生鲜牛乳检验方法

生鲜牛乳检验 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 益生源乳业有限公司 生鲜牛乳检验方法 文受 编号:YSYRY-724-QD02/1.0 件控 目 录 一、生鲜牛乳检验标准 二、生鲜牛乳检验方法指导 (一)总则 (二)生鲜牛乳感官评定及温度测定方法指导 1. 感官评定 2(温度的测定 (三)生鲜牛乳理化检验方法指导 1(酒精试验 2(煮沸(热温度性)试验 3(酸度的测定 4. 密度的测定 5. PH值的测定 7. 脂肪的测定 8. 蛋白质的测定 9. 非脂乳固体的测定 10.乳糖、水分、灰分、密度、冰点、蛋白质、脂肪、非脂乳固体 11(抗生素残留检验 12. 六六六、滴滴涕的测定 13.三聚氰胺的检测 (四)生鲜牛乳微生物指标检验方法指导 1(菌落总数的检验 2(美蓝试验 3(大肠杆菌的检验 4. 金黄色葡萄球菌的检验 (五)掺杂异物的检验方法 1 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第1页 共31页 益生源乳业有限公司 1. 掺水的检验 2. 掺盐的检验 3. 掺碱(碳酸钠)的检验 4. 硝酸盐、亚硝酸盐(定性检测方法)的检验 附:感官品评作业指导 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 修订: 审核: 审批: 日期: 2 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第2页 共31页 益生源乳业有限公司 生鲜牛乳检验标准 收购的生鲜牛乳系指从正常饲养的、无传染病和乳房炎的健康母牛乳房内挤出的常 乳。 检验标准: 序检验 方法名称 检验标准名称 标准号 备 注 号 项目 《食品中脂肪的测定》 GB/T5009.6 罗兹-哥特里法 《乳中脂肪的测定》 IDF 1D 乳成分分析仪脂肪 1 全脂乳乳脂肪的测定-中仪器法 IDF141C (FT120、FTIR、 红外分析仪操作指南 S50、UL20Ac等) 盖勃法 《牛乳检验方法》 GB/T5409 多个联组消化《牛奶中氮的测定》 IDF20-2 法(常量法) 半微量凯氏定《食品中蛋白质的测GB/T 5009.5 蛋白质 氮法 定》 2 全脂乳乳蛋白质的测定乳成分分析仪 仪器法 -中红外分析仪操作指(FT120、FTIR、IDF141C 南 S50、UL20Ac等) 乳成分分析仪烘干干燥、计算《牛乳检验方法》 GB/T5409 (FT120、FTIR、法、仪器法 S50、UL20Ac等) 非脂乳 3 固体 《乳与乳制品卫生标准 甲法、乙法 GB/T5009.46 的分析方法》 《乳与乳制品卫生标准 酸度 4 常规滴定法 GB/T5009.46 滴定法 的分析方法》 pH值 5 pH计法 实验室pH计 GB/T11165 收 奶 6 温度计法 / / 温 度 酒 精 7 实 验 仪器法 抗生素 8 《鲜乳中抗生素残留 残留 TTC法 GB/T4789.27 量检验》 菌 落 《食品卫生微生物学检平板计数法 GB/T 4789.2 9 总 数 验 菌落总数测定》 3 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第3页 共31页 益生源乳业有限公司 菌落总数微生物快速检测TMPetrifilm测/ / 仪 试片法 大肠杆菌《食品卫生微生物学检/ GB/T 4789.38 10 计数 验大肠杆菌计数》 金黄色葡《食品卫生微生物学检萄球菌计 验 金黄色葡萄球菌计GB/T 4789.37 11 数 数》 理化指标 指标 项目 巴氏杀菌乳、灭菌巴氏杀菌乳、灭菌调 乳 味乳 脂肪, ?3.4(3.1) 蛋白质, ?2.96(2.95) 非脂乳固体, ?8.2 o酸度(牛乳)T ?18 6.40-6.80 PH值 收奶温度? 1—8 杂质度(mg/kg) ?2 密度(20?/4?) ? ?1.0280 铅(Pb)/(mg/kg) ?0.05 无机砷/(mg/kg) ?0.05 黄曲霉毒素M1(μg, ?0.5 kg) 三聚氰胺(mg/kg) ?2 酒精实验 阴性 硝酸盐(以NaNO计)?11.0 3 (mg/kg) 亚硝酸盐(以NaNO计)?0.2 2 μg,kg) 4 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第4页 共31页 益生源乳业有限公司 微生物指标 项目 指标 菌落总数 万cfu/mL ? 50 90 大肠菌群MPN/100ml ? 致病菌沙门氏菌 (指肠道致 金黄色葡萄病菌和致病不得检出 球菌 性球菌) 志贺氏菌 5 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第5页 共31页 益生源乳业有限公司 二、生鲜牛乳检验方法指导 (一)总则 标准:执行《益生源乳业有限公司企业标准 生鲜牛乳收购标准》。 取样:以奶车为单位进行采样。 (二)生鲜牛乳感官评定及温度检验方法指导 2.1 感官评定 : 2.1.1、色泽和组织状态 :打开奶车罐盖，观察牛奶表面有无杂草、杂物、上浮脂肪团块及牛奶的色泽和组织状态。取适量乳样于50ml烧杯中，在自然光下观察色泽和组织状态。 2.1.2滋味、气味:打开奶罐口盖时，闻罐内生鲜原奶的气味;取牛乳50ml于250ml三角瓶中置电炉上煮沸，闻其气味。冷却至25?时，用温开水漱口，品尝其滋味。(任何温度下只要存在不可接受的异味，均可判为不合格) 2.1.3口感品尝:接过两杯奶车运来的新鲜原奶，取150毫升左右放于锥形瓶中于110?蒸汽灭菌后冷却品尝。 注:任何温度下只要存在不可接受的异味，均可判为不合格。 2.2牛奶温度的测定 取样后，立即将校准过调零的温度计插入样品中，待温度计温度不再变化时(一般为1min左右)，读取读数。温度计用之前需要校正。 (三)生鲜牛乳理化检验方法指导 1.酒精试验 1.1原理 乳中蛋白质形成稳定的胶体溶液，当PH达到等电点时，发生絮凝。 生鲜牛乳在酸度升高后，与等体积中性酒精混合后会出现絮片;酸度值可根据生成絮片时对应的酒精浓度粗略地判定出来，参考标准见表1。 表1 ºT 酒精浓度不出现絮片的参考酸度 70º 19 以下 72º 18 18 以下(包括) 75 16-18 ? 6 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第6页 共31页 益生源乳业有限公司 1.2.仪器 平皿，直径80-90 mm 温度计、酒精计:检定合格 吸管，2ml(检定) 1.3.试剂 所有试剂均应为分析纯;实验用水至少应是蒸馏水。 酒精:根据需要用分析纯中性乙醇配制70º、72º、75º的酒精。 注:如酒精呈酸性，可用0.1mol/L NaOH进行中和至稍有粉色，中和时推荐使用5g/L酚酞指示剂。 1.4方法 1.4.1 准确吸取2ml牛乳于洁净干燥的平皿中。注:该步骤开始后，应将试验连续进行下去直至完成，中间不得间断。酒精加入混合均匀后，应在30秒内观察结果。 1.4.2在加有乳样的平皿中加入2ml所需浓度的酒精(75º、72º、70º)，要边加边摇，使酒精与牛乳均匀混合，观察是否有絮片生成(絮片无论大小)。 注:仲裁试验必须在20ºC条件下进行，必要时扩大取样量和检样量。 1.5.结果判定 出现絮片的牛乳为酒精试验阳性乳，不出现絮片的牛乳为酒精试验阴性乳。 、煮沸(热温度性)试验 2 2.1仪器 三角瓶，250ml 量筒，50ml;10ml 可调电炉及石棉网 2.2方法 取50ml乳样于250ml洁净干燥的三角瓶中，置于电炉上加热，加热过程中不停摇动。当三角瓶中的牛乳沸腾后，将三角瓶取下，稍稍冷却后将牛奶倒掉，用少量水(约10ml)轻轻冲洗三角瓶，观察三角瓶底白色颗粒的多少。 2.3结果判定 将三角瓶底白色颗粒的多少与《原奶煮沸实验颗粒标准板》进行比较。 7 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第7页 共31页 益生源乳业有限公司 附录 3、酸度的测定 3.1 原理:取10ml牛乳，用20ml蒸馏水稀释，加入0.5,的酚酞指示剂0.5ml，以0.1mol/LNaOH溶液滴定，以所消耗的溶液的毫升数乘以10，即中和100ml牛乳所需 o0.1mol/L溶液毫升数，消耗1ml为T(吉尔涅尔度) 3.2仪器与试剂 ? 氢氧化钠标准溶液:c(NaoH)=0.1mol/L(4.0g/L)?0.5,酚酞溶液酚酞指示剂。?150锥形瓶 3.3实验步骤:准确吸取10mL样品于150mL锥形瓶中，加20mL经煮沸冷却后的水(无二氧化碳水)及数滴酚酞指示液，混匀，用配制好的氢氧化钠标准溶液滴定至出现粉红色，并在0.5min内不褪色，消耗的氢氧化钠标准溶液毫升数乘以10即为酸度 o酸度(T)=1000×V(NaOH)*C(NaOH) 3.4公式: 4、密度的测定 本标准规定牛乳密度为 的牛乳与同体积4?水的质量比值。 4.1仪器:?乳稠计:有20?/4?及15?/15?两种，前者较后者测得的结果低2 ?玻璃圆筒或200ml -250ml 量筒:量筒的高度应大于乳稠计的长度，其 8 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第8页 共31页 益生源乳业有限公司 直径大小应使在沉入乳稠计时其周边和圆筒内壁的距离不小于5mm。 4.2步骤取混匀并调节温度为10?-25?的试样，小心倒入容积为250的玻璃圆筒内并加到容积的四分之三，勿使发生泡沫并测量试样温度。小心将乳稠计沉入试样中到相当刻度30?处，然后让其自然浮动，但不能与筒内壁接触。静置2-3min,眼睛对准筒内牛乳液面的高度，读出乳稠计数值。根据试样的温度和乳稠计读数查表换算成20?时的度数。相对密度与乳稠计刻度关系式: 20 X=(P-1.00)×1000 4 20X: 乳稠计读数; P:试样的相对密度. 4 当用20?/4?乳稠计，温度在20?时，读数代入公式(1相对密度即算出;测量时不在20?要查表换算成20?时读数，再代入公式) 5、pH值 具体操作步骤见GB/T11165-2005 1.仪器:酸度计或电位滴定仪(测定前均需校准) 2.方法:使用前按酸度计操作规程校正酸度计;将酸度计的电极插入装有样品的容器中(样品在水浴中保持至25?或将酸度计电极进行温度补偿)，待酸度计显示数字稳定后，进行读数。 6、脂肪的测定 2003 具体操作步骤见GB/T5009.6- 脂肪的测定 方法一(基准法):罗兹,哥特里法 1.原理 样品用浓氨水和乙醇处理，氨水使酪蛋白钙盐变成可溶性的盐，促进脂肪球和乙醚的作用;加入乙醇使一系列的能被酒精浸出的物质留在水相中。然后利用乙醚提取试样中脂肪。加入石油醚使乙醚不被水饱和，并使分层清晰。将醚层倒入脂肪收集瓶中后使乙醚和石油醚挥发掉，即得到剩在收集瓶中的脂肪的重量。 2.其他要求 2.1 样品的制备 使样品充分混匀(必要时，将检样水浴加热至40?、混匀，冷却至室温)。 2.2 样品的称取和抽提准备 9 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第9页 共31页 益生源乳业有限公司 用10ml吸管将液体样品移入干燥、洁净的小烧杯中，置于分析天平上用减量法称取10,11g，准确至0.1mg，移入毛氏抽脂瓶。 3.允许差 3.1重复性 在短时间间隔内，同一分析人员对同一样品进行的两次单独试验的结果差，应不得超过下列值: 生鲜乳和加工乳: 0.02% —脂肪含量为0.5,2%的液体乳产品: 0.02% —脂肪含量,0.5%的液体乳产品: 0.01% 3.2 重现性 不同实验室两个分析人员对同一样品进行的两次独立试验的结果之差，应不得超过下列值: ——生鲜乳和加工乳: 0.04% ——脂肪含量为0.5~2%的液体乳产品: 0.03% ——脂肪含量,0.5%的液体乳产品: 0.025% 4.