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底物浓度对酶促反应速度的影响,蔗糖酶米氏常数的测定实验报告

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底物浓度对酶促反应速度的影响,蔗糖酶米氏常数的测定实验报告底物浓度对酶促反应速度的影响,蔗糖酶米氏常数的测定实验报告底物浓度对酶促反应速度的影响,蔗糖酶米氏常数的测定实验报告生化实验思考题1.氨基酸的纸层析分离1.什么是纸层析技术是利用混合物中各组分物理化学性质差异,使其以不同速度移动的一种物理分离方法。2.什么是分配系数分配系数是指溶质在固定相中的浓度和溶质在流动相中的浓度的比值。3.层析技术的种类1吸附层析2分配层析3离子交换层析4凝胶过滤层析5亲和层析6气象层析7固相层析8柱层析9纸层析10薄层层析11高效液相层析4.影响Rf值的因素有哪些1纸层析时纸层析时要在密闭...

底物浓度对酶促反应速度的影响,蔗糖酶米氏常数的测定实验报告
底物浓度对酶促反应速度的影响,蔗糖酶米氏常数的测定实验报告底物浓度对酶促反应速度的影响,蔗糖酶米氏常数的测定实验报告生化实验思考 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 1.氨基酸的纸层析分离1.什么是纸层析技术是利用混合物中各组分物理化学性质差异,使其以不同速度移动的一种物理分离 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 。2.什么是分配系数分配系数是指溶质在固定相中的浓度和溶质在流动相中的浓度的比值。3.层析技术的种类1吸附层析2分配层析3离子交换层析4凝胶过滤层析5亲和层析6气象层析7固相层析8柱层析9纸层析10薄层层析11高效液相层析4.影响Rf值的因素有哪些1纸层析时纸层析时要在密闭仪器中加入平衡试剂使纸层析上吸附的溶剂达到饱和.2滤纸要保持洁净,点样时要适量斑点不能过大.3样品物分子结构和极性4滤纸的厚薄和纤维松紧度不一样,结合的水量也不一样。2.酵母RNA的提取和分离1.试验中为什么选择干酵母做实验材料,酵母中RNA含量较高(2.67%~10.0%),DNA含量少2.提取RNA的方法有几种,稀碱法和浓盐法3.加入酸性乙醇的目的,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可使解聚的核糖核酸沉淀,由此得到RNA的粗制品。4.如何鉴定RNA的组分,现象如何,RNA中含有核糖,碱基,磷酸各组分。核糖与浓盐酸和苔黑酚共热产生绿色;嘌呤碱与银铵络离子共热白色絮状嘌呤银化物沉淀;磷酸与钼酸铵试剂作用产生黄色的磷钼酸铵,加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。3.球蛋白提取及含量测定1.蛋白质沉淀方法有哪些,分可逆沉淀法和不可逆沉淀法两种。其中可逆沉淀法有等电点沉淀,中性盐沉淀法,有机溶剂沉淀法;不可逆沉淀法有加热沉淀,重金属盐沉淀,生物碱沉淀。2.蛋白质含量测定的方法紫外分光光度计,可见光光度计,双缩脲法,福林酚法3.分光光度计的使用及注意事项1接电源,打开样品室暗箱盖,预热20min2调节所需波长3开盖放黑色比色皿,关盖,调T%为0%4放空白对照,放样品液到比色皿2/3到3/4处,用擦镜纸擦干表面,在对照组处调T为100%5调节T%到ABS,分别测各样品分光光度值4.盐析原理将大量盐加到蛋白质溶液中,高浓度的盐离子(如硫酸铵的SO4和NH4)有很强的水化力,可夺取蛋白质分子的水化层,使之“失水”,于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出.盐析时若溶液pH在蛋白质等电点则效果更好.由于各种蛋白质分子颗粒大小、亲水程度不同,故盐析所需的盐浓度也不一样,因此调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可使各种蛋白质分段沉淀.4.影响酶促反应速度的因素1.影响酶促反应速度的因素有哪些,温度,pH,抑制剂,激活剂2.唾液淀粉酶的抑制剂,激活剂分别是,激活剂:Cl-;抑制剂:Cu2+3.NaOH对v反应实验,做碘反应实验前为何加盐酸因为碘遇NaOH变NaI和NaIO3,而不能与淀粉发生反应,所以加入盐酸中和氢氧化钠。4.温度如何影响酶活性,一般来讲,每种酶的酶活性有最适温度,在此温度下,其活性最高,偏离此最适温度时,温度越低,或者温度越高,其活性越小.而且,温度过高会导致酶失活以及变性.5.植物组织中丙酮酸含量的测定1.本实验中氢氧化钠的作用,丙酮酸与2,4-二硝基苯肼发生反应,生成的丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显红色,因此氢氧化钠作用是提供碱性环境。2.本实验中所加试剂为何不能颠倒,因为本实验中所用的丙酮酸与三氯乙酸均为酸性,而2,4-二硝基苯肼与丙酮酸的反应需要在碱性条件下显色;三氯乙酸的作用是除去蛋白质,使之沉淀,如果后加,试验结果可能会被其他蛋白质干扰。3.制作丙酮酸 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲线时为什么以8%三氯乙酸为空白对照,因为本实验所用提取液是8%三氯乙酸溶液,所用丙酮酸均溶解于该溶液中。4.