葡聚糖凝胶层析

葡聚糖凝胶层析葡聚糖凝胶层析 1.凝胶的理预预预交葡聚糖凝胶的市售商品多干燥粒,使用前必预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预充分溶。方法是将欲使用的干凝胶慢地倒入预预预预预预预预预预预预预预预预预预预5,10倍的去离子水中,参照相料预预预中凝胶溶所需,行充分浸泡,然后用倒法除去表面预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预浮的小粒,并减抽气排除凝胶液中的气泡,准装柱。在多情况下,也可采用加煮沸方法行凝胶溶,预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预此法不...

葡聚糖凝胶层析 1.凝胶的理预预预交葡聚糖凝胶的市售商品多干燥粒,使用前必预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预充分溶。方法是将欲使用的干凝胶慢地倒入预预预预预预预预预预预预预预预预预预预5,10倍的去离子水中,参照相料预预预中凝胶溶所需,行充分浸泡,然后用倒法除去表面预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预浮的小粒,并减抽气排除凝胶液中的气泡,准装柱。在多情况下,也可采用加煮沸方法行凝胶溶,预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预此法不能加快溶速率,而且能除去凝胶中染的菌,同排除气泡。预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预2.装柱预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预析柱的一般根据分离品的和品的数量而定。化蛋白,柱床体品体的预预预预预预预预预预预预预预25,100倍。去除及游离光素品体的预预预预预预预预预预预预预预4,10倍。柱太短,影响分离效果。柱一些,分离效果好,但柱太,延分离,预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预品也稀度。析柱的内径也要适当。内径,会生预预预预预预预预“预”器壁效,即靠近管壁的流速要大于中心的流速影响分离效果。所以析柱的内径和高度有一定的比例。于除来预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预1预5,1预25,于化蛋白来预预预预预预预预预预预1预20,1预100。凝胶柱的装填方法和要求,基本上与离子交柱的制相同。一根理想预预预预预预预预预预预预的凝胶柱要求柱中的填料(凝胶)密度均匀一致,没有空隙和气泡。通常新装的凝胶柱用适当的冲溶液平衡后,将色的葡聚糖预预预预预预预预预预预预预预预预–2000、胞色素,预预预预预或血蛋白等物配制成量度预预预预预预预预预预预预预预2g/L的溶液柱,察色是否均匀下预预预预预预预预预预预预移,以定新装柱的技量是否合格,否,必重新装填。预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预 3.加与洗脱预预预预，1,加量:加量与定方法和析柱大小有。如果预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预方法灵敏度高或柱床体小,加量可小,否,加量增大。例预预预预预预预预预预预预预预预预预预预如利用凝胶析分离蛋白,若采用预预预预预预预预预预预预28Onm波定吸光度,一根预预预预预预预预预预2cm×6Ocm的柱来预预预预,加量需5mg左右。一般来,加量越少或加体越小预预预预预预预预预预预预预预(预预预预品度高),分辨率越高。通常品液的加入量掌握在凝胶床体的预预预预预预预预预预预预预预预预预预5,,10,。品体大,分离预预预预预预预预预效果不好。预预预预预预预预预预预预预预预预预预预高分辨率的分子析,品溶液的体主要由内水体(Vi)所决定,故高吸水量凝胶如Sephadex G-200,每mL预预预预床体可加0.3,0.5mg溶,使用体预预预预预预预预0.O2倍体,而预预预预预低吸水量凝胶如Sephadex G–75,每mL预预预预预预预预床体加溶量0.2mg,品体预预预预预0.Ol倍体预预预。，2,加方法:如同离子交柱析一,凝胶床平衡后,吸去预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预上液体,待平衡液下降至床表面,流出口,用滴管加入品液,预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预打流出口,使品液慢预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预入凝胶床内。当品液面恰与凝胶床表面持平,小心加入数渗mL洗脱液冲洗管壁。然后用大量洗脱液洗脱。预预预预预预预预预预预，3,洗脱:加完品后,将析床与洗脱液瓶、、分部收集预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预器及相,根据被分离物的性,先估好一个适宜预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预的流速,定量地分部收集流出液,分一至数每预mL。各分可用适当的方法预预预预预预预预预预行定性或定量分析。凝胶柱析一般都以一冲溶液或溶液作洗脱液,有预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预甚至可用蒸水。洗脱用于流速控制的装置最好的是恒流。若无此装置,可用控制操作的法行。品体不宜多,最好床体的预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预1,,5%,最多不要超预10%。品度也不宜大,度大粘度大,预预预预预预预预预预预预预预预预预预分离效果差,一般不超预4%。洗脱液与膨一致,否更溶,凝胶体会生化,影预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预响分离效果。洗脱液要有一定的离子度和强pH预。分离血清蛋白常用0.02,0.1Mol/L pH 6.9,8.0的PBS液，0.14Mol/L NaCl,和0.1Mol/L pH8.0Tris-HCl预预预预预冲溶液，0.14Mol/L NaCl,。凝胶再生和保存凝胶析的体不会与被分离的物生任何作用,因此预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预凝胶柱在析分离后稍加平衡即可行下一次的分离操作预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预但使用多次后,由于床体小,流速率降低或染等原因,预预预预预预预预预预预预预预预预预预预使分离效果受到影响。此凝胶柱需行再生理,其方法是预预预预预预预预预预预预预预预预预:先用水反行逆预预预预预向冲洗,再用冲溶液平衡,即可行下一次分离。预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预使用的凝胶,若短保存,只要反洗除去蛋白等预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预,加入适量防腐即可,若期保存,需将凝胶从柱中取出,行洗、脱水和干燥等理后,装瓶保存。预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预预格:分子量定一般用到葡聚糖凝胶G-25、G-50、G-75、G-100

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