[精彩]从槐花米中提取芦丁

[精彩]从槐花米中提取芦丁 现代化学实验技术 实验1 从槐花米中提取芦丁 一、目的要求 (1)学习从天然产物中提取黄酮苷的原理和方法。 (2)学习重结晶提纯固体物质的原理和方法。 (3)掌握黄酮苷的纸色谱检验操作。 二、实验原理 芦丁又称芸香苷，广泛存在于植物中，其中槐花米中的含量达12%,16%。芦丁有调节毛细血管壁渗透性的作用，临床用作毛细血管止血药，也作为高血压症的辅助治疗药物。芦丁是糖苷类化合物，常含三分子结晶水，呈淡黄色针状结晶，熔点为174,178 C，无水物的熔点为188 C。芦丁在冷水中的溶解度为1:10000，沸水中为1:200;冷乙醇中为1:650，沸乙醇中为1:60;易溶于碱性水溶液，难溶于酸性水溶液，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿等。 本实验是利用芦丁易溶于碱性水溶液、酸化后又析出的性质进行提取，并利用它在冷水中和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶提纯。芦丁是糖苷类化合物，其糖苷键在酸性条件下可水解产生对应的甙元——槲皮素，所以芦丁的分离鉴定可用纸色谱进行，常用乙酸乙酯:甲酸:水(6:1:3)或正丁醇:冰醋酸:水(4:1:5)作展开剂。 三、主要仪器和试剂 1. 主要试剂 槐花米、石灰乳、浓盐酸、pH试纸、质量分数95%乙醇、展开剂(乙酸乙酯:甲酸:水=6:1:3)、显色剂(质量分数2%三氯化铝)、饱和芦丁 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品乙醇溶液、饱和槲皮素标准品乙醇溶液。 2. 主要仪器 250mL烧杯、500mL烧杯、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、表面皿、毛细管、铅笔、直尺、色谱滤纸(中速、20cm×7cm)、色谱缸、烘箱、电炉、台平。 四、操作步骤 1. 芦丁的提取 取10g槐花米，置于250mL烧杯中，加入100mL水，煮沸，在搅拌下缓缓加入石灰乳至pH=8,9，在此pH下保持微沸20,30min，趁热抽滤，残渣再加50mL水，同上法再煎一次，趁热抽滤。合并滤液，在60,70 C下用浓HCl调至pH=4,5，使沉淀完全，抽滤，沉淀用少量蒸馏水洗涤，抽干，60 C干燥得粗芦丁。 2. 芦丁的精制 用水重结晶:将粗芦丁置500mL烧杯中，加入适量蒸馏水，加热煮沸，趁热抽滤。滤液静置，充分冷却，析出芦丁晶体，抽滤，产品用蒸馏水洗涤，70,80 C烘干，称重，得芦丁产品。 3. 芦丁的纸色谱检验 样品:饱和芦丁自制品乙醇溶液。 对照品:饱和芦丁标准品乙醇溶液和饱和槲皮素标准品乙醇溶液。 支持剂:色谱滤纸(中速，20cm×7cm)。 展开剂:乙酸乙酯:甲酸:水(6:1:3)。 显色剂:质量分数2%三氯化铝喷雾。 五、实验结果 1、粗芦丁为土黄色粉末，精制后的芦丁产品为淡黄色粉末。 、产率:2m(槐花米)/g m(芦丁)/g 产率/% 10 0.3550 3.5 3、芦丁纸色谱显色中:在色谱中，对照品饱和槲皮素标准品乙醇溶液有明显显色现象，饱和芦丁标准品乙醇溶液显色不明显;样品饱和芦丁自制品乙醇溶液有显色，但其显色最高点和槲皮素显色点高度不一致，最低点显色不明显。 六、分析与讨论 1、芦丁颜色正常，因为粗芦丁中海混有杂质，所以颜色较精制后芦丁深。 2、精制芦丁产率较低，可能是因为:乘热抽滤时溶液温度下降，芦丁析出留在滤纸上;还有部分芦丁未从槐花米中煮出;芦丁转移过程中损失等等。 3、实验所需槐花米粉碎太细，导致抽滤十分缓慢，因而本实验后来用纱布代替滤纸。 4、本来还应有一个粗产率，但因为实验考虑不周全，没有测定粗芦丁质量，所以芦丁粗产率无法计算得到。 5、纸色谱显色:饱和芦丁标准品乙醇溶液所有组都没有显色，可能是制备标准溶液时芦丁浓度太低;槲皮素显色正常，没有问题;样品饱和芦丁自制品乙醇溶液显色不明显，可能是精制芦丁混有杂质。 实验2 分光光度法测定蔬菜总铁量 一、目的要求 (1)学习邻二氮菲分光光度法测定铁的原理和方法，掌握分光光度计的使用。 (2)掌握标准曲线的绘制方法。 (3)掌握样品的灰化方法及高温炉的使用。 二、实验原理 在紫外-可见区电磁辐射的作用下，多原子分子的价电子发生跃迁，从而产生分子的吸收光谱。各种物质的分子都有其特征的吸收光谱，以此来获得定性的信息。而在选定波长下测量吸光度A与物质浓度c的关系，可对物质进行定量测定。分光光度法测定的基本原理是依据朗伯-比尔定律，即 I0A,,lgT,lg,Kcl I 式中T为透光率;I为入射光强度;I为透射光强度;l为吸收池厚度;c为浓度;K为吸光系0 数。当入射光波长及吸收池厚度一定时，在一定浓度范围内，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。 