无花果叶提取物的抑菌作用研究

无花果叶提取物的抑菌作用研究 研究与探讨 Vo1.26,No.1l,2005 握物的抑茴厕 赵爱云',吴神怡 (1.青岛大学天然色素研究所,山东青岛266071;2.青岛大学生物系,山东青岛266071) 藕一:为探讨无花果叶逐级提取物的抑菌作用.实验测定了无 花果叶逐级提取物对各实验菌种的抑茵圈及最低抑菌浓 度,结果表明各级提取物对实验茵分别有不同程度的抑 茵作用,其中对金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌作用 最为明显,各级提取物的抑菌强度依次为:乙酸乙酯萃 取物(金黄色葡萄球菌:MIC?6.25mg/mL,枯草杆菌 MIC:?12.5mg/mL),正丁醇萃取液(两种茵的抑菌作 用:MIc?25mg/mL),石油醚萃取液(两种茵的抑菌作 用:MIC?50mg/mL),其中乙酸乙酯萃取物的抑菌活性 最强. 关?诩:无花果叶,抑茵作用,最小抑茵浓度 Abstract:TostudylheantibacterialactivityOfFicCar& leafextract,minimalinhibitoryconcentration(MIC) andinhibitorycircleOflheextraclwere determined.Theresultsshowedlhallhe antibacterialactivityOflheextractswasdifferent lowarddifferenlmicrobes.ThesensitivitytO ethylacetateextractinsequencewas (Staphylococcustlltreus:MlC?6.25mg/mL.Bacillus subtilis:MlC?12.5mg/mL).1On—butanolextracl (Staphylococcusm':MlC?25mg/mL.Bacillus subtilis:MlC~25mg/mL),lOpetroleumether extract(Staphylococcustlltreus:MlC?50mg/mL. Bacillussubtilis:MlC?50mg/mL).Theantibacterial activityOfethylacetateextractwasthemost potent. Keywords:FicCot&?fleaves;antibacterial;MlC 中图分类号:TS255.1文献标识码:A 文章编号:1002—0306(2005)l1-0087—03 无花果系桑科无花果(FicusCarico1.L)属植物, 是人类栽培最早的古老果树树种之一f11.无花果具有 广泛的营养价值和药用价值.自古以来人们不仅将 无花果制成干果,果脯和罐头食用,而且还将其作为 药物使用.我国应用无花果人药医病,已有数百年历 史.《本草纲目》中曾记载:果实"甘,平,无毒,开胃, 止痢疾";《滇南本草》中也有"敷一切无名肿毒,黄水 疮,鱼口便毒,乳结,痘疮破烂";《本经逢原》认为"温 收稿日期: 作者简介: 基金项目: 2oo5—04—27 赵爱云(1973一),女,助理研究员,医学硕士,主要从事天然 产物的研究与开发工作. 青岛市科技局资助项目(03—2-jz一04). 辛,无毒.";《救荒本草》认为其叶可"治心痛".这些 记载预示无花果具有很大的开发潜力,近年来,国内 外研究多集中在无花果抗肿瘤方面,而在抑菌活性 方面少有研究.为充分利用无花果叶资源,挖掘其内 在潜力,本文对无花果叶逐级提取物的抑菌活性做 了初步研究. 1材料与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.1材料与仪器 新鲜无花果叶于2003年10月采于青岛大 学,阴干,粉碎过40目筛;95%食用乙醇,石油醚,乙 酸乙酯,正丁醇,无水乙醇,二甲基甲酰胺均为分 析纯;金黄色葡萄球菌(StaphylococcusCll,trelt$),枯草 杆菌(Bacillussubtilis),四联微球菌(Micrococcus tetragenus),大肠杆菌(Escherichiacoli),普通变形菌 (Protettsvulgaris),噬夏孢欧文氏菌(Erwinia uredovora),灰葡萄孢(Botrytiscinere,枯斑拟盘多毛 孢(stalotiopsis脓m),酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)以上菌种皆由青岛大学生物系提供;牛 肉浸膏,蛋白胨,氯化钠(NaC1),马铃薯(土豆),蔗 糖,琼脂(ArgaB). HPG-280B光照培养箱,HZS-H水浴振荡器哈 尔滨市东联电子技术开发有限公司制造;旋转蒸发 仪上海亚荣生化仪器厂;真空泵. 1.2无花果叶各级提取物的制备 将预先采集的无花果叶洗净,阴干,粉碎过40 目筛.取6kg,用36L95%的乙醇浸泡一周,减压抽 滤,残渣继续浸泡,重复两次,抽滤,合并滤液,减压 浓缩,共得浸膏约1400g,浸膏提取率为23.33%.将 得到的浸膏用水悬浮,用石油醚,乙酸乙酯,正丁醇 依次萃取,且均萃取至有机溶剂层澄清无色为止,浓 缩合并提取液,共得石油醚浸膏88g,乙酸乙酯浸膏 30g,正丁醇浸膏200g. 1.3对各部分粗提物的抑菌活性检测 1.3.1抑菌圈测定分别取上述各粗提物0.03g,溶 87 于1mL二甲基甲酰胺(DMF)中.