仪器设备 a.电子天平:灵敏度为0.1mg b.鼓风式烘箱:箱内温度控制在102?2? c.毛氏抽脂瓶及瓶塞(可有配套胶塞) d.毛氏抽脂瓶架 e.脂肪收集瓶:250ml锥形瓶 f.刻度吸管:2ml、5ml、10ml g.量筒:25ml j.水浴锅 5.试剂 所用试剂都是分析纯，所用水为蒸馏水。 a.氨水:NH的含量为25% 3 b.乙醇:体积分数为95% c.刚果红溶液:将1g刚果红溶于水稀释至100ml(或5g/L酚酞指示剂) 10 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第10页 共31页 益生源乳业有限公司 d.乙醚:分析纯 0e.石油醚:分析纯、沸程30,60C f.混合醚:等体积乙醚和石油醚混合 6.步骤 6.1脂肪收集瓶的准备: 将洁净的脂肪收集瓶在烘箱中烘1h，取出后置于天平室内冷却至室温(防止灰尘)，称取脂肪收集瓶的质量，准确至0.1mg，称量时要带手套或使用夹子。 6.2样品的称取和抽提准备: (1)用10ml吸管将样品移入一个干燥、洁净的小烧杯中，用减量法称取10-11g样品于毛氏抽脂瓶中，准确至0.1mg。 (2)加2ml25%的氨水，在小球内混合均匀。加完氨水后，应将实验一直做完，不得停顿和延误。 6.3空白试验:在测定的同时进行空白试验，用10ml水替代样品，其他同样品的测定。 6.4加10ml乙醇混好，允许液体在小球和大柱间流动，只是要避免液体过于接近瓶口，加两滴刚果红溶液混合均匀。 6.5加25ml乙醚，塞紧塞后，两手分握抽脂瓶的两端，以相同位置和振幅摇混1min，小心地拔掉塞子，用少量混合醚淋洗塞子和瓶口，使淋洗液都流入瓶内。 6.6加25ml的石油醚，塞紧塞子，再用两手分握抽脂瓶两端，以相同位置和振幅摇混0.5min，小心拔掉塞子，用少量的混合醚淋洗塞子和瓶口，使淋洗液都注入瓶内。 6.7将毛氏抽脂瓶置于支架上放置30min以上，至醚层和水层完全分开(或将加塞的抽脂瓶放入离心机中，在500-600r/min下离心1-5min)。 6.8拿住抽脂瓶的小球，小心并尽可能完全地将醚层倾入已称好重的脂肪收集瓶中，要避免将水层的液体倾入收集瓶中，用混合醚淋洗抽脂瓶口的外部，让淋洗液流入收集瓶中。 6.9重复3.4-3.8的操作，进行第二次抽提，(加入量分别为5ml乙醇，15ml乙醚、15ml石油醚) 6.10重复3.9中的操作，只是不再加乙醇，进行第三次抽提。 6.11用混合醚淋洗脂肪收集瓶的瓶口和内壁后，将脂肪收集瓶中的乙醇和醚尽可能 11 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第11页 共31页 益生源乳业有限公司 地挥发掉。 6.12将脂肪收集瓶置于102?2?烘箱中烘1h，在天平室冷却(防尘)1h后称量，然后再将脂肪收集瓶置于烘箱中烘0.5h，再冷却0.5h后称量，重复操作，直至两次称量的差值小于0.5mg。 7.结果计算: 计算公式:(脂肪含量以质量数表示) -m) (m-m)-(m1234 W, ×100 m0 式中:W,样品脂肪的质量分数，% m,称取的样品量，g 0 m,脂肪收集瓶和抽提出的物质的量，g 1 m,空脂肪收集瓶的重量，g 2 m空白试验中收集瓶和抽提出的物质的量，g 3, m空白试验中收集瓶的重量，g 4, 7注意事项 7.1空白试验检验试剂 在进行空白试验时，使用相同的质量控制瓶，以消除环境及温度对检验结果的影响。在极其偶然的情况下，溶剂中可能会有易溶于脂肪的挥发性物质，此时应对所有试剂做空白试验。必要时，于每100mL溶剂中加入1g无水奶油后重新蒸馏，重新蒸馏后必须尽快使用。 7.2空白试验与样品测定同时进行 对于存在非挥发性物质的试剂可用与样品测定同时进行的空白试验值进行校正，抽脂瓶与天平室之间的温差可对抽提物的质量产生影响。在理想的条件下(试剂空白值低，天平室温度相同，脂肪收集瓶充分冷却)，该值通常小于0.5mg。在常规测定中，可忽略不计。若此值稍高(?2.5mg)，一般也可忽略不计，校正之后，结果仍可准确的，但当校正值大于2.5mg时，检验报告中应予以说明。如果空白试验值经常超过0.5mg，且近期没有对试剂进行检验，则应马上对试剂进行检验，更换或提纯任何不纯的试剂。 12 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第12页 共31页 益生源乳业有限公司 7.3乙醚、石油醚必须彻底挥发，否则放入烘箱中有爆炸的危险。实验必须在通风橱内完成，且周围不能有明火。 7.4脂肪接收瓶反复加热，会因脂类氧化而增重。在恒重过程中，如质量增加，应以增重前的质量为恒重。 7.5抽提所用的乙醚、石油醚要求无水、无醇、无过氧化物，因水和醇会导致糖类及水溶性盐类等物质的溶出，使测定结果偏高。过氧化物会导致脂肪氧化，在烘干时还有引起爆炸的危险。 7.6乙醚中过氧化物的检验 取一只具玻璃塞小量筒，用乙醚冲洗，然后加入10mL乙醚，再加入1mL新制备的100g/L的碘化钾溶剂，振荡，静止1min，两相中均不得有黄色。也可使用其他适当的方法检查过氧化物。 在不加抗氧化剂的情况下，为长久保证乙醚中无过氧化物，使用前三天按下法处理: 2将锌箔削成长条，长度至少为乙醚瓶的一半，每升乙醚用80cm锌箔。 使用前，将锌片完全浸入每升中含有10g五水硫酸铜和2mL质量分数为98%的浓硫酸溶液中1min，用水轻轻彻底地冲洗锌片，将湿的镀铜锌片放入乙醚瓶中即可。也可以使用其他方法，但不得影响检测结果。 7.7 乙醚中含抗氧化剂的情况 如果每1kg乙醚中约含1mg抗氧化剂，不影响使用。如乙醚中含有较高的抗氧化剂，例如:每千克中含有7mg抗氧化剂，此种醚仅用于常规测定，并且空白试验与样品测定要同时进行，以校正抗氧化剂残留引起系统误差。若用于基准法测定，使用前应重新蒸馏。 方法二:仪器法 1.