测定丙酮酸含量的基本原理植物样品组织经三氯乙酸除去蛋白质后,所含丙酮酸与2,4-二硝基苯肼发生反应,生成的丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显红色。测定样品吸光度,与丙酮酸标准曲线相比较即可得丙酮酸含量。06.DNA的提取及含量测定1.DNA提取中各试剂中英文名称及作用?SDS:十二烷基硫酸钠,使蛋白质变性及破坏脱氧核酸降解酶?CHCl3:氯仿,使蛋白质沉淀被除去?乙醇:使DNA呈纤维状沉淀出来?Na2EDTA:乙二胺四乙酸二钠,抑制DNA酶活性,与Mg2+结合,保护DNA?NaCl:使蛋白质溶解?CH3CHO:乙醛,提高反应灵敏度2.加入氯仿后出现什么现象,溶液分三层,上层为DNA溶液,中层为蛋白质沉淀,下成为有机层3.DNP与RNP在盐溶液中溶解度有什么不同,DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。DNP在低浓度盐溶液中,几乎不溶解,如在0.14mol/L的氯化钠溶解度最低,仅为在水中溶解度的1%,随着盐浓度的增加溶解度也增加,至1mol/L氯化钠中的溶解度很大,比纯水高2倍。RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小,在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。因此,在提取时,常用此法分离这两种核蛋白。4.定糖法测定DNA含量的原理DNA分子中2-脱氧核糖残基在酸性溶液中加热降解,产生2-脱氧核糖并形成ω-羟基-γ-酮基戊酸,后者与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物,其反应如下图。蓝色化合物在595nm处有最大吸收,且DNA在40μg~400μg范围内时,吸光度与DNA浓度成正比。在反应液中加入少量乙醛,可以提高反应灵敏度。7.植物过氧化物同工酶聚丙烯酰氨凝胶电泳1.什么是电泳,同工酶,等电点,??在溶液中,蛋白质分子会由于氨基酸的解离而带电荷,电场中蛋白质带电粒子会向与自身电荷相反的电极泳动,这就是电泳。??指生物体内催化相同反应但分子结构不同的一组酶??氨基酸分子静电荷为零时的PH2.Acr,Bis,AP,TEMED各自中文名称及作用,Acr:丙烯酰胺,作为单体;Bis:甲叉双丙烯酰胺,交联剂;AP:0.15%过硫酸铵,化学聚合催化剂;TEMED:四甲基乙二胺,加速剂3.过氧化物酶的底物是什么,H2O24.溴酚蓝的作用,指示电泳前沿:溴酚蓝分子带负电,比蛋白质小迁移速度快,总是位于蛋白质之前。5.本实验使用的缓冲溶液是什么,写出各自的名称,PH??提取液缓冲液:PH=8.0??电极缓冲溶液:PH=8.3??上样缓冲溶液:PH=8.98.蔗糖酶米氏常数的测定1.为什么说Km是酶的特征常数,什么是Km,单位是什么,一个酶对一个特定的底物有一个特定的Km与之对应;Km是酶促反应最大速度1/2时的底物浓度;单位:mol/L、mmol/L2.双倒数作图法求Km值,横纵坐标分别是什么,横:1/【s】;纵:1/v。(【s】是底物浓度)3.NaOH作用,使酶失活,反应停止4.涉及化学反应:蔗糖水解为葡萄糖;3,5,二硝基水杨酸与葡萄糖加热反应生成棕红色的3,氨基,5,硝基水杨酸9.胰蛋白酶活性的测定1.酶活单位如何定义,一个酶活力单位是指在最适条件下,在一分钟内能转化1μmol底物所需要的酶量2.紫外分光光度计使用方法?设置波长:【GotoWL】键设置波长?【T%/ABS】:按【T%/ABS】可在透光率(T%)和吸光度(ABS)之间切换。?保存参数:可将当前参数保存在内存或数据包内。?测量屏幕:确定参数后按【样品测定】或【START/STOP】键的同时进行第一次测量,每按一次得到一个数据。?自动调零:当需要空白校正时,在测量前设置好空白样品,然后按【AUTOZERO】键,此时的光度值设定为0ABS(100%)3.BAEE,BA中文名BAEE:N,苯甲酰,L,精氨酸乙酯BA:N,苯甲酰,L,精氨酸10.植物体内游离脯氨酸含量的测定1.植物体内游离脯氨酸有何意义,??植物在正常条件下,游离脯氨酸含量很低,但遇到干旱、盐碱、低温等逆境时,游离脯氨酸便会大量积累,并且积累指数与植物的抗逆性有关。因此,脯氨酸可作为植物抗逆性的一项生化指标。??脯氨酸是水溶性最大的氨基酸,具有很强的水和能力,其水溶液具有很高的水势。其疏水端可与蛋白质结合,亲水端可与水分子结合,蛋白质可借脯氨酸束缚更多的水,从而防止渗透胁迫条件下蛋白质脱水变性。因此脯氨酸在植物的渗透调节中起重要作用。2.当改变萃取剂时比色应做哪些改变,如何选择最佳的萃取剂,??当萃取剂发生改变时,测定光密度的波长应当改变,具体如何改变,根据实验而定。??萃取剂选用原则:a.萃取机和原溶剂互不相容b.萃取剂和溶质互不发生反应c.溶质在萃取剂中溶解度远大于在原溶剂中溶解度。11.植物基因组DNA的提取与纯度测定1.CTAB的作用,使核糖体解体,蛋白质和多糖沉淀,DNA溶解2.CTAB溶液中组分有哪些,?CTAB:十六烷基三甲基溴化铵?Tris-HCl(pH=8.0):提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏?EDTA螯合Mg2+和Mn2+:抑制DNA酶活性?NaCl:提供高盐环境,使DNA充分溶解,存在于液相当中?