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中草药抗氧化文献综述.doc

中草药抗氧化文献综述

我的爱流离失
2019-05-04 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《中草药抗氧化文献综述doc》,可适用于医药卫生领域

文献综述报告(   届本科)学院:专业:班级:姓名:      学号:指导教师:年 月植物抗氧化活性研究摘要天然的抗氧化活性物质能够清除自由基保障人体的健康而植物更是天然抗氧化剂的天然丰富来源植物中富含有的黄酮多酚生物碱多糖皂苷等等都是非常好的天然抗氧化活性成分。具有良好的清除自由基和抗菌活性能力植物抗氧化活性物质以其低廉的价格高效低毒的优点越来越被广泛的研究和利用通常植物抗氧化活性的测定是通过利用福林酚法ABTS法还原力测定法DPPH法铁离子螯合FRAR还原力测定等方法来研究。关键字ABTSDPPH黄酮多酚生物碱植物抗氧化成分研究黄酮类许多黄酮类化合物能较显示出明显的抗氧化活性如、黄芩甙、水飞蓟素银杏黄酮三羟基查尔酮、槲皮素等。、山楂、菠菜、紫山西黑苦荞麸皮葡萄皮、茄子皮甘薯叶和等提取物中都能分离的黄酮类物质并且其都有较强的清除自由基能力。黄酮类物质羟基位置上的羟基化程度是衡量黄酮抗氧化活性的一个重要方面还原力最强的黄酮其B环上有邻二酚羟基。最新的研究还发现了如果黄酮一个环上有邻二羟基与邻一个环上有对二羟基那么就会产生很强的还原力。如果A环上面的,位增加羟基那么黄酮的抗氧化能力就会提高。没食子酸绿原酸咖啡酸都是植物中通常含有的黄酮类物质并且其都属于苯丙烷类化合物。都有苯环C碳骨架。其上面的羟基和羟基的数目会直接影响抗氧化的效果因为羟基作为供氢体能消除多种活性氧。由于黄酮类具有多样性和每种黄酮中具有抗氧化活性的有效酚羟基的种类和含量不同因此每种黄酮的抗氧化活性也会有所差异各不相同。多糖类所谓的多糖类是植物中含量较多而且普遍的一类由个以上的单糖通过糖苷键连接起来的聚糖。从植物中提取得到的多糖具有抗衰老抗氧化等功效。其原因是因为多糖一方面在体内扮演着免疫调节剂的作用从而提高机体的免疫能力另外一方面多糖能够清楚自由基达到抗氧化的目的。多糖在体内可以抑制脂质过氧化和蛋白氧化防止过氧化歧化酶和含硫基蛋白的失活。研究表明五味子多糖灵芝多糖螺旋藻多糖褐藻多糖以及猕猴桃多糖都是具有相当强的抗氧化活性。例如灵芝硒多糖可以提高血液中硒的含量并且可以有效能降低脂质过氧化产物的含量清除掉多余的过氧化氢清除自由基保护细胞膜不受损害抑制体内过氧化物的产生使细胞敏感分子不受到损害因此能有效提高机体器官的机能。现在我国对于多糖的研究停留在其分离纯化生物活性化学组成的方面而没有对其进行构效关系的研究。所以多糖类天然抗氧化成分将会是一个相当热门并且前景广阔的研究。多酚类物质多酚类物质其结构式中苯环与羟基连接与苯环连接的羟基上的氢不稳定通常是非常好的氢或电子的供体。由于所形成酚类游离基中间体不容易被分子氧进攻。所以要发生新的游离基或链式反应而被氧化的情况是不可能的。因此这几点证明了多酚类物质是非常好的抗氧化活性物质。一般而言酚类物质是植物中产生的一类次级代谢物。水果中的酚类要比蔬菜中多。酚类物质在植物中也有很大的结构上和分子量上的差别。。Velioglu等人研究了种植物的多酚量得出结论是总酚量与植物的抗氧化性表现出显著关系。但也有人认为植物的抗氧化活性与总酚量并非有关系。