜检查针的基础上,对关键技术进行 创新,利用杠杆原理设计出了汇集腹水抽取,腹膜 活检,腹膜及腹腔内刷拭活检(刷检)等功能的多功 能腹膜检查针.该多功能腹膜检查针于2O世纪90 年代至今长期应用于临床并予推广.本文报道1O 所医院在疑难腹水诊断中应用此项技术的情况. 1资料和方法 1.1对象1996-2004年长征医院,中山医院,西 京医院,同济大学附属同济医院,302医院等10家 医院住院的腹水患者96例,年龄17-73岁,男性43 例,平均47.3岁,女性53例,平均49.6岁,均为中