仪器 FT120型(或50型)全组份分析仪(需进行校准)、50ml烧杯 2(方法 取经30-40?混匀、过滤的样品约40ml于烧杯中，将烧杯放在全组份分析仪的吸样管下，选择相应经过校准的检测程序，按检测键，待电脑显示屏出现检测结果时，读数即可。 方法三:盖勃法 13 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第13页 共31页 益生源乳业有限公司 1.原理 用硫酸把乳制品中以酪蛋白钙盐形态存在的酪蛋白转变为可溶性的重硫酸酪蛋白化合物与生成不溶性的硫酸钙，溶解脂肪球膜，把脂肪释放出来，加入异戊醇促进脂肪的分离;分离出的脂肪量可直接从乳脂计的刻度管中读取，或据脂肪柱读数计算出。 2.仪器设备 2.1盖勃牛乳乳脂计:分刻度为0.01 2.2乳脂计架 2.3恒温水浴锅 2.4盖勃离心机 2.5硫酸自动吸瓶或刻度吸管:10ml 2.6异戊醇自动吸瓶或刻度吸管:1ml 2.7牛乳吸管:11ml 3.试剂 3.1硫酸:比重为1.820-1.825 3.2异戊醇:沸点128-132?，比重0.8090-0.8115 4.操作步骤 用硫酸自动吸瓶或刻度吸管向牛乳乳脂计中加入硫酸10ml，颈口勿沾湿硫酸，用11ml吸管吸取牛乳样品至刻度，缓慢加入到同一乳脂计内(注意不能与硫酸液面混合)，再加入异戊醇1ml，加入蒸馏水调节液面(使脂肪柱适合乳脂计刻度部分)，塞紧橡皮塞，充分摇动，使牛乳凝块溶解、无黑色颗粒。 将乳脂计放入65-70?的水浴中保温5min，然后置离心机中以1000转/分的转速旋转5min，再放入65-70?的水浴中保温5min，取出立即读数，读数时要将乳脂肪柱下弯月面放在与视线同一水平面上，以弯月面下限为准。所得数值即为脂肪的百分数。 注:(1)如所用离心机有保温功能，可省去水浴保温的步骤。 (2)摇动时用布包住，乳脂计瓶口向外，不要对着自己或他人，以免乳脂计破裂或塞子冲开，受到伤害。 14 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第14页 共31页 益生源乳业有限公司 (3)必要时，对异戊醇试剂进行空白检查。 方法:以10ml蒸馏水代替11ml样品，其余步骤同样品测定。 7、 蛋白质的测定 具体操作步骤见GB/T5009.5-2003 方法一:半微量凯氏定氮法 1.原理 消化:样品中的含氮有机物经浓硫酸加热消化，硫酸使有机物脱水，然后，有机物炭化生成C;C将硫酸还原为SO，本身生成CO;SO使N还原为NH，本身则氧化为2223SO，而消化过程中生成的H，又加速了NH的形成。在反应过程中，生成物水和SO333逸出，而NH则与硫酸结合成硫酸铵，留在溶液中。 3 蒸馏:硫酸铵在碱性条件下，释放出氨。 吸收和滴定:蒸馏过程中放出的氨用硼酸溶液吸收后，用硫酸标准溶液滴定，根据硫酸标准溶液消耗量计算出总氮量，进而算出蛋白质的含量。 注: 1.1硼酸溶液之所以被作为吸收液，是因为它仅呈极微弱的酸性，在滴定中不影响所加指示剂的变色反应，但具有吸收氨的作用。 1.2在消化过程中，为了加速分解过程，缩短消化时间，常加入下面三类物质: (1)、提高沸点物质硫酸钾:在消化过程中，随着硫酸的不断分解，水分的不断蒸发，硫酸钾的浓度逐渐增大，则硫酸的沸点升高(338?)，加速了对有机物的分解作用。10g硫酸钾将沸点提高到400?，但硫酸钾用量不易过大，因温度过高，生成的硫酸氢铵在513?会分解，放出氨，使氮损失。 (2)、催化剂硫酸铜:硫酸铜与炭化后的碳及浓硫酸的反应都产生二氧化硫，使有机氮的还原过程加快。在有机物全部消化后，溶液具有清澈的蓝绿色。消化后的液体的颜色，使硫酸铜除了有催化作用外，并可在下一步蒸馏时做碱性反应的指示剂。 3)、氧化剂过氧化氢:添加氧化剂可帮助有机物消化，过氧化氢的使用操作又很( 简便。但在使用时要特别注意，需待消化液冷却后再加入。 2.其他要求 2.1硫酸标准滴定溶液:配制与标定见GB/T601-2002 2.2须定期作回收率试验，回收率应大于99,。 2.3样品的称取:在定量滤纸上直接称取固体样品2g，将样品和滤纸一起小心移入 15 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第15页 共31页 益生源乳业有限公司 凯氏烧瓶的底部;液体样品用减量法准确称取12-15g于凯氏烧瓶中，倾倒样品时要使用同烧杯一起称重的小玻璃棒进行引流操作，尽量使样品不挂在凯氏烧瓶的颈口部。 2.4分析结果 + (V-V)×c(H)×0.014×6.38 0 W = ×100 m×25/100 式中:W,样品中蛋白质的质量分数，% V,滴定时消耗硫酸标准溶液的体积，ml V,空白试验消耗硫酸标准溶液的体积，ml 0 ++ c(H),硫酸标准溶液中H的浓度，mol/L m,样品质量，g 0.014,氮原子的摩尔质量，kg/mol 6.38,氮换算为乳蛋白质的系数 3. 注意事项 3.1 所用试剂溶液应用无氨蒸馏水配制。 3.2 样品中脂肪或糖含量较高时，消化过程中易产生大量的泡沫，必要进可加入液 体石蜡或硅油消泡剂，并同时注意控制热源强度。 3.3有机物完全分解，消化液呈兰色或浅绿色，但含铁量多时，呈较深绿色。 3.4蒸馏装置不能漏气。 3.5蒸馏前若加碱量不足，消化液呈兰色，不生成氢氧化铜沉淀。此时需要再增加氢氧化钠的用量。 3.6硼酸吸收液的温度不能超过40?，否则对氨的吸收作用减弱而造成损失。 3.7混合指示剂临用时混合，它在碱性溶液中呈绿色，中性溶液中呈灰色，酸性溶液中呈红色。因用硫酸滴定硼酸铵溶液，生成硫酸铵应为强酸弱碱盐，所以溶液呈酸性，指示剂应显红色。 3.8蛋白测定中，在催化剂中加入二氧化钛，消化速度将会更快。能使难以氨化的组分快速氨化。蒸馏时可加入锌粒，其作用相当于沸石，用量如绿豆大即可。 3.9若蒸馏瓶较小，可将所加消化液和氢氧化钠溶液由25ml减为10ml，相应将公式中的“25”换为“10”。 