理由是因为Bocco等人对柑橘及其种子提取物进行含酚量的测定与抗氧化活性的研究后。认为两者无明显的联系。造成这样的争论原因是因为植物中具有抗氧化活性的酚类其结构和含量有所不一样。并且有些植物的抗氧化活性成分还有少许非酚类物质。Hagerman等人证明了多元酚的抗氧化活性能力是单酚的到倍。生物碱类研究表明双子叶的植物中分布有较广的生物碱类。生物艰难扮演的角色是活性氧的猝灭剂。能够影响其抗氧化活性的主要是由于电位因素和立体结构的因素。氮原子在杂环中充分裸露能够与活性氧更好的接触并且反应其抗氧化效果就越好。一些提供给氮原子电子的基团越多其抗氧化性也越好。抗氧化活性研究的方法DPPH法.实验原理DPPH清除率的检测是一种快速简单高效的实验室抗氧化检测方法在天然植物提取物体外抗氧化测定中应用广泛。其原理是用到二笨代苦味酰基(有毒)DPPH它是种在有机溶剂中比较稳定的氮自由基其分子结构有三个苯环一个氮上有孤对电子在纳米处有最强吸收峰。若有抗氧化物质存在时DPPH上的孤对电子被配对从而使其颜色发生变化成为浅红紫色用分光光度计分析DPPH含量的变化。利用DPPH配对的电子数与颜色深浅有直接的联系因此可用于实验室样品的抗氧化活性检测。实验过程A DPPH标准液配制称取DPPHmg,甲醇定容到ml,配成浓度为mgml的标准液。放置在冰箱中保存。B 标准曲线绘制分别取,,,,,ml标准溶液用甲醇定容到ml最终浓度分别为,,,,ugml分别取上诉标准液并且在纳米处测吸光度的值绘制标准曲线。C 样品曲线的绘制以甲醇为溶剂配制不同浓度的样品溶液取ml的样液并且加入毫升的质量浓度为mgmlDPPH标准液以甲醇代替样液做空白试验混合液摇匀在纳米处测吸光值。D VC参照曲线的绘制 配制不同浓度的VC溶液取ml的样液并且加入毫升的质量浓度为mgmlDPPH标准液以甲醇代替样液做空白试验混合液摇匀在纳米处测吸光值。试验结果分析根据标准曲线可以换成DPPH的质量浓度从而计算出DPPH的残留率。根据残留率和相应的样品添加量可以绘制出DPPH的清除曲线。清除率()=-(Ai-Aj)Ac×其中Ac表示甲醇代替样液的吸光度值Ai表示样品的吸光度值Aj表示甲醇代替DPPH的吸光度值。福林酚法实验原理:多酚类物质是植物抗氧化的主要成分之一忍冬藤中就含有丰富的多酚类物质其能与福林试剂在碳酸钠溶液下生成蓝色多酚类物质含量越高其在纳米处的吸光度越高抗氧化活性越强。通过标准没食子酸标准曲线的绘制从而确定样品的含酚量实验过程:A 福林试剂配制称取钨酸钠g,和磷酸mL,磷钼酸g 溶于mL蒸馏水,煮沸加热回流两小时,冷却,稀释至mL,并且置于黑暗处避光保存。B 标准曲线的绘制:称取g没食子酸定容至ml,配成浓度为mgl的标准液精密移取,,,ml没食子酸标准液于个比色管中(避光)定容至ml,加ml水ml福林试剂ml碳酸钠。度分钟在纳米处测吸光度绘制标准曲线。C 样品的的测定取ml的不同浓度浓度样品于比色管中加ml水ml福林试剂ml碳酸钠度分钟后纳米处测定吸光度绘制其吸光度曲线结果分析根据样品的吸光度与标准浓度没食子酸吸光度的比较得出样品的多酚含量结果用每ml样品含有没食子酸的当量表示总酚量也可用总酚量=G*w其中G表示样品根据吸光度得出的酚的总量mg W表示样品的干重。ABTS法..实验原理ABTS法用于测定样品的抗氧化能力ABTS即,联氮双(乙基苯基)并噻唑啉磺酸它是种水溶性自由基显色剂ABTS被活性氧化后可以生成蓝色阳离子自由基ABTS若在其中加入被测抗氧化活性样品则样品能使ABTS发生反应使其褪色然后可以通过分光光度计在纳米处检测。