中草药抗氧化文献综述

文献综述报告 （  2012    届本科） 学 院： 专 业： 班 级： 姓 名：            学 号： 指导教师： 2012年 5  月 植物抗氧化活性研究 摘要 天然的抗氧化活性物质能够清除自由基保障人体的健康，而植物更是天然抗氧化剂的天然丰富来源，植物中富含有的黄酮，多酚，生物碱，多糖，皂苷等等，都是非常好的天然抗氧化活性成分。具有良好的清除自由基和抗菌活性能力，植物抗氧化活性物质以其低廉的价格，高效，低毒的优点，越来越被广泛的研究和利用，通常植物抗氧化活性的测定是通过利用福林酚法，ABTS法，还原力测定法，DPPH法，铁离子螯合，FRAR，还原力测定等方法来研究。 关键字 ABTS； DPPH ；黄酮 ；多酚； 生物碱 1植物抗氧化成分研究 1.1 黄酮类 许多黄酮类化合物能较显示出明显的抗氧化活性，如、黄芩甙、水飞蓟素，银杏黄酮，三羟基查尔酮、槲皮素等。、山楂、菠菜、紫山西黑苦荞麸皮，葡萄皮，、茄子皮，甘薯叶和等提取物中都能分离的黄酮类物质，并且其都有较强的清除自由基能力。 黄酮类物质羟基位置上的羟基化程度是衡量黄酮抗氧化活性的一个重要方面，还原力最强的黄酮其B环上有邻二酚羟基。最新的研究还发现了，如果黄酮一个环上有邻二羟基与邻一个环上有对二羟基，那么就会产生很强的还原力。如果A环上面的5,7位增加羟基，那么黄酮的抗氧化能力就会提高。没食子酸，绿原酸，咖啡酸都是植物中通常含有的黄酮类物质，并且其都属于苯丙烷类化合物。都有苯环C-3碳骨架。其上面的羟基和羟基的数目会直接影响抗氧化的效果，因为羟基作为供氢体，能消除多种活性氧。由于黄酮类具有多样性和每种黄酮中具有抗氧化活性的有效酚羟基的种类和含量不同，因此每种黄酮的抗氧化活性也会有所差异，各不相同。 1.2 多糖类 所谓的多糖类是植物中含量较多，而且普遍的一类由10个以上的单糖通过糖苷键连接起来的聚糖。从植物中提取得到的多糖具有抗衰老，抗氧化等功效。其原因是因为多糖一方面在体内扮演着免疫调节剂的作用从而提高机体的免疫能力，另外一方面多糖能够清楚自由基达到抗氧化的目的。多糖在体内可以抑制脂质过氧化和蛋白氧化，防止过氧化歧化酶和含硫基蛋白的失活。研究表明五味子多糖，灵芝多糖，螺旋藻多糖，褐藻多糖，以及猕猴桃多糖都是具有相当强的抗氧化活性。 例如灵芝硒多糖可以提高血液中硒的含量，并且可以有效能降低脂质过氧化产物的含量，清除掉多余的过氧化氢，清除自由基，保护细胞膜不受损害，抑制体内过氧化物的产生，使细胞敏感分子不受到损害，因此能有效提高机体器官的机能。现在我国对于多糖的研究停留在其分离纯化，生物活性，化学组成的方面，而没有对其进行构效关系的研究。所以多糖类天然抗氧化成分将会是一个相当热门，并且前景广阔的研究。 1.3 多酚类物质 多酚类物质其结构式中苯环与羟基连接，与苯环连接的羟基上的氢不稳定，通常是非常好的氢或电子的供体。由于所形成酚类游离基中间体不容易被分子氧进攻。所以要发生新的游离基或链式反应而被氧化的情况是不可能的。因此这几点证明了多酚类物质是非常好的抗氧化活性物质。 一般而言，酚类物质是植物中产生的一类次级代谢物。水果中的酚类要比蔬菜中多。酚类物质在植物中也有很大的结构上和分子量上的差别。。Velioglu等人研究了28种植物的多酚量，得出结论是总酚量与植物的抗氧化性表现出显著关系。但也有人认为植物的抗氧化活性与总酚量并非有关系。理由是因为Bocco等人对柑橘及其种子提取物进行含酚量的测定与抗氧化活性的研究后。认为两者无明显的联系。造成这样的争论原因是因为植物中具有抗氧化活性的酚类其结构和含量有所不一样。并且有些植物的抗氧化活性成分还有少许非酚类物质。Hagerman 等人证明了多元酚的抗氧化活性能力是单酚的15到20倍。 1.4 生物碱类 研究表明双子叶的植物中分布有较广的生物碱类。生物艰难扮演的角色是活性氧的猝灭剂。能够影响其抗氧化活性的主要是由于电位因素和立体结构的因素。氮原子在杂环中充分裸露能够与活性氧更好的接触，并且反应，其抗氧化效果就越好。一些提供给氮原子电子的基团越多，其抗氧化性也越好。 2 抗氧化活性研究的方法 2.1 DPPH法 2.1．