16 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第16页 共31页 益生源乳业有限公司 3.10蒸馏时要注意蒸馏情况，避免瓶中的液体发泡冲出，进入接收瓶。火力太弱，蒸馏瓶内压力减低，则接收瓶内液体会倒吸，造成实验失败。 方法二:凯氏定氮仪法(多个联组消化法) 1. 仪器 1.1凯氏定氮仪 1.2电子天平:精度为0.1mg 2. 试剂: 2.1 100g/l氢氧化钠溶液 (其它同半微量凯氏定氮法) 2.2硫酸铵:干燥后最低含量99.9%，使用前直接将硫酸铵在102?2?干燥至少2h，在干燥器中冷却至室温。 3. 测定步骤 3.1样品的称取:在消化管中分别加入0.5gCuSO、5gKSO(或厂家提供消化药片)，424 用减量法准确称取样品(原奶、纯牛奶系列、发酵酸牛乳系列3-5g，优酸乳系列约10g、甜味奶等中性乳饮料约7g、学生花色奶约5g)于消化管中，倾倒样品时尽量使样品不挂在消化管的颈口部。 3.2消化:参考设备说明书 在加好样品的消化管中加入15 ml浓硫酸混合，放入消化器，按设备说明书操作加热。 消化时须注意观察产生泡沫情况，调节温度(开始时宜低温消化，控制泡沫、黑烟少量)。 当消化管中没有黑烟或黑烟很少时，稍升高温度，继续消化。 当消化管中溶液呈透明的蓝绿色时，继续消化60-90分钟(在此过程中消化液必须沸腾)，停止加热。 3.3蒸馏:参考设备说明书 3.4滴定:参考设备说明书 4.空白试验 按照上述的步骤进行空白试验，(可以在消化管中加入0.85g蔗糖，加入蔗糖的作用是使空白在消化过程中与样品消耗等量的硫酸)。 5.回收试验 5.1方法的准确性应定期通过下面的回收试验进行检查，按照样品检测的步骤进行。 17 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第17页 共31页 益生源乳业有限公司 5.2用0.12g硫酸铵加0.85g蔗糖进行测定。回收率应大于99,。 5.3在以上的回收试验中，低结果将说明过程失败和(或)硫酸标准溶液的浓度不准确。应检查凯氏定氮仪或重新标定硫酸标准溶液。 6.结果表述 6.1氮含量的计算 + 0.014(V-V)×c (H) 0 氮含量(,), ×100 m 其中: V ——测定中消耗硫酸标准溶液的体积，ml。 V——空白试验中消耗硫酸标准溶液的体积，ml。 0 ++c (H) ——硫酸标准溶液中的摩尔浓度，mol/L。 m——样品质量，g。 四舍五入的结果保留到0.001%。 6.2蛋白质含量的计算 蛋白含量的计算，用质量百分数表达，用氮含量乘以6.38即可。 6.3 回收率的计算 用氮含量除以硫酸铵的理论氮含量21.19,即可。 7.允许差 同一样品的两次测定值之差不得超过平均值的1.5,。 8、注意事项 8.1消化前检查抽洗机的碱液是否需要更换，管路、滤网是否堵塞。 8.2消化时 消化后消化液呈大量的结晶体可能是消化过程中酸损失的结果，它能导致检测结果偏低。为了减少酸的损失，可降低烟吸出的速度。 8.3蒸馏前必须先打开冷凝水。 8.4蒸馏前检查蒸馏水、氢氧化钠、硼酸溶液是否够用。 8.5使用电位滴定仪滴定，之前须校准电极，且每天使用完毕后必须将电极浸泡在蒸馏水中。 8.6生产厂如果无电位滴定仪，可以采用滴定管进行滴定。 18 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第18页 共31页 益生源乳业有限公司 方法三:仪器法 1.仪器: 120型(或50型)全组份分析仪(需进行校准)、50ml烧杯 2(方法:取约40ml、30-40?混匀、过滤的样品倒入烧杯中，将烧杯放在全组份分析仪的吸样管下，选择相应经过校准的检测程序，按检测键开始检测，待电脑显示屏出现检测结果时，读数即可。 方法四:甲醛滴定法 1.原理 +++以NaOH溶液滴定-NH基上的H，每释放一个H，就相当有一个氨基氮。反应如下: 3 ++R-NH=H+RNH; R-NH+2CHCHO?R-N(CHOH) 32222 2.仪器设备 2.1电位滴定仪或酸度计 2.2移液管:50ml 2.3碱式滴定管:0-10刻度，精确到0.05ml 2.4吸管:2ml、10ml 3试剂 3.1 37,中性甲醛:用0.1mol/l NaOH溶液滴定至PH8.4。 3.2中性饱合草酸钾: 将草酸钾用热水(60-80?)溶解，直至饱合为止，用0.1mol/l HCL滴定至PH8.4。 3.3 0.1mol/l NaOH标准滴定溶液 :配制与标定见GB/T601-2002。 4方法 4.1用移液管移取50ml样品于烧杯内;加蒸馏水至100ml。 4.2加入2ml中性饱和草酸钾溶液，搅匀，静置2分钟，用0.1mol/lNaOH标准滴定溶液滴定至PH8.4。 4.3加入10ml中性甲醛，搅匀，静置2分钟，用0.1mol/lNaOH标准滴定溶液滴定至PH8.4;并记录消耗的0.1mol/lNaOH标准滴定溶液的毫升数V。 2 4.4用50ml蒸馏水重复上述操作进行空白测试。 5计算: (V-V)×1.7×M×100 21 19 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第19页 共31页 益生源乳业有限公司 蛋白质(,) = 50 V-空白测试消耗的氢氧化钠标准溶液毫升数，ml 1 V-样品测试消耗的氢氧化钠标准溶液毫升数，ml 2 M-氢氧化钠标准滴定溶液浓度，mol/l 注意事项: a.饱和草酸钾及甲醛溶液每次使用前都应调节PH值至8.4。该实验需在通风橱中进行。 生产厂如果无电位滴定仪，可以采用酸度计指示滴定终点。 b. c.原料奶需预热至20?。 8、非脂乳固体的测定 具体操作步骤见GB/T5009.46-2003 方法一:计算法 用基准法测得样品全脂乳固体、脂肪、蔗糖(加糖乳饮料系列)的含量后，依据公式进行计算。 非脂乳固体=全脂乳固体-脂肪(纯牛奶系列) 非脂乳固体=总固形物-脂肪-蔗糖(花色奶系列) 方法二:仪器法 1.