颜色越浅则说明样品的抗氧化能力越强。通过用VE作标准曲线来换算出被测样品抗氧化能力大小。ABTS缓冲液的配制是实验的关键实验所需的ABTS需新鲜配制通过乙醇来调节ABTS的吸光度。实验方法A ASTS标准液的配制配制nmoll的ABTSml,nmoll的过硫酸钾ml两者溶液混合加入乙醇缓冲液在分光光度计上调节吸光度在B 标准曲线取,g的水溶性维E定容至ml,配成浓度为umoll,配制浓度为,,,,,umoll取ml以上浓度的液体加入ABTS工作液定容至毫升纳米处测吸光度值并且绘制标准曲线。C 样品吸光度曲线绘制:配制不同浓度的样品溶液各取毫升加入ABTS工作液定容至毫升在纳米处测样品的吸光度值绘制曲线结果分析样品抗氧化能力的大小用水溶性维生素E的量来表示根据曲线也可以得到样品的抗氧化能力是标准水溶性VE的多少倍。ABTS法本质上是一种间接方法,是用来检测物质清除ABTS·这种自由基的能力,与真实的氧化分解没有关系,它只是用VE值来表征测试样品与经氧化得到的ABTS·反应的能力。铁离子螯合能力测定实验原理抗氧化剂通常可以作为活性氧的淬灭剂或金属离子螯合剂自由基受体等方式来阻止自由基链式反应还可以用来消除脂质过氧化等其他物质的氧化对生物体的伤害。因此测定金属离子如亚铁离子螯合能力的大小也是评价氧化剂抗氧化性能常用的方法。螫合Fe能力与抗氧化活性关系非常密切价铁能与菲洛嗪“结合形成复合物。在波长纳米处具有强的吸收。如果抗氧化样品具有螯合二价Fe“作用则形成的紫色复合物就会减少吸光度就会减少因此反应物的吸光度较低表明抗氧化样品的螯合铁离子的能力较强。实验过程A 药液的配制取g菲洛嗪定容到ml。gFecl,定容到ml,称取mgEDTA定容到毫升。B EDTA对照曲线的绘制取不同浓度的EDTA溶液ml,加入ml的水ml的菲洛嗪和ml的氯化亚铁混合均匀在纳米处测定吸光度值用蒸馏水代替样液做空白实验。C 样品的测定:取ml的样品加入ml的水ml菲洛嗪ml氯化亚铁。混合均匀纳米处测定吸光值。蒸馏水代替样做吸光度值实验分析实验结果用螯合率来表示样品抗氧化程度的大小螯合率=(A)A* A表示空白实验的吸光度A表示样品的吸光度。参照EDTA的螯合率来评价样品螯合率的大小从而得出样品抗氧化能力的大小。还原力测定方法实验原理:本实验主要利用抗氧化样品的还原作用能使铁氰化钾还原为亚铁氰化钾后亚铁氰化钾能与三价铁离子反应生成普鲁斯蓝在纳米处有最强吸收峰测定其其吸光度值吸光度越高则样品的还原能力越强用VC来做参照曲线来衡量样品忍冬藤的抗氧化能力大小。实验方法A PBS缓冲液的配制配磷酸氢二钠溶液moll和磷酸二氢钠moll溶液ml,混合后在PH计上调节ph至现配现用。B 标准曲线绘制:配制浓度为,,,,ugml的标准VC溶液取该溶液ml加入mlPBS标准液加入ml铁氰化钾加热分钟然后迅速冷却加入ml的TCA溶液转离心十分钟取上清液毫升加入蒸馏水毫升加入ml的三氯化铁充分反映分钟纳米处侧吸光值绘制标准曲线。C 样品的吸光度曲线绘制测分别定取ml不同浓度样品提取物取该溶液ml加入mlPBS标准液加入ml铁氰化钾加热分钟然后迅速冷却加入ml的TCA溶液转离心十分钟取上清液毫升加入蒸馏水毫升加入ml的三氯化铁充分反映分钟纳米处侧吸光值 结果处理根据样品的吸光度值可以在标准的VC曲线上找到对应的vc浓度结果用每克样品中含有的vc的量来确定其抗氧化活性的大小。FRAP法测定(铁离子还原抗氧化能力法)实验原理抗氧化活性成分在酸性的条件下能还原FeTPTZ变成FeTPTZ。