β-硫基乙醇:抗氧化剂,有效防止酚被氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。3.DNA提取方法有哪些,CTAB法,玻璃珠法,超声波法,研磨法,冻融法,异硫氰酸胍法,碱法,酶法4.DNA纯度鉴定方法篇二:旋光度法测定蔗糖酶促蔗糖转化反应的米氏常数实验数据处理Θ~T图BAAValueABBStatisticsStatisticsStandardValueErrorStandardErrorReducedChi-SqrAdj.R-Square1287.378150.80259578.354424.100724.81417308.50034859Θ~T图BAAValue-587.30141AStandardError283.40519BValue765.6761BStandardError181.24833StatisticsStatisticsReducedChi-SqrAdj.R-Square1801.605540.92183BAAValue771.78924ABBStatisticsStatisticsStandardErrorValue116.94457188.26756Adj.StandardErrorReducedChi-SqrR-Square53.426015456.259530.95808Θ~T图BAAValue854.30527AStandardError59.46159BValue266.47343BStandardError26.06065StatisticsReducedChi-Sqr1790.00858StatisticsAdj.R-Square0.99181篇三:实验报告-不同因素对酶的影响实验报告课程名称:生物化学实验(甲)指导老师:成绩:实验名称:酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度实验类型:分离鉴定实验同组学生姓名:一、实验目的和要求(必填)三、主要仪器设备(必填)五、实验数据记录和处理七、讨论、心得二、实验内容和原理(必填)四、操作方法和实验步骤六、实验结果与分析(必填)?.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1.了解酶的专一性。2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。3.学会排除干扰因素, 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 酶学实验。二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性,酶催化的反应(酶促反应)要比相应的没有催化剂的反应快103-1017倍。酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性,即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用,对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同,它们的专一性可以分为下列几种:1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性:有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物,而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖,淀粉酶只作用于淀粉,而不作用于纤维素。3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种,而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液,具有一定的氧化能力,能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应,生成砖红色氧化亚铜沉淀。Na2CO3+2H2O2NaOH+H2CO3CuSO4+2+Na2SO4还原糖(—CHOor—C=O)+2Cu(OH)2Cu2O(砖红色或黄色)+2H2与Benedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉酶水解,产物为葡萄糖;蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解,其产物为果糖和葡萄糖,它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。三、实验材料与试剂1、实验材料?蔗糖酶(样品?);?新鲜唾液(含唾液淀粉酶);2、实验试剂?蔗糖酶液蔗糖酶液(样品?)加蒸馏水适当稀释,备用;?唾液淀粉酶液(学生自制)取0.5mL唾液至25ml量筒中,用蒸馏水(稀释)到25ml,用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异,可稀释50,400倍,甚至更高;?5%蔗糖(A.R.)溶液;?0.5%淀粉溶液(含0.3%NaCl);?Benedict试剂;四、实验器材与仪器1.漏斗,2.脱脂棉花;3.恒温水浴(37?,100?);4.量筒;5.