DNA限制性内切酶——酶切Buffer组分及其活性
TaKaRa公司,为了方便限制酶的统一使用,采用了通用缓冲液 (Universal Buffer) 测定限制酶活性的体系 (5种通用缓冲液中,
用
标注的),以此时的活性值作为100%。并把在其它通用缓冲液中的相对活性表示如下表。有 ( ) 标记的是易受Star活性影
响的缓冲液,为了避免Star活性的影响,希望尽量使用
或
标注的缓冲液。每种限制酶都有其自身的基本缓冲液 (Basal
Buffer),其中AccⅢ、BalⅠ、BcnⅠ、BglⅠ、Bpu1102Ⅰ、Cfr10Ⅰ、Eam1105Ⅰ、Eco52Ⅰ、NruⅠ、PshBⅠ、SnaBⅠ、SspⅠ、TaqⅠ、VpaK11B Ⅰ(共14种)由于没有十分合适的通用缓冲液,只能使用基本缓冲液(Basal Buffer)。各种限制酶的基本缓冲液组成不同,相互之间不能通用。各种限制酶在基本缓冲液中的相对活性也被列于下表,供参考。
限制酶在各种缓冲液中的相对活性
附带·活性测定用Buffer
推荐使用的Buffer
*1+0.01%BSA→100%:AflII,Aor13H I,EcoO65 I,FokI,Hin1 I,MunI,NcoI,PvuI,Sse8387 I,XbaI*2+0.01%BSA+0.01%Triton X-100→100%:NotI*3不加BSA
按Universal Buffer分类的限制酶
各Universal Buffer的组成
■ 使用注意事项
10×Buffer都为10倍浓度的缓冲液。此外,10×T溶液中不含BSA, 在使用时将BSA添加进去,使最终浓度为0.01%,有些限制酶(带有*1或*2标记)的反应体系中需加BSA或Triton X-100,添附的溶液是10倍浓度 (0.1%) 的液体,使用时,请在反应体系中添加1/10量进行反应。
■ 保存
-20℃
反应停止液组份表
(10 × Loading Buffer)
1%
SDS
60%
Glycerol
0.05%
Bromophenol Blue
■ 使用方法
本公司的酶包装中全部附带有反应停止液。使用时请添加反应液量的1/10,即可停止反应,进行电泳。-20℃保存时,会出现SDS沉淀,请于温水浴中溶解后使用。在室温下保存时,SDS有时也会出现沉淀,此时同样请于温水浴中将其溶解后使用。
■ 保存
开封后室温保存。
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