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蛋白定量试剂盒-改良Lowry法.doc

蛋白定量试剂盒-改良Lowry法

谢道德
2017-09-26 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《蛋白定量试剂盒-改良Lowry法doc》,可适用于综合领域

蛋白定量试剂盒改良Lowry法技术咨询电话:蛋白定量试剂盒改良Lowry法货号:P描述:许多年来Lowry法是最常用也是被引用次数最多的蛋白质定量方法。其原理是在碱性条件和福林酚FolinCiocalteuReagent存在下铜离子与蛋白质形成可溶性兰色复合物在nm有最大光吸收值。Lowry法的优点是灵敏度高对脂质、SDS等干扰物质不甚敏感。经典Lowry法的主要缺点是每次蛋白定量之前必须用两种不同的试剂A和B(ReagentAandB)新鲜配制碱性铜试剂(ReagentC)。碱性铜试剂(ReagentC)不稳定因而必须每天新鲜配制另外经典Lowry法产生的蛋白颜色复合物稳定性较差在反应分钟内变化蛋白浓度低于µgml时标准曲线的重复性较差本试剂盒采用改良的Lowry法用单一添加有稳定剂的碱性铜试剂代替经典Lowry法的试剂A、试剂B、和试剂C。这种改良碱性铜试剂在室温下稳定个月以上测定反应产生的铜蛋白蓝色复合物相当稳定在小时内的变化不超过反应曲线几乎与原有方案吻合重复性佳。因而改良Lowry法蛋白定量试剂盒#P与BCA法蛋白质定量试剂盒#P一样具有非常好的试剂稳定性、检测灵敏度、和重复性并且测定过程变得十分简捷是经典Lowry法忠实用户的理想选择。测定范围µgml。可进行次微量测定及次ml比色杯测定。KitContents(次微量测定或次ml比色杯测定)ModifiedLowryProteinAssayReagent,ml,containingcupricsulfateandsodiumtartrateºCNFolinCiocalteuReagent,ml,ºCAlbuminStandard,mgml,mlBSAinsalineandsodiumazide,,ºCStorage:UponarrivalstoreatºCProductshippedatambienttemperatureDiscardanykitreagentthatshowsdiscolorationorreddishprecipitateThisproductisguaranteedforoneyearfromthedateofpurchasewhenhandledandstoredproperly注意:本制品仅供研究使用请勿用于临床治疗等其他用途技术咨询电话:表标准测定和微板测定方案的加样量和比例微板(microplate)测定方案标准比色杯测定方案标准或待标准或待蛋白浓ModifiedFolinModifiedFolin孔数测样品体测蛋白体LowryphenolLowryphenol度(µl)(µl)(ml)(ml)(µgml)积(µl)积(ml)待测样品标准加样比例volumevolumevolumevolumevolumevolume标准加样举例说明:表的下面两行是推荐的标准加样比例及示例因其加入的样品量多故灵敏度较高。但为方便加样操作用户完全可以在灵敏度符合要求的情况下调整加入的样品体积范围为~µlModifiedLowry试剂为~µlNFolinphenol试剂均为µl。测定范围µgml。标准蛋白溶液配制:用双蒸水、生理盐水、或用待蛋白样品之缓冲液进行连续倍比稀释。蛋白测定蛋白质浓度线性检测范围为~,µgml。标准测定用cm光程玻璃或塑料比色皿用比色计测定。微板测定用孔板反应终体积~µl用酶标仪、微板比色仪测定。标准测定:将~ml标准品或待测样本加入管中加mlModifiedLowry试剂混合室温分钟。加入NFolinphenol试剂µl振荡混匀室温分钟。nm注意:本制品仅供研究使用请勿用于临床治疗等其他用途技术咨询电话:(nm之间)测定OD值。微板测定:将µl标准品或待测样本加入管中加入µlModifiedLowry试剂混合室温分钟。加入NFolinphenol试剂µl振荡混匀室温分钟。nm(nm之间)测定OD值。绘制标准曲线并计算蛋白浓度。说明如样品含干扰测定物质可采用BCA法蛋白质定量试剂盒或Bradford法蛋白质定量试剂盒。蛋白质样品经液体样品蛋白抽提试剂沉淀后可去除干扰测定的物质。标准曲线应该每次新做。但每一稀释度的BSA标准品可预先配好ºC冻存备用注意在使用这种非新鲜配制的BSA时如果发现标准曲线的某一些点偏差较大说明稀释的BSA已经坏掉应予重配。欲获最大灵敏度应该在nm测定OD值。nm间测定具有良好的线性但灵敏度稍微不同。表最下面两行是推荐的标准加样比例及示例因其加入的样品量多故灵敏度较高。但用户完全可以在灵敏度符合要求的情况下调整加样品体积使加样操作更加方便快捷。可参考的体积范围:待测样品为~µlModifiedLowry试剂为~µlNFolinphenol试剂均为µl。Table:ModifiedLowry蛋白测定兼容性表AdashedlineentryindicatesthatthematerialisincompatiblewiththeassayAmmoniumsulfateCHAPSOMercaptoethanolmMPotassiumthiocyanateAsparaginemMOctylβglucosidemMNonidetP(NP)CesiumbicarbonatemMAcetoneGlycinemMSDSAprotininmgLHEPES,pHmMSpanDMFTritonX,XImidazole,pHmMDMSOMES,pHmMTweenEthanolSodiumacetate,pHTweenGlycerol(Fresh)mM注意:本制品仅供研究使用请勿用于临床治疗等其他用途技术咨询电话:SodiumazideEDTAmMHydrochloricAcidmMSodiumbicarbonatemMEGTAmMLeupeptinmgLSodiumchlorideMSodiumcitratemMMethanolSodiumphosphatemMAscorbicacidmMPhenolRedmgmlTrismMCysteinemMPMSFmMDithioerythritol(DTE)BrijSodiumHydroxidemMBrij,BrijDithiothreitol(DTT)SucroseCHAPSGlucosemMUreaMReference:Lowry,OH,Rosebrough,NJ,Farr,LandRandall,RJ()ProteinmeasurementwiththeFolinPhenolReagentJBiolChem,注意:本制品仅供研究使用请勿用于临床治疗等其他用途

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