试管;6.烧杯;7.吸量管。五、实验操作方法和步骤?检查试剂取3支试管,按下表操作:注:1、检查目的:试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在,请自己设计。?淀粉酶的专一性取三支试管,按下表操作:注:可增加一组唾液淀粉酶液经100?加热3min处理后的样品对照组。?蔗糖酶的专一性取三支试管,按下表操作:注:可增加一组蔗糖酶液经100?加热3min处理后的样品对照组。六、结果分析讨论各试管观察结果依次是:(一):1号蓝绿色,2号蓝色,3号蓝色Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液,具有一定的氧化能力,能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应,生成砖红色氧化亚铜沉淀。3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖,说明在不加酶时,淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。(1号试管是蓝绿色可能是因为有少部分的淀粉水解)(二):1号土黄色,2号黄绿色,3号蓝色加入唾液淀粉酶,1号试管底物是淀粉,所以很容易水解成葡萄糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。所以1号颜色变化比较大。(2号可能是因为蔗糖在37?恒温水浴中也有少部分水解,所以颜色变化,但变化不明显。)总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性,不能催化蔗糖水解,具有对淀粉的底物专一性。3号是对照。(三):1号蓝色,2号红棕色,3号蓝色加入蔗糖酶,2号试管底物是蔗糖,所以很容易水解成果糖和葡萄糖,与Benedict试剂共热,即产生红棕色Cu2O沉淀。所以2号颜色变化比较大。(1号可能是因为淀粉在37?恒温水浴中也有部分水解,所以有颜色变化,但变化不明显。)从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解有催化作用,对淀粉无催化作用,具有对蔗糖的底物专一性。3号是对照。七、思考题1(观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验,每组各有何意义,蒸馏水有何用,第一组作为整个实验的空白对照组,检测Benedict试剂对实验结果的颜色有何影响,排除干扰因素的存在。第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组,第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。蒸馏水作为每一个组中的空白对照,与组内其余两组进行对照。2(将酶液煮沸10min后,重做二、三的操作,观察有何结果,各试管都为蓝色,因为酶在煮沸过程中已经变性,失去催化活性,故不能催化各自对应底物的水解反应。3(在此实验中,为什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液,0.3%NaCl的作用是什么,0.3%NaCl中的Cl是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性,使实验结果不至于因为唾液淀粉酶的活性不足而导致不同。八、注意事项1.试管要干净,所有试剂加量准确,加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染;试剂用好瓶盖要立即盖好,防止试剂间的互相污染。以免实验结果的错误。-?.影响酶活性的因素——激活剂和抑制剂一、实验目的和要求1.了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。2.学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度的原理和方法。二、实验基本原理在酶促反应过程中,酶的活性常受某些物质的影响,有些物质能使酶的活性增加,称为激活剂;某些物质它们并不引起酶蛋白变性,但能使酶分子上的某些必需基团(主要是指酶活性中心上的一些基团)发生变化,因而引起酶活力下降,甚至丧失,致使酶反应速度降低,称为酶的抑制剂。酶的激活剂种类:1、一些简单的无机离子,如Mg2+、Cl-等;2、一些中等大小的有机分子,如抗坏血酸等也是激活剂,它们对某些含巯基的酶具有激活作用;3、有些酶的催化作用易受某些抑制剂的影响,因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂,如EDTA能除去重金属,因而能解除重金属对酶的抑制作用。4、具有蛋白质性质的大分子物质,这些激活剂是指可对某些无活性的酶原起作用的酶。酶的抑制剂有许多种:如重金属离子(Ag+、Hg2+、Pb2,、Cu2,等)、CO、氯化物、H2S、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性,而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的,各种激活剂对酶的作用是不同的。