仪器: 120型(或50型)全组份分析仪(需经过校准)、50ml烧杯 2(方法 取约40ml、30-40?经过滤、混匀的牛乳样品于烧杯中，将烧杯放在全组份分析仪的吸样管下，选择相应经过校准的检测程序，按检测键，待电脑显示屏出现检测结果时，即可读数。 9、乳糖、水分、灰分 密度、冰点、蛋白质、脂肪、非脂乳固体 由乳成分分析仪测定,此外,原料奶的脂肪、蛋白质、非脂乳固体、冰点、密度都可以直接测出来，具体操作见《乳成分分析仪的使用说明》。 10、抗生素残留检验 方法一:仪器法(Snap、Charm、Rosa或戴尔沃等快速检测仪) 参考设备操作手册或说明书进行操作、判定。 方法二:TTC法(GB/T4789.27-2003) 20 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第20页 共31页 益生源乳业有限公司 12.1设备和材料 00水浴锅:(79?1)C，(36?1)C 0恒温培养箱:(36?1)C 记号笔， 试管架 灭菌吸管:10ml、1ml， 灭菌试管 0电子天平:精度至0.01g， 冰箱:4,-20C 12.2菌种、培养基和试剂 12.2.1菌种:嗜热乳酸链球菌(严格按照产品说明书贮存条件贮存) 12.2.2灭菌脱脂乳制备: 称取10g无抗脱脂乳粉于90ml蒸馏水中，充分溶解后， 0经113C灭菌20min。 C1.2.340g/L 2，3，5,氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液:称取1.000gTTC，溶于5ml 0灭菌蒸馏水中，装褐色瓶内于7C冰箱保存，临用时用灭菌蒸馏水稀释至5倍。如遇溶液变为玉色或淡褐色，则不能再用。 12.3检验程序 检样 80?，加热5min 0冷却37C以下 0加菌液，36?1C水浴2h 0加TTC指示剂，36?1C水浴30 min (不显色) 红色 0 36?1C水浴30 min 抗生素阴性 21 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第21页 共31页 益生源乳业有限公司 不显色 红色 报告 抗生素阳性 抗生素阴性 12.4菌液制备 12.4.1接种操作应在无菌条件下进行。 12.4.2如果是干粉菌种应在无菌条件下按包装说明称取一定量的干粉菌种溶于一定 0量的灭菌的脱脂乳中，(36?1)C培养15h;临用前用灭菌脱脂乳1:1稀释。 12.5操作步骤 00用灭菌吸管取检样9ml，置灭菌试管内，80C水浴加热5min，冷却37C以下， 00无菌操作加菌液1ml，36?1C水浴培养2h，加TTC指示剂 0.3ml，36?1C水浴培养30min，观察如为阳性，再于水浴中培养30min作第二次观察，每份检样作二份，另外再作阳性和阴性对照各一份，阳性对照管用无抗生素的复原乳8ml和抗生素1ml(其浓度要超过以下列出的最低检出量)，阴性对照管用无抗生素的复原乳9ml，其余步骤同样品的操作。 2.6判断方法 1 准确培养30min观察结果，如为阳性，再继续培养30min作第二次观察。观察时要迅速，避免光照过久发生干扰。乳中有抗生素存在，则检样中虽加入菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂TTC不还原，不显色。与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即增殖，TTC被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色时为阳性，呈红色时为阴性。具体内容见表1和表2。 表1显色状态判定标准 显色状态 判断 未显色者 阳性 微红色者 可疑 桃红色--红色者 阴性 表2 检测各种抗生素的灵敏度 22 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第22页 共31页 益生源乳业有限公司 抗生素名称 最低检出量 青霉素 0.004单位 链霉素 0.5单位 庆大霉素 0.4单位 卡那霉素 5单位 备注:复原乳的制备:称取9g脱脂乳粉溶于100ml蒸馏水中，摇匀。 注意事项: 1.TTC试剂难以溶解，可在35?以下水浴轻微加热。 02.菌种:嗜热乳酸链球菌(严格按照产品说明书要求条件贮存，如果是0C以下，则必须放于冰箱中冷冻保存)。 3.40g/L 2，3，5,氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液:应当天配制，当天使用，可直接配制稀释液，即称取1gTTC，溶于25 ml灭菌蒸馏水中。褐色瓶应使用细口试剂瓶，盛放溶液前，需用75%的酒精溶液润洗，然后再用无菌水润洗。 4.其余操作步骤如果不在超净台内操作，必须在酒精灯旁操作。 5.干粉菌种应在无菌条件下按说明称取一定量，溶于一定量的灭菌的脱脂乳中，(36 0?1)C培养15h;(保存时间不能超过48小时)临用前与未加菌种的灭菌脱脂乳混匀，即配成1:1稀释液(稀释液当天用当天配)。 6.抗生素成品检样应常温保存，保存时间与对应产品所需的出保温时间一致，如利乐砖产品常温放置7天、软包装产品常温放置3天后及时检验。 7.如果平行样2个单样的结果不一致，从严判定，并及时查找、分析出现偏差的原因，以避免再次发生。 8.作阳性对照，加抗生素时，需注意将抗生素在灭菌试管内配成少许溶液，吸取1ml后加入阳性对照管中。 09.阳性对照管中加入1ml抗生素后，同检样一起80 C水浴加热5min。 10.观察结果时要迅速，避免光照过久发生干扰(避免阳光直射 )。 