并且呈现出明显的蓝色在纳米处有最大吸收峰。在FeTPTZ过量的情况下检测蓝色物质的生成量的多少即吸光度A值的大小能够反映样品的还原能力。吸光值值越高样品还原能力越强。实验方法A FRAP工作液的配制:配制mollPH的乙酸钠缓冲液ml,配制mmoll的TPTZ溶液毫升(用mmoll的盐酸来定容)和mmoll的三氯化亚铁毫升用时根据三者的体积比为::的比例来配制FRAP工作液B 硫酸亚铁标准曲线的绘制:配制浓度为,,,mmoll的硫酸亚铁溶液ml各取ml以上浓度的硫酸亚铁溶液加入ml的mollPH的乙酸钠缓冲液ml,加入mmoll的TPTZ溶液ml。充分反映在纳米处侧吸光值。绘制出标准曲线。C 样品吸光度曲线取ml的样液加入ml的FRAP工作液。在度反映分钟后在纳米处测定吸光值。 结果分析根据样品的吸光度值可以在标准硫酸亚铁曲线上找到硫酸亚铁的浓度。即样品最终的总抗氧化能力以硫酸亚铁的当量浓度表示,单位为mmolL其定义为FRAP值。值越大抗氧化能力越强。总结植物抗氧化活性物质来源很广泛并且活性程度高提取的效率也很高安全有效是一种宝贵的资源。抗氧化的研究关系到人类身体的健康能帮助人体清除有害的自由基。从而延缓衰老。保护机体器官。而植物更是一种良好的抗氧化物来源通常植物抗氧化成分结构比较复杂但是将归类分别是多糖类多酚类黄酮类生物碱类维生素类。还有一些少量的其他类。种类繁多。各种成分抗氧化效果也是不一样通过对其进行的抗氧化活性研究通过以上方法来比较植物与植物之间抗氧化活性的差异从而选出高效而且价廉的抗氧化活性物质。以上的实验方法均是通过对比某一参照物的方法来确定抗氧化活性的大小如VC,VE等等不仅直观而且每种实验方法的操作也是比较的简单。但是也有局限性如福林酚法只能对总酚量检测。但是不能检测其他非酚量的抗氧化物质。所以只是衡量抗氧化活性的一个方面。相对而言DPPH和还原力测定则很直观的能体现出样品的抗氧活性能力。以上列出的方法只是抗氧化活性研究方法的一部分还有很多如ORAC法实验室操作起来比较困难也不容易理解。还原力测定法能有效的将植物成分中个物质的抗氧化能力转变为相当的VC的量从而简单快速的就能把握植物样品的抗氧化效果。FRAP和ABTS的原理差不多都是结果用VE的当量来表示。所以抗氧化研究的方法虽各有不同。但是有些原理和思路都是相同的。参考文献彭长连陈少薇林植芳等.用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力J.生物化学与生物物理进展():.张桂芝,耿莎,杨海燕,等植物抗氧化成分的研究进展J食品科学,,():刘清,李俊清,廖蓉苏普鲁士兰法测定胡杨中植物多酚含量林业科技开发,,():~赵艳红,李建科,李国秀天然抗氧化物体外活性评价的优选与优化J食品科学,,():张强,宫璐婵,孟凡荣,等双孢菇多糖抗氧化活性的研究J中国林副特产,,(): DeBeerDJoubertEGelderblomWCeta.J.Agrie.FoodChem.():. 吴剑峰主编天然药物化学M北京:人民卫生出版社,:丁利君,周圳辉,林燕如芒萁中黄酮物质的提取及其抗氧化研究J食品科学,,():徐清萍敖宗华陶文沂.恒顺香醋DPPH·自由基清除活性成分的研究.中国调味品():王天元.紫苏子皮提取物中抗氧化性成分及作用研究J.林产化学与工业():

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