用分光光度法测定物质的含量，一般采用标准曲线法，即配制一系列浓度由小到大的标准溶液，在指定条件下依次测量各标准溶液的吸光度，在一定浓度范围内，溶液的吸光度与其浓度呈直线关系。以溶液的浓度c为横坐标、相应的吸光度A为纵坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。测定未知试样时，操作条件与标准曲线上的相同，根据测得的吸光度从标准曲线上查出相应的浓度，就可计算出试样中被测物的含量。测定时通常以试剂空白溶液为参比溶液，调校仪器的吸光度零点，即100%透光率。 邻二氮菲也叫邻菲啰啉，是测定微量铁(?)的灵敏度高的显色剂，在pH=2,9的溶液中，邻 2，二氮菲与Fe生成稳定的橙红色配合物。该配合物的lgK=21.3，在508nm处有最大吸收，摩尔吸稳 4-1-1光系数为1.1×10L,mol,cm。在pH=2,9之间，颜色深度与酸度无关，且在有还原剂存在的条件下， -12，3颜色深度可保持数月不变。当铁(?)浓度在5.0mg,L以内时，吸光度与Fe浓度呈直线关系。Fe，2，与邻二氮菲能生成淡蓝色配合物，lgK=14.1，因此在Fe显色前应先用盐酸羟胺(或抗坏血酸、稳 3，2，对苯二酚等还原剂)将Fe还原为Fe，以测定总铁量。 三、主要仪器及试剂 1.主要试剂 (1)铁标准溶液:准确称取0.345g分析纯硫酸铁铵[NHFe(SO),12HO]置于烧标中，加入4422 -1-160mL6mol,LHCl和少量水，溶解后用蒸镏水定容至lL，其浓度为40.0,g,mL。 (2)盐酸羟胺(NHOH,HCl)溶液:质量分数为10%，新鲜配制，两周内有效。2 (3)邻二氮菲溶液:质量分数为0.20%，配制时先用少量乙醇溶解，再用水稀释(避光保存)，两周内有效，若出现红色则不能使用。 -1-1-1(4)醋酸钠溶液(1.0mol,L)，HCl溶液(0.1mol,L和6mol,L)。 2. 主要仪器 分光光度计、lcm比色皿、25mL比色管、10mL吸量管、5mL吸量管、2mL吸量管、lmL吸量管、l00mL容量瓶、蒸发皿、坩埚、电炉、高温炉、分析天平。 四、操作步骤 1. 蔬菜样品的灰化及灰分液的制备 将蔬菜样品切碎，称取20g置于蒸发皿中，在电炉上慢慢加热炭化至无烟，然后转入坩埚并置于高温炉中，在550 C下灰化至无炭粒。称取灰分0.1g(称准至0.001g)于小烧杯中，加入 -1-1-12mL6mol,LHCl，使灰分溶解，再加入6mL0.1mol,LHCl，搅匀，抽滤，再用适量0.1mol,LHCl洗涤 -1烧杯和滤纸，合并滤液和洗涤液，最后用蒸馏水定容至100mL，所得灰分液浓度为0.001g,mL。 2. 标准曲线的绘制 用25mL比色管按下表顺序配制铁标准系列并记录测量数据(注意:加入盐酸羟胺后需摇匀，放置2分钟，再进行下一步操作)，以空白液为参比，在508nm波长下测定各溶液的吸光度。在坐标纸 -1上以铁的质量浓度(,g,mL)为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 编号 1 2 3 4 5 空白 项目 铁标准溶液/mL 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 0.00 质量分数10%盐酸羟胺/mL 0.50 质量分数0.20%邻二氮菲/mL 1.00 -11.0mol,LNaAc/mL 2.00 蒸馏水 稀释至25mL 吸光度A 0 -1铁标准溶液质量浓度/(,g,mL) 0.00 3. 灰分液的测定 在洁净的25mL比色管中，加入10.00mL灰分液，再加入0.50mL盐酸羟胺，摇匀，放置2分钟后加入1.00mL邻二氮菲和2.00mLNaAc溶液，用蒸馏水稀释至25mL刻度，摇匀。以空白液为参比，在508nm波长下测定吸光度。根据测得的吸光度从标准曲线上查出相应的浓度，按下式计算该蔬菜 -1样品铁的含量[,g,(g干灰)]。 xx6,1铁的含量,,，10[,g,(g干灰)] 0.001，V40，V五、实验结果 25 1.标准曲线的绘制: 编号 1 2 3 4 5 空白 项目 铁标准溶液/mL 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 0.00 0.168 0.340 0.496 0.663 0.826 0 吸光度A 0.8006 1.6132 2.4198 3.2264 4.0330 0.00 铁标准溶液质量浓度 -1/(,g,mL) 1.0 Y=0.00375+0.20429X0.9 R=0.99993 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4Absorbance 0.3 0.2 0.1 0.0012345 2+ mass concentration of Fe 图 铁标准曲线 2、灰分测定: A(灰分) 铁质量浓蔬菜样品铁含量 -1--1度)/,g.mL /,g,(g干灰) 0.193 0.9264 2316 六、分析及讨论