1 实验原理 DPPH清除率的检测是一种快速，简单，高效的实验室抗氧化检测方法，在天然植物提取物体外抗氧化测定中应用广泛。其原理是用到二笨代苦味酰基（有毒），DPPH. 它是种在有机溶剂中比较稳定的氮自由基，其分子结构有三个苯环，一个氮上有孤对电子，在517纳米处有最强吸收峰。若有抗氧化物质存在时，DPPH上的孤对电子被配对从而使其颜色发生变化，成为浅红紫色，用分光光度计 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 DPPH含量的变化。利用DPPH配对的电子数与颜色深浅有直接的联系，因此可用于实验室样品的抗氧化活性检测。 2.1.2 实验过程 A  DPPH 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 液配制 称取DPPH2.5mg,甲醇定容到100ml,配成浓度为0.025mg/ml的标准液。放置在冰箱中保存。 B  标准曲线绘制 分别取0,2,4,6,8,10ml标准溶液，用甲醇定容到10ml最终浓度分别为0,5,10,15,25ug/ml分别取上诉标准液，并且在515纳米处测吸光度的值，绘制标准曲线。 C  样品曲线的绘制 以甲醇为溶剂，配制不同浓度的样品溶液，取0.1ml的样液，并且加入3.9毫升的质量浓度为25mg/mlDPPH标准液，以甲醇代替样液做空白试验，混合液摇匀，在515纳米处测吸光值。 D  VC参照曲线的绘制  配制不同浓度的VC溶液，取0.1ml的样液，并且加入3.9毫升的质量浓度为25mg/mlDPPH标准液，以甲醇代替样液做空白试验，混合液摇匀，在515纳米处测吸光值。 2.1.3 试验结果分析 根据标准曲线可以换成DPPH的质量浓度，从而计算出DPPH的残留率。根据残留率和相应的样品添加量，可以绘制出DPPH的清除曲线。清除率(%)=[1－(Ai－Aj)/Ac]×100 %，其中Ac表示甲醇代替样液的吸光度值，Ai表示样品的吸光度值，Aj表示甲醇代替DPPH的吸光度值。 2.2 福林酚法 2.2.1 实验原理： 多酚类物质是植物抗氧化的主要成分之一，忍冬藤中就含有丰富的多酚类物质，其能与福林试剂，在碳酸钠溶液下生成蓝色，多酚类物质含量越高，其在770纳米处的吸光度越高，抗氧化活性越强。通过标准没食子酸标准曲线的绘制，从而确定样品的含酚量 2.2.2 实验过程： A  福林试剂配制 称取钨酸钠40g, 和85%磷酸20mL,磷钼酸8g  溶于200mL蒸馏水, 煮沸加热回流两小时, 冷却, 稀释至300mL,并且置于黑暗处避光保存。 B  标准曲线的绘制：称取0.025g没食子酸，定容至500ml,配成浓度为100mg/l的标准液，精密移取0，0.5，1,1.5,2,2.5ml没食子酸标准液于6个比色管中（避光）定容至25ml,加5ml水，2ml福林试剂，4ml碳酸钠。30度90分钟，在770纳米处测吸光度，绘制标准曲线。 C  样品的的测定，取1ml的不同浓度浓度样品于比色管中，加5ml水，2ml福林试剂，4ml 10%碳酸钠，30度90分钟后，770纳米处测定吸光度，绘制其吸光度曲线 2.2.3 结果分析 根据样品的吸光度与标准浓度没食子酸吸光度的比较，得出样品的多酚含量，结果用每ml样品含有没食子酸的当量表示 总酚量也可用 总酚量=G*100/w 其中G表示样品根据吸光度得出的酚的总量mg  W表示样品的干重。 2.3 ABTS法 2．3．1 实验原理 ABTS法用于测定样品的抗氧化能力，ABTS即2,2—联氮—双—（3—乙基苯基）并噻唑啉—6磺酸，它是种水溶性自由基显色剂，ABTS被活性氧化后可以生成蓝色阳离子自由基ABTS+.若在其中加入被测抗氧化活性样品，则样品能使ABTS发生反应，使其褪色，然后可以通过分光光度计在734纳米处检测。颜色越浅，则说明样品的抗氧化能力越强。通过用VE作标准曲线来换算出被测样品抗氧化能力大小。ABTS缓冲液的配制是实验的关键，实验所需的ABTS需新鲜配制，通过乙醇来调节ABTS的吸光度。 