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细胞因子蛋白含量(Lowry法)测定标准操作规程.doc

细胞因子蛋白含量(Lowry法)测定标准操作规程

爱刻骨铭心yy
2017-10-25 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《细胞因子蛋白含量(Lowry法)测定标准操作规程doc》,可适用于求职/职场领域

细胞因子蛋白含量(Lowry法)测定标准操作规程细胞因子蛋白含量(Lowry法)测定标准操作规程依据:《中华人民共和国药典》年版第三部。范围:适用于细胞因子原液的检定。目的:检测细胞因子原液的蛋白质含量。原理:lowry法是在双缩脲反应的基础上发展起来的。是由试剂A和试剂B二部分组成。试剂A是碱性铜试剂试剂B含有磷钨酸和磷钼酸。在碱性条件下蛋白质与碱性铜试剂产生双缩脲反应形成紫红色的蛋白质与铜的复合物然后此复合物中的酪氨酸和色氨酸残基还原试剂B中的磷钼酸磷钨酸产生深兰色为钼兰和钨兰的混合物其呈色强度与蛋白质浓度呈正相关可用比色法测定蛋白质浓度。内容:材料(样品:经二人核对好批号后测定。(试剂钨酸钠NaWOHO化学纯钼酸钠NaMOHO分析纯O磷酸HPO分析纯浓盐酸HCl分析纯硫酸锂LiSO分析纯酒石酸钾钠CHOKNaHO分析纯硫酸铜CuSO分析纯氢氧化钠NaOH分析纯无水碳酸钠NaCO分析纯溴水Br分析纯(标准品:由中国药品生物制品检定所提供。(注射用水:符合《中华人民共和国药典》年版要求。(其它材料:试管架、吸球、硫酸纸、药勺、记号笔、玻璃比色杯。(仪器、设备紫外分光光度仪,UV扭力天平TNB冰箱BODA(器皿试管、量筒(ml、ml)、玻璃瓶(ml、ml)、棕色磨口瓶(ml、ml)、吸管(ml、ml、ml)以上均由本室洗刷组处理干净。方法(准备工作((工作环境:控制区确认场地清场合格摘下“清场合格”标志牌,挂上“使用中”标志牌。((调试仪器设备(((紫外分光光度仪确认运行状态完好已挂有“备用”标志。(((扭力天平确认运行状态完好已挂有“备用”标志。(((冰箱确认运行状态完好已挂有“备用”标志。((试剂配制(((试剂A:用扭力天平准确称取克NaCO溶于mlmolLNaOH溶液中另将克CuSOHO溶于ml酒石酸钾钠溶液中临用前将二种溶液按:的比例在ml洁清的玻璃瓶中混合均匀二人复核贴签标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期。放置分钟即为试剂A。(((试剂B:在升磨口回流蒸馏器中向烧瓶中加入钨酸钠(NaNOHO)克钼酸钠(NaMOHO)克蒸馏水ml磷酸ml浓盐酸ml充分混匀后接通回流凝管沸腾后文火回流小时冷却后加硫酸锂克蒸馏水ml及数滴溴水摇匀取下回流冷凝管开口继续沸腾分钟以驱走过量的溴此时溶液为金黄色冷却后用蒸馏水定容至ml放棕色瓶中冰箱保存回流整个过程应在通风橱中进行使用时倍稀释。二人复核贴签标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期冰箱放置。(((MNaOH:用扭力天平准确称取NaOH克加注射用水至ml配好后的液体放ml洁净的玻璃瓶中盖上胶栓二人复核贴签标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期室温备用。(((酒石酸钾钠:用扭力天平准确称取酒石醋酸钾钠克加注射用水至ml配好后的液体放入ml洁净的玻璃瓶中盖上胶栓二人复核贴签标明溶液的名称、浓度、体积、批号、配制日期放冰箱备用。(具体操作步骤((摘下设备上的“备用”标志挂上“运行”标志设备的详细操作参见设备标准操作规程。((取洁净干燥的试管若干分成二组按下表进行操作。表试管编号处理标准溶液(ml)DdHO(ml)蛋白质(mgml)试剂A(ml)充分混匀室温(~)放置十分钟试剂B(ml)迅速混匀室温放置分钟以、管为空白打开紫外分光光度仪挂上“运行”牌在波长nm处比色测定。((标准曲线的绘制将测得的两组平均OD值和对应蛋白含量值输入紫外分光光度仪中建立回归方程画出回归曲线即为标准曲线。((待测样品蛋白质的测定样品蛋白质浓度的测定过程同项方法。表样品批号管号OD稀释倍数蛋白含量结果(平均值)((将所使用的仪器关闭拔下电源。((场地摘下“使用中”的标志牌挂上“待处理”标志牌。结果的判定(判定标准取二组测试样品的OD平均值输入回归方程所得的结果乘以稀释倍数即为测试样品的实际蛋白质浓度。(判定结果、填写记录:测定结果经二人复核并填写纪录。清场(称药后将药品瓶盖盖紧放回原处。(将扭力天平复位砝码放回原砝码盒将天平清理干净后放回原处挂上备用牌。(用过的玻璃器皿用纯化用水洗干净后返回洗刷组。(检查是否关闭所有仪器开关拔下电源。(将玻璃比色杯用纯化水清洗干净后放回原处。(将仪器的“使用”牌取下挂上“备用”牌。(用拖布擦净地面用抹布擦净工作台。(填写清场记录。(清场后由车间工序负责人或质量监督员检查合格后摘下“待处理”牌挂“清场合格”标志牌。注意事项在试剂B的配制过程中蒸馏烧瓶必须冷却后再加硫酸锂否则试剂容易溅出。

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