本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应,定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活或抑制现象。淀粉经酶促水解为葡萄糖的不同阶段的产物与碘作用的颜色反应如下:本实验中,Cl-为唾液淀粉酶的激活剂;Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同的呈色反应,定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活和抑制现象。淀粉+碘蓝色淀粉+淀粉酶水解产物+颜色变化水解的程度是通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色之变化来判断的。三、实验材料与试剂1、实验材料新鲜唾液2、实验试剂?唾液淀粉酶(学生自制)取唾液1ml至25ml量筒中,用蒸馏水稀释至25ml,用棉花过滤备用。唾液稀释倍数因人而异,可稀释50,400倍,甚至更高。?0.1%淀粉溶液?1.0%氯化钠溶液?1.0%硫酸铜溶液?1.0%硫酸钠溶液?碘化钾-碘液四、实验器材与仪器1.试管及试管架2.量筒3.漏斗4.脱脂棉花5.点滴板6.吸量管7.恒温水浴(37?)五、实验操作方法和步骤取试管4支,按下表操作:注意:?找出准确的保温时间,是本实验是实验能否成功的关键步骤之一,唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定,通过37?水浴溶保温计时,反应时间最好在8,15min以内,只有确定准确的保温时间才能进行实验。(2)加入酶液后,务必充分摇匀,保证酶与全部淀粉液接触的反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。(3)碘化钾–碘液不要过早地加到点滴板上,以免碘液挥发,影响显色效果。六、结果分析讨论1号试管为蓝紫色,2号为浅黄色,3号为褐色,4号为浅褐色。试管1中颜色最深,说明CuSO4可以抑制淀粉酶的活性;试管2中颜色最浅,基本呈碘色,故淀粉酶活性最高,说明NaCl可以激活淀粉酶的活性;试管3、4中颜色基本一致,且深浅居于试管1、2之间,淀粉酶活性一般,说明Na+、SO42-对淀粉酶活性都没有影响。故总体上看,可以得出Cl-是唾液淀粉酶的激活剂,Cu2+是唾液淀粉酶的抑制剂。七、思考题1.激活剂可分哪几类,本实验中NaCl、硫酸铜是属于哪种类型,激活剂可分为:简单无机离子、中等大小有机分子、能除去抑制剂的物质、具有蛋白质性质的大分子物质等。NaCl属于简单无机离子;CuSO4属于重金属抑制剂。2.本实验中,1,2,3,4管各有何用意,为什么要设计第3管和第4管,1管可观察抑制剂对反应影响的现象,2管可观察激活剂对反应影响的现象,第3管可以将1管中的Na和2管中的SO4对反应的影响去除,4管作为空白对照。3.抑制剂与变性剂有何不同,试举例说明。抑制剂只改变酶的催化活性,并不使蛋白质变性,其影响是可逆的;变性剂破坏了蛋白质的高级结构,使蛋白质变性,并且多数变性剂的影响是不可逆的。如:Cu是唾液淀粉酶的抑制剂,但如果将Cu去除淀粉酶的活性又可以变为正常水平。八、注意事项1.试管要干净,所有试剂加量准确,加好试剂后要摇匀。2.使用试剂时不要人为造成试剂间的互相污染,以免实验结果的错误。3.试剂用好瓶盖要立即盖好,防止试剂间的互相污染。4.两种淀粉不要弄错。5.激活剂抑制剂实验中,注意运用点滴板(显色板)来控制保温时间;如1,2,3,4管颜色反应无明显差别,可能是唾流淀粉酶活力太高或太低,若酶活性太高可将酶稀释后重做;若酶活性太低,可延长保温时间或增加酶的浓度。2+2++2-?.影响酶活性的因素——温度,最适温度测定一、实验目的和要求1.了解温度对酶活力的影响;2.学习测定最适温度的原理和方法;二、实验基本原理酶的催化反应受温度影响很大,每一种酶所催化的反应,在一定条件下,仅在某一温度范围内表现出最大的活力,即反应速度最大时的温度,这个温度称为该酶促反应的最适温度,高于或低于最适温度时,反应速度逐渐下降。因此,酶促反应与温度的关系,用酶活力对温度作图,通常具有钟罩形曲线特征。温度与酶活力的关系测定是选择一定的条件,把底物浓度、酶浓度、反应时间、pH等固定在最适状态下,然后在一系列不同温度条件下,进行反应初速度测定,以酶反应初速度对温度作图,可以得一个钟罩形的曲线,即为温度—酶活性曲线,在某温度有一酶活力最大值,这个温度即为最适温度。实验?利用唾液淀粉酶为试验对象,在0?,65?之间选择不同的温度,进行酶活力测定。根据淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同,遇碘呈现颜色的变化来判断酶活力的大小及最适温度。实验?采用蔗糖酶为试验对象,在室温至75?之间选择不同温度进行酶活力测定。蔗糖酶的活力常以其反应产物还原糖(葡萄糖)的生成量来表示。测定还原糖的方法很多,本实验选择3,5–二硝基水扬酸法测定还原糖量。在碱性条件下,3,5–二硝水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成红色氨基化合物,并在一定浓度范围内,还原糖的量与反应溶液所呈棕红色物(转载于:wWW.xIElw.COM写 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