2.3.2 实验方法 A  ASTS标准液的配制，配制7nmol/l的ABTS 10ml,2.45nmol/l的过硫酸钾10ml，两者溶液混合，加入乙醇缓冲液，在分光光度计上调节吸光度在0.70 B  标准曲线，取0,0038g的水溶性维E定容至100ml,配成浓度为150umol/l,配制浓度为0,30,60,90,120,150umol/l，取2.5ml以上浓度的液体，加入ABTS工作液定容至25毫升，734纳米处测吸光度值，并且绘制标准曲线。 C  样品吸光度曲线绘制：配制不同浓度的样品溶液，各取2.5毫升，加入ABTS工作液定容至25毫升，在734纳米处测样品的吸光度值，绘制曲线 2.3.3 结果分析 样品抗氧化能力的大小用水溶性维生素E的量来表示，根据曲线也可以得到样品的抗氧化能力是标准水溶性VE的多少倍。ABTS 法本质上是一种间接方法,是用来检测物质清除ABTS·+ 这种自由基的能力,与真实的氧化分解没有关系,它只是用VE值来表征测试样品与经氧化得到的ABTS·+ 反应的能力。 2.4 铁离子螯合能力测定 2.4.1 实验原理 抗氧化剂通常可以作为活性氧的淬灭剂，或金属离子螯合剂，自由基受体等方式来阻止自由基链式反应，还可以用来消除脂质过氧化等其他物质的氧化对生物体的伤害。因此测定金属离子如亚铁离子螯合能力的大小也是评价氧化剂抗氧化性能常用的方法。，螫合Fe2+能力与抗氧化活性关系非常密切，2价铁能与菲洛嗪“结合形成复合物。在波长562 纳米处具有强的吸收。如果抗氧化样品具有螯合二价Fe“作用，则形成的紫色复合物就会减少，吸光度就会减少，因此反应物的吸光度较低，表明抗氧化样品的螯合铁离子的能力较强。 2.4.2实验过程 A  药液的配制，取0.0247g菲洛嗪，定容到25ml。0.035g Fecl2,定容到10ml,称取4.2mgEDTA定容到25毫升。 B  EDTA对照曲线的绘制，取不同浓度的EDTA溶液1ml,加入6.7ml的水，0.2ml的菲洛嗪和0.1ml的氯化亚铁，混合均匀在562纳米处测定吸光度值，用蒸馏水代替样液做空白实验。 C  样品的测定：取1ml的样品，加入6.7ml的水，0.2ml菲洛嗪，0.1ml氯化亚铁。混合均匀562纳米处测定吸光值。蒸馏水代替样做吸光度值 2.4.3 实验分析; 实验结果用螯合率来表示样品抗氧化程度的大小，螯合率=(1-A1)/A0*100%  A0表示空白实验的吸光度，A1表示样品的吸光度。参照EDTA的螯合率来评价样品螯合率的大小，从而得出样品抗氧化能力的大小。 2.5 还原力测定方法 2.5.1 实验原理： 本实验主要利用抗氧化样品的还原作用能使铁氰化钾还原为亚铁氰化钾后，亚铁氰化钾能与三价铁离子反应生成普鲁斯蓝，在700纳米处有最强吸收峰，测定其其吸光度值，吸光度越高，则样品的还原能力越强，用VC来做参照曲线，来衡量样品忍冬藤的抗氧化能力大小。 2.5.2 实验方法 A  PBS缓冲液的配制，配磷酸氢二钠溶液0.2mol/l和磷酸二氢钠0.2mol/l溶液100ml,混合后在PH计上调节ph至6.6 现配现用。 B  标准曲线绘制：配制浓度为20,40,60,80,100ug/ml的标准VC溶液，取该溶液1ml加入2.5mlPBS标准液，加入2.5ml1%铁氰化钾，50加热20分钟，然后迅速冷却，加入2.5ml的10%TCA溶液，3000转离心十分钟，取上清液2.5毫升，加入蒸馏水2.5毫升，加入0.5ml0.1%的三氯化铁，充分反映10分钟，700纳米处侧吸光值，绘制标准曲线。 C  样品的吸光度曲线绘制测 分别定取1ml不同浓度样品提取物，取该溶液1ml加入2.5mlPBS标准液，加入2.5ml1%铁氰化钾，50加热20分钟，然后迅速冷却，加入2.5ml的10%TCA溶液，3000转离心十分钟，取上清液2.5毫升，加入蒸馏水2.5毫升，加入0.5ml0.1%的三氯化铁，充分反映10分钟，700纳米处侧吸光值 2.5.3  结果处理 根据样品的吸光度值可以在标准的VC曲线上找到对应的vc浓度，结果用每克样品中含有的vc的量来确定其抗氧化活性的大小。 2.6 FRAP法测定（铁离子还原抗氧化能力法) 2.6.1 实验原理 抗氧化活性成分在酸性的条件下能还原 Fe3+—TPTZ变成Fe2+—TPTZ。并且呈现出明显的蓝色，在593纳米处有最大吸收峰。在Fe3+—TPTZ过量的情况下，检测蓝色物质的生成量的多少，即吸光度A值的大小，能够反映样品的还原能力。