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落胆固醇试验方法[最新].doc

落胆固醇试验方法[最新].doc

上传者: 雨下de那么认真 2017-10-15 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《落胆固醇试验方法[最新]doc》,可适用于综合领域,主题内容包含落胆固醇试验方法最新降胆固醇乳酸菌的筛选、鉴定及降解机制的研究浙江工商大学汪晓辉一、降胆固醇培养基的制备根据Razin等提供的方法制备胆固醇胶束作为符等。

落胆固醇试验方法最新降胆固醇乳酸菌的筛选、鉴定及降解机制的研究浙江工商大学汪晓辉一、降胆固醇培养基的制备根据Razin等提供的方法制备胆固醇胶束作为高胆固醇培养液中的胆固醇源。准确称取mg卵磷脂和mg胆固醇于具塞试管加入三氯甲烷溶剂mL超声波振荡溶解。氮气流吹干溶剂加入mL无菌水。试管放入冰浴通氮气条件下超声波(w,kHz)处理min停止min保持温度平衡循环三次所得的溶液于rmin离心min所得的上清液即为卵磷脂胆固醇胶束溶液。保存当天使用作为胆固醇源添加于MRS培养基中用于以下的实验。二、邻苯二甲醛法测定胆固醇含量钾旋涡振荡。于取mL样品加入mL乙醇和mL(wv)氢氧化下恒温水浴min冷却后加入mL正己烷。旋涡振荡萃取min,加入mL蒸馏水振荡均匀静置分层取mL上层正己烷水浴氮气吹干加入mLmgmL(wv)邻苯二甲醛溶液(用冰醋酸定容)和mL浓硫酸显色反应min于nm处测定吸光度值。三、胆固醇标准曲线的测定准确称取g胆固醇粉末正己烷定容mgmL的溶液。然后分别取,,,,,,mL到比色管中水浴氮气吹干后加入mLmgmL邻苯二甲醛溶液和mL浓硫酸显色反应min在nm处测定吸光度值以胆固醇含量为横轴吸光度值为纵轴作标准曲线。四、降胆固醇乳酸菌的体外筛选将乳酸菌接种于MRS液体培养基静置培养Ih转接次活化后按(vv)接种量接种于mL降胆固醇筛选培养基中摇匀后立即取样mL,rmin离心min取上清液用邻苯二甲醛比色法测定胆固醇含量。接种后的发酵液静置培养h后用同样方法测定上清中胆固醇含量做多组平行求平均值。胆固醇的降解率:V=(BA)B式中:A为各实验菌株发酵后的培养液nm处的吸光度值。B为空白对照nm处的吸光度值。降胆固醇益生菌的研究黑龙江大学徐晶雪一、胆固醇标准曲线的制作精确称取的胆固醇mg溶于无水乙醇中并定容至mL再精确移取此胆固醇溶液mL加入无水乙醇定容至mL即为胆固醇标准液吸取胆固醇标准液mL于试管中。在各管中加入无水乙醇使总体积达mL再沿管壁缓慢加入mL硫酸铁铵显色剂加完以后再充分振摇混匀促进呈色。将各试管室温放置min后于分光光度计nm波长读取各管吸光度值(A)并绘制标准曲线。二、供试菌液的制备()供试菌液的活化培养将斜面保存的菌株接种至MRS液体培养基中恒温培养h取菌悬液mL转接至装有mLMRS液体培养基的mL三角瓶中静置培养h。()菌悬液的制备将菌液rmin离心min用已灭菌的生理盐水洗涤菌体沉淀三遍并悬浮于等体积的无菌生理盐水中。三、MRSCHOL(高胆固醇MRS培养基)的制备精确称取胆固醇g用少量无水乙醇溶解并定容至mL终浓度mgmL用孔径为μm的微孔滤膜过滤除菌后按照的量加入到已灭菌的MRS液体培养基中使MRS液体培养基中胆固醇终浓度为mgmL。四、菌株体外降胆固醇能力的测定将菌株菌悬液分别以和的接种量接种于MRSCHOL培养基中恒温培养(低速振荡培养rmin)h和h后分别测各菌株胆固醇降解能力。菌株胆固醇降解能力的测定:取菌株液体培养物以及未接菌的MRSCHOL培养基摇匀后吸取mL于装有mL无水乙醇的离心管中混匀室温放置minrmin离心min取上清液mL于试管中缓缓加入mL硫酸铁铵工作液立即摇匀空白样为mL无水乙醇加入mL硫酸铁铵工作液室温放置min于nm下测各个样品的吸收值并计算胆固醇的降解率。

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