将实验用各种细菌, 真菌活化制成菌悬液(600nm处OD值约为1.0),加 入到冷却至50~C的牛肉浸膏培养基(细菌)和麦芽汁 琼脂培养基(真菌)中,摇匀,倒平板.待培养基凝固 后,在各培养皿内打孑L,按照下述编号加入样品,37~C 培养24h,测量抑菌圈大小. 真菌培养方法同上,只是培养基改用麦芽汁培 养基. 对于霉菌,用马铃薯培养基(PDA)培养.在制备 好的PDA平皿的中央接种霉菌,待长至直径占整个 平皿直径二分之一时,在菌苔周围打孑L加入样品, 28?培养24h后,测量抑菌圈大小.A.石油醚提取物 的DMF溶液;B.乙酸乙酯提取物的DMF溶液;C.正 丁醇提取物的DMF溶液;D.空白DMF对照. 1.3.2采用试管稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)EI 取上述3种样品各0.1g,分别溶于1mLDMF中,作 为原液.三种原液分别以牛肉膏液体培养基倍比稀 释成1:2,1:4,1:8,1:16,1:32,1:64,1:128各7个浓度, 即含原液浓度分别为50,25,12.5,6.25,3.1,1.5, 0.75mg/mL.每个浓度设三个平行管,并分别设不含 萃取液的牛肉膏液体培养基为对照管.然后在各管 中加入事先制备好的菌悬液(600nm处OD值约为 1.0)20p.L,}昆匀后放于37?的培养箱中培养24h.分 别从每一试管取一接种环液体点中于营养琼脂平 板,24h后确定是否有细菌生长.以药物抑制待测菌 生长的最低浓度为最小抑菌浓度(MIC). 2实验结粜 2.1三种萃取液的抑菌圈 由表1可知,三种萃取液对多数供试菌有不同 程度的抑菌作用,其中石油醚萃取液对金黄色葡 萄球菌,钾细菌的抑菌作用较为明显,对大肠杆 菌,酿酒酵母,枯斑拟盘多毛孢则没有抑制作用; 表1三种萃取液对10种供试菌的抑菌圈(直径mm) 乙酸乙酯萃取液对金黄色葡萄球菌,枯草杆菌,四 联微球菌,普通变形菌,噬夏孢欧文氏菌的抑菌作 用显着,对酿酒酵母则没有抑制作用;正丁醇萃取 液对金黄色葡萄球菌,枯草杆菌的抑菌作用较为 显着,对酿酒酵母,灰葡萄孢,枯斑拟盘多毛孢则 没有抑制作用. 2-2三种萃取液的最低抑菌浓度 石油醚萃取液对两种菌的抑菌作用较弱,两种 菌的最低抑菌浓度皆为50mg/mL(见表2);乙酸乙 酯萃取液的抑菌作用显着,稀释至1:16时对金黄色葡 萄球菌仍有抑菌作用,最低抑菌浓度为6.25mg/mL, 枯草杆菌的最低抑菌浓度为12.5mg/mL(见表3);正 丁醇萃取液的抑菌作用较强,两种菌的最低抑菌浓 度皆为25mg/mL(见表4). 3讨论 3.1无花果叶初提物的三种萃取液对实验菌种有不 同程度的抑菌作用,其中乙酸乙酯萃取液的抑菌作 用最为显着,对革兰氏阳性细菌中的金黄色葡萄球 菌,枯草杆菌,四联微球菌,革兰氏阴性细菌中的普 通变形菌,噬夏孢欧文氏菌的抑菌作用最为明显,三 种萃取液的最低抑菌浓度测定结果显示,乙酸乙酯 表2石油醚萃取液不同稀释度抑菌效果测定 注:表2,表4"+"表示细菌生长,"一"表示无细菌生长. 锲匦 (下转第92页) 素又降解为无色花色苷衍生物的缘故_l. 植物体内含有抗坏血酸氧化酶,在原组织完整 时其催化作用不是很明显,但当组织受到破坏又与 空气接触时,就能加速抗坏血酸的氧化作用.草莓 含有丰富的Vc,在加工破碎过程中,易受到抗坏血酸 氧化酶的作用,发生氧化还原反应,含量降低,使草 莓营养价值下降.由表7可知,随温度的升高,Vc含 量减少,这是因为高温加速抗坏血酸氧化酶活性的结 果;空气是影响Vc含量的重要因素,由于酶解加工过 程一直暴露于空气中,因此Vc随酶解时间的延长,不 断发生有氧氧化,含量减少;与酶解温度和酶解时间 相比,酶的添加量对Vc的含量的影响不是很大. 由于最高出汁率的工艺参数和使花色苷及Vc 含量最大的工艺参数不完全一致,经综合考虑采用 酶加入量0.005%,酶解时间1h,酶解温度50oC的加 工工艺生产草莓汁. 2.5草莓鲜果与草莓汁营养成分含量的对比 草莓色泽鲜艳,营养丰富且易被人体吸收,因而 很受广大消费者青睐.采用本实验确定的酶解加工 工艺生产的草莓汁保留了草莓中的大量营养物质, 具有与草莓鲜果相当的营养价值(见表8).这样一 来,不但解决了新鲜草莓市场供应周期短的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ,而 且可以长期为消费者提供一种营养丰富,美味可口 的时尚健康饮料. 表8草莓鲜果与草莓汁营养成分含量对比 3结论 酶法液化是通过特殊的酶处理工艺破坏果蔬原 料的细胞结构,提高果蔬原料浸出率从而最大限度 地获得果蔬汁的新型果蔬加工工艺_l41.果胶酶酶解制 汁可以降低果浆粘度,提高出汁率.在酶加入量 0.005%,酶解时间1h,酶解温度50qC的条件下生产 草莓汁,其出汁率比直接榨汁提高了近20%,经济效 益可观,可用于工业化生产.这样一来,解决了草莓 市场供应周期短,储存难,易腐烂等问题;而且产品 色泽鲜艳,营养丰富,美味可口. 参考文献: [1】大连轻工业学院.食品分析[M].北京:中国轻工业出版社, 1990. 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