吸光值值越高，样品还原能力越强。 2.6.2 实验方法 A  FRAP工作液的配制：配制0.3mol/lPH3.6的乙酸钠缓冲液100ml,配制10mmol/l的TPTZ溶液10毫升（用40mmol/l的盐酸来定容）和20mmol/l的三氯化亚铁10毫升，用时根据三者的体积比为10:1:1的比例来配制FRAP工作液 B  硫酸亚铁标准曲线的绘制：配制浓度为0.，0.4,0.8，1.2,1.6,2.0mmol/l的硫酸亚铁溶液10ml .各取1ml以上浓度的硫酸亚铁溶液，加入10ml的0.3mol/lPH3.6的乙酸钠缓冲液10ml,加入10mmol/l的TPTZ溶液1ml 。充分反映，在593纳米处侧吸光值。绘制出标准曲线。 C  样品吸光度曲线;取1ml的样液，加入10ml的FRAP工作液。在37度反映10分钟后，在593纳米处测定吸光值。 2.6.3  结果分析 根据样品的吸光度值，可以在标准硫酸亚铁曲线上找到硫酸亚铁的浓度。即样品最终的总抗氧化能力以硫酸亚铁的当量浓度表示,单位为mmol/L.其定义为FRAP值。值越大，抗氧化能力越强。 总结 初级经济法重点总结下载党员个人总结TXt高中句型全总结.doc高中句型全总结.doc理论力学知识点总结pdf 植物抗氧化活性物质来源很广泛，并且活性程度高，提取的效率也很高，安全有效，是一种宝贵的资源。抗氧化的研究关系到人类身体的健康，能帮助人体清除有害的自由基。从而延缓衰老。保护机体器官。而植物更是一种良好的抗氧化物来源，通常植物抗氧化成分结构比较复杂，但是将归类分别是多糖类，多酚类，黄酮类，生物碱类，维生素类。还有一些少量的其他类。种类繁多。各种成分抗氧化效果也是不一样 通过对其进行的抗氧化活性研究，通过以上方法来比较植物与植物之间抗氧化活性的差异，从而选出高效，而且价廉的抗氧化活性物质。以上的实验方法均是通过对比某一参照物的方法来确定抗氧化活性的大小，如VC,VE等等，不仅直观，而且每种实验方法的操作也是比较的简单。但是也有局限性，如福林酚法只能对总酚量检测。但是不能检测其他非酚量的抗氧化物质。所以只是衡量抗氧化活性的一个方面。相对而言DPPH和还原力测定则很直观的能体现出样品的抗氧活性能力。以上列出的方法只是抗氧化活性研究方法的一部分，还有很多如ORAC法实验室操作起来比较困难，也不容易理解。还原力测定法能有效的将植物成分中个物质的抗氧化能力转变为相当的VC的量，从而简单快速的就能把握植物样品的抗氧化效果。FRAP和ABTS的原理差不多，都是结果用VE的当量来表示。所以抗氧化研究的方法虽各有不同。但是有些原理和思路都是相同的。 参考文献 [1] 彭长连，陈少薇，林植芳，等．用清除有机自由基DPPH法评价植物抗氧化能力_J]．生物化学与生物物理进展，2010，35(1)：209-212． [2]张桂芝,耿莎,杨海燕,等.植物抗氧化成分的研究进展[J].食品科学,2007,28(12):551-553. [3] 刘清, 李俊清, 廖蓉苏. 普鲁士兰法测定胡杨中植物多酚含量. 林业科技开发, 2007, 21 ( 2) : 42~ 44. [4]赵艳红, 李建科, 李国秀. 天然抗氧化物体外活性评价的优选与优化[ J] . 食品科学, 2008, 29( 6): 64- 69 [5] ?? 张强, 宫璐婵, 孟凡荣, 等. 双孢菇多糖抗氧化活性的研究[ J] . 中国林副特产, 2010, 104( 6) : 16—19. [6]  De Beer D，Joubert E，Gelderblom W C，et a1．J．Agrie．Food Chem．，2003，51(4)：902． [7] 　吴剑峰主编. 天然药物化学[M ] . 北京: 人民卫生出版社, 2006: 226 [8] 丁利君, 周圳辉, 林燕如. 芒萁中黄酮物质的提取及其抗氧化研究[J]. 食品科学, 2005, (8): 77-81 [9] 徐清萍，敖宗华，陶文沂．恒顺香醋DPPH·自由基清除活性成分的研究 ．中国调味品，2004(7)：19—2 [10] 王天元．紫苏子皮提取物中抗氧化性成分及作用研究 [J]．林产化学与工业，2002，22(1)：63—6