酶的专一性及影响酶促反应的因素

酶的专一性及影响酶促反应的因素酶的专一性及影响酶促反应的因素一实验目的通过本实验，证明酶对底物催化的专一性，以及PH、温度、激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响。二实验原理唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色。以此证明酶催化底物的专一性。淀粉或淀粉的水解产物遇碘会呈现不同的颜色，淀粉遇碘变蓝色；糊精遇碘则根据其分子量的大小依...

酶的专一性及影响酶促反应的因素一实验目的通过本实验，证明酶对底物催化的专一性，以及PH、温度、激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响。二实验原理唾液淀粉酶能专一的催化淀粉水解，生成一系列水解产物，即糊精、麦芽糖、葡萄糖等。麦芽糖或葡萄糖都属于还原糖，能使班氏试剂中的二价铜离子还原成亚铜，并生成砖红色的氧化亚铜。淀粉酶不能催化蔗糖水解，且蔗糖本身不是还原糖，所以不能与班氏试剂作用呈色。以此证明酶催化底物的专一性。淀粉或淀粉的水解产物遇碘会呈现不同的颜色，淀粉遇碘变蓝色；糊精遇碘则根据其分子量的大小依次呈现紫色、褐色、红色；而麦芽糖、葡萄糖遇碘不呈色。通过颜色变化可以了解淀粉的程度，以观察PH、温度激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。三药品器材试管、试管夹、样品杯、滴瓶、温度计、恒温水浴箱，冰箱等。 1.1%淀粉溶液称取可溶性淀粉1g，加5ml蒸馏水调成糊状，徐徐倒入80ml煮沸的蒸馏水中，不断搅拌，待其溶解后，加蒸馏水至100ml。此液应新鲜配制，防止细菌污染。 2．1%蔗糖溶液称1g蔗糖，加蒸馏水至100ml溶解。 3．PH6.8缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液154.5ml，0.1mol/L柠檬酸溶液45.5ml混合即可。 4．PH4.8缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液98.6ml，0.1mol/L柠檬酸溶液101.4ml混合即可。 5．PH8.0缓冲液取0.2mol/L磷酸氢二钠溶液194.5ml，0.1mol/L柠檬酸溶液5.5ml混合即可。 6．班氏试剂溶解结晶硫酸铜17.3g于100ml热的蒸馏水中，冷却后加水至150ml为A液。取柠檬酸钠173g和无水碳酸钠100g，加蒸馏水600ml ,加热溶解，冷却后加水至850ml为B液。将A液缓慢倒入B液中，混合即可。 7．稀碘液称取碘1g，碘化钾2g ,溶于300ml蒸馏水中。 8．0．9%NaCl溶液。 9．0．9%CuSO4溶液。 10．0．1%Na2SO4溶液。 11．稀释唾液用清水漱口，清除食物残渣。再含蒸馏水30ml作咀嚼运动，2分钟后将稀释唾液收集于样品杯中备用。四实验方法 1．酶的专一性取二支试管，编号，按下表操作。加入物（滴） 1号管 2号管 PH6.8缓冲液 20 20 1%淀粉溶液 10 — 1%蔗糖溶液 — 10 稀释唾液 5 5 将各管混匀，置37度水浴箱保温10分钟后取出班氏试剂 15 15 将各管混匀，置煮沸水浴箱煮沸3~5分钟，观察结果 2． PH对酶促反应速度的影响取三支试管，编号，按下表操作。 3．加入物（滴） 1号管 2号管 3号管 PH4.8缓冲液 20 — — PH6.8缓冲液 — 20 — PH8.0缓冲液 — — 20 1%淀粉溶液 10 10 10 稀释唾液 5 5 5 将各管混匀，置37度水浴箱保温5~10分钟后取出稀碘液 1 1 1 观察各管的颜色 3.温度对酶促反应速度的影响取三支试管，编号，按下表操作。加入物（滴） 1号管 2号管 3号管 PH6.8缓冲液 20 20 20 1%淀粉溶液 10 10 10 将1、2、3号管分别置于0℃、37℃、100℃预温5分钟稀释唾液 5 5 5 继续将1、2、3号管分别置于0℃、37℃、100℃预温5~10分钟稀碘液 1 1 1 观察各管的颜色 4．激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响取四支试管，编号，按下表操作。加入物（滴） 1号管 2号管 3号管 4号管 PH6.8缓冲液 20 20 20 20 10 10 10 10 10 蒸馏水 10 — — — 0．9%NaCl — 10 — — 0．9%CuSO4 — — 10 — 0．1%Na2SO4 — — — 10 稀释唾液 5 5 5 5 将各管混匀，置37℃水浴箱保温5~10分钟后取出稀碘液 1 1 1 1 观察各管的颜色五注意事项 1．唾液淀粉酶的活性存在个体差异，同时受唾液稀释倍数影响，收集唾液时应事先确定稀释倍数，或收集2~4人的混合唾液。 2．酶促反应的保温时间，直接影响本实验的效果。根据各实验条件通过预试，确定最佳保温时间。六思考题结合本实验说明PH、温度、激活剂、抵制剂对酶促反应速度的影响。

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