11、六六六、滴滴涕的检验 具体操作步骤见GB/T5009.19 12、三聚氰胺的检测 具体操作步骤见GB/T22400-2008 23 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第23页 共31页 益生源乳业有限公司 (四)生鲜牛乳微生物指标检验方法指导 1、菌落总数的测定 方法一:平板法 具体操作步骤见4789.2-2008 方法二:仪器法 1.1仪器、设备 BactoScan FC型微生物检测仪、微生物采样小瓶 .2方法(具体见FC微生物快速检测仪操作规程 ) 1 取牛乳放于吸管下，设定检测样品为NORMAL，并输入样品数据，按“STORE”键，再按MEASURE键进行测定，待屏幕出现检测结果时，即可读数。 2、美蓝试验 2.1原理 美兰还原试验是用来判断原料乳新鲜程度的一种色素还原试验。新鲜乳加入亚甲基兰后染为蓝色。如污染大量微生物产生还原酶使颜色逐渐变浅，直至无色，通过测定颜色变化时间，间接推断出鲜奶的卫生质量。 2.2试剂 亚甲基蓝水溶液:0.01g/300ml .3仪器 2 试管:20mm×200mm 水浴锅:可恒温到38? 2.4步骤 2.4.1 吸取10ml牛奶于灭菌试管中，在水浴中加热到38?，再加入亚甲基蓝溶液1ml，混匀。 2.4.2 将试管放入水浴中，每30min观察一次褪色情况，并记录每个样品褪色时间。 2.5结果评估 通常，通过溶液的褪色时间可以估算出牛奶中细菌总数。 2.6影响因素 2.6.1细菌的活性:由于原奶在实验前冷藏时间的延长，传统的适温菌(产酸)，逐渐转换为嗜冷菌(分解蛋白质和脂肪)，脱色时间和细菌总数之间的相关性变弱。 24 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第24页 共31页 益生源乳业有限公司 2.6.2溶液的褪色时间与染色液的浓度有关。 2.6.3此方法对体细胞(白细胞)及其他细胞的还原作用也敏感，因此还可检验异常乳(乳房炎乳、初乳或末乳)。 2.7褪色时间相当每ml牛乳中的细菌总数 7 20min ,2×10 7720-40min 1.0×10-2.0×10 6740min-1小时 5.0×10-1.0×10 66 1小时-2小时 4.0×10-5.0×10 662小时-3小时 3.0×10-4.0×10 663小时-4小时 2.0×10-3.0×10 664小时-5小时 1.0×10-2.0×10 565小时-5.5小时 5.0×10-1.0×10 555.5小时-6.5小时 3.0×10-5.0×10 556.5小时-7.5小时 1.0×10-3.0×10 5,7.5小时 ,1.0×10 注:此方法较适用于原料奶的验收检验，所以一般时间控制在40分钟之内观察为宜。 3(大肠杆菌的检验 具体操作步骤见4789.38-2008 (四)掺杂异物的检验方法 1、掺水的检验 可用乳成分分析仪快速检测出来。正常的新鲜牛乳检测的含水率为0，如果掺水，含水率大于0. 2、掺盐的检验 2.1原理 鲜奶中氯化物与硝酸银反应，生成氯化银沉淀，用铬酸钾指示剂，当牛奶中的氯化物与硝酸银作用后，过量的硝酸银与铬酸钾生成砖红色的AgCO沉淀。 2r4 2.2试剂配制 2.2.1 9.6g/L硝酸银溶液:取分析纯硝酸银置于105?烘箱内烘30min，取出放在干燥器内冷却后，称取9.6g溶于1000ml蒸馏水中。 25 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第25页 共31页 益生源乳业有限公司 2.2.2 100g/l铬酸钾溶液:称取分析纯铬酸钾10g溶于100ml蒸馏水中。 注:硝酸银溶液应储存于棕色试剂瓶备用。 2.3仪器 2.3.1 吸管:2 ml 2.3.2 试管: 18 ×180 mm , 2.4实验方法 取2ml牛乳于试管中，加入100g/l铬酸钾溶液5滴，摇匀，再加入9.6g/L硝酸银溶液1.5ml，摇匀后，立即观察结果。 注:在加入硝酸银后，应立即观察颜色，做出判定;否则，判定结果会偏高。 2.5结果判定 正常色: 掺盐乳:呈黄色，且随着掺入量的增多，颜色由土黄色向鲜黄色变化 ( (a量盐) (b量盐) (c量盐) 注:最低检测限为0.05% 2.6注意事项 2.6.1试剂加入顺序不同影响测定结果，先加入硝酸银其结果偏高10—20mg%，因此 应按“牛奶+指示剂+硝酸银”或“指示剂+牛奶+硝酸银”的顺序进行。 2.6.2 日常试验应尽量在20ºC左右的室温下进行，仲裁试验必须在20ºC条件下进行。 3.碱性物质的检出 方法一:玫瑰红酸法(仲裁法) 1.1.原理 26 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第26页 共31页 益生源乳业有限公司 鲜奶中如掺碱，可使指示剂变色，根据颜色的不同，粗略判断加碱量的多少。 1.2.试剂 玫瑰红酸(0.05%乙醇溶液):称取0.05g玫瑰红酸溶于100ml 95%的乙醇中。 1.3.方法 于盛有2ml牛乳的试管中加入2ml玫瑰红酸溶液，摇匀，观察颜色变化。 1.4.结果判定 正常色:如图(1)(2)(3)(4); (1) (2) (1) (3) (4) 异常色:如下图 (a量) (b量) (c量) 注明:(1)牛奶酸度及新鲜度影响最终颜色的判定，酸度越高、新鲜度越差最终颜 色越黄 。 (2)最低检测限:弱碱为0.02% 强碱为0.006% 方法二:溴麝香草酚兰法 1.1原理 鲜乳中如掺碱物质，可使指示剂变色，由颜色的不同，大略判断加碱量的多少。 1.2仪器 试管，, 18×180mm 试管架 吸管，2ml 1.3试剂配制 取0.04克溴百里香草酚兰(溴麝香草酚兰)溶于100ml95%分析纯乙醇中。 27 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第27页 共31页 益生源乳业有限公司 1.4方法 取乳样约2ml于小试管中，沿管壁慢慢加入指示剂约0.5ml，将试管轻轻斜转2-3圈，然后垂直放置2分钟后，观察指示剂与样品接触面颜色特征以判定检验结果。同时用不含碱的正常生鲜牛乳作空白对照。 1.5结果判定 正常奶:黄色 掺碱奶:0.03%黄绿色 0.05%淡绿色 0.1%绿色 0.3%深绿色 0.5%青绿色 0.7%淡青色 1.0%青色 1.5%深青色 1.6注意事项 掺水乳(因水的PH大都在7—9之间)、掺洗衣粉乳(因洗衣粉中加有碳酸钠)、乳房炎乳(因为细菌分解乳酪蛋白产生氨及乳房代谢功能的改变而造成PH值升高)与掺碱指示剂的接触面均可呈黄绿至淡绿色。 4. 硝酸盐、亚硝酸盐(定性检测方法)的检验 方法一:固体试剂法 1. 原理 鲜奶中的亚硝酸盐与显色试剂作用，形成红色的化合物;鲜奶中的硝酸盐被还原成亚硝酸盐后，再与显色试剂形成红色化合物。 2. 试剂 哈尔滨龙泽科技有限公司的鲜奶亚硝酸盐和硝酸盐试剂。(使用之前要对该试剂验证，确保药品的有效性) 3. 操作方法 取鲜奶亚硝酸盐或硝酸盐试剂(按试剂说明添加)到试管中，加入被检奶样，振荡混合均匀，必要时加热溶解，5分钟内观察结果。 4. 结果判定: 正常乳:呈无色 掺亚硝酸盐或硝酸盐乳:呈粉红色，且由掺入量的增加，颜色逐渐加深。 (a量) 28 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第28页 共31页 益生源乳业有限公司 (b量) -6注:最低检测限:硝酸盐为2*10 -8亚硝酸盐为:10 5. 注意事项 5.1.1 药品瓶必须用颜色较深的纸包好避光保存。 5.1.2 药品置于干燥的环境中保存，最好放在干燥器中。 5.1.3 已打开包装的药品要密封好后于干燥器中避光保存，如果发现有结块现象应 立即停止使用。 5.1.4 硝酸盐检测时，所加硝盐试剂要足量(约0.3克)，要使试剂和样品充分混匀 后，应在5分钟内观察结果。 方法二:液体试剂法(仲裁法) 1.试剂配制 1.1显色剂:称取对,氨基苯磺酸0.6g,甲,萘胺0.2g，甲,萘酚0.1g,溶于400ml 50%的醋酸溶液中，置棕色试剂瓶中保存。 1.2还原剂:硫酸钡44.0g, 硫酸锰5.0g, 锌粉1.0g, 混合在一起，干燥研磨成细粉末，密闭保存。 2.检验方法:吸取2.0ml牛乳于试管中，加入还原剂约0.1g混匀(亚硝酸盐检测不加还原剂)，加显色剂0.5,1.0 (ml)摇匀， 5分钟内观察结果。 3. 结果判定: 掺假乳:微粉,水粉,粉红,红色 (根据颜色的深浅判断硝酸盐和亚硝酸盐含量的大小) 正常乳:无色 4. 注意事项:还原剂配制时，一定要研磨均匀，否则会严重影响硝酸盐检测。 5.硝酸盐、亚硝酸盐试剂验证方法(如下) 硝酸盐、亚硝酸盐定性检测试剂验证方法 一、目的 通过验证实验，检查硝酸盐、亚硝酸盐定性检测试剂的有效性及灵敏度，以 29 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第29页 共31页 益生源乳业有限公司 保证使用合格试剂，准确检测出硝酸盐、亚硝酸盐含量超标或临界的原奶及成品。 二、原理 原料奶中的亚硝酸盐与显色剂作用，形成红色的化合物;原料奶中的硝酸盐 被还原成亚硝酸盐后，再与显色剂形成红色化合物，且由掺入量的增加，顔色逐 渐加深。制备相当含量的硝酸盐、亚硝酸盐参比样品，通过对该样品进行检测， 判断硝酸盐、亚硝酸盐试剂有效性及灵敏度。 三、试剂 1. 哈尔滨龙泽科技有限公司的鲜奶亚硝酸盐试剂(固体亚硝酸盐检测试剂)。 2. 哈尔滨龙泽科技有限公司的鲜奶硝酸盐试剂(固体硝酸盐检测试剂)。 3. 按《乳与乳制品检验方法》原奶掺假中硝酸盐、亚硝酸盐检测方法配制的液体试 剂。 4. 制备参比亚硝酸盐样品的亚硝酸钠储备液A2 准确称取0.2000g，亚硝酸钠用不含亚硝酸根的水定容至1000ml，为溶液A1;移取10ml溶液A1定容至1000ml，为溶液A2，此溶液相当于每ml中含有0.002mg亚硝酸钠。 5. 制备参比硝酸盐样品的硝酸钾储备液B1 准确称取硝酸钾0.1310g，用不含硝酸根的水定容至1000ml，为溶液B1，此溶液每ml中含有0.131mg硝酸钾即相当于含有0.11mg硝酸钠。 四、步骤 1.参比样品制备 1. 1亚硝酸盐参比样品 分别移取10ml、15 ml、20 ml储备液A2于100ml容量瓶中，用定量检测亚硝酸盐为未检出的原料奶样品定容，配制成相当于亚硝酸钠含量为0.2、0.3、0.4mg/L的参比样品。 1.2硝酸盐参比样品 分别移取10 ml、15ml、20 ml储备液B1于100ml容量瓶中，用定量检测硝酸盐为未检出的原料奶样品定容，配制成相当于硝酸钠含量为11、16.5、22mg/l的参比样品。 2. 验证 30 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第30页 共31页 益生源乳业有限公司 2(1按《生鲜牛乳检验方法》中亚硝酸、硝酸盐定性检测方法，测定制备的亚硝酸盐、硝酸盐参比样品。 2(2试剂抽样量:按所购进试剂2/10开瓶抽验(如试剂稳定，可减少抽验量，但不得低于1/10)。 2(3验证同时做3平行样，2个按试剂标注加试剂及奶量(0.3 g试剂+3ml奶)、1个用0. 1g试剂+1ml奶，水浴加热熔解，5分钟内观察结果，显粉色则判定不合格;液体试剂按方法要求2个平行样即可。 五、结果判定 1(硝酸盐参比样品配制及试剂判定 移取储备液B1量(用奶定样品理论含硝酸检测结果 容100ml),ml 钠的量，mg/L 10 11.0 阳性 阴性 阴性 15 16.5(标准参比阳性 阳性 阴性 样) 20 22.0 阳性 阳性 阳性 试剂判定 不合格 合格 不合格 注:此标准参比样的确定，是参照前期理论加入量与定量检测结果对比情况。 2(亚硝酸盐参比样品配制及试剂判定 样品理论含亚硝酸移取储备液A2检测结果 钠的量，mg/L 量,ml 0.2(标准参比样) 10 阳性 阴性 阴性 0.3 15 阳性 阳性 阴性 0.4 20 阳性 阳性 阳性 试剂判定 不合格 合格 不合格 31 实施日期2009年11月01日 修订次:00 第31页 共31页