鸵鸟大肠埃希氏菌的分离鉴定

鸵鸟大肠埃希氏菌的分离鉴定 26HeilongjiangJournalofAnimalScienceandVeterinaryMedicine黑龙江畜牧兽医2002年第11期 鸵鸟大肠埃希氏茵的分离鉴定 许信刚,张琪,邢福珊,张耀相,黄超 (西北农林科技大学动物科技学院,陕西杨陵712100) 中图分类号:$858.293文献标识码:B文章编号:1004—7034(2002)11—0026—02 关键词:驼鸟;大肠埃希氏茵;分离鉴定 摘要:从某驼鸟养殖场发病的幼驼鸟肝脏和脾脏分离到一种细茵,通过培养特性,茵体形态,茵落形态,染色特性,生化 试验等一系列的系统鉴定,确定为大肠埃希氏茵.动物致病性试验 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明该茵对小白鼠和雏鸡有较强的致病性,药敏试验 证明该茵对常见的抗生素不敏感,经血清型鉴定该茵血清型为01. 大肠埃希氏菌简称大肠杆菌,1885年被发现,在相当长的脂平板,麦康凯琼脂平板,三糖铁琼脂斜面,普通肉汤等培养基 一 段时间内,一直被当作正常肠道菌群的组成部分,认为是非中,37?培养观察其生长表现. 致病菌,直到20世纪中叶,才认识到一些特殊血清型的大肠杆1,6,4 生化试验用分离菌纯培养物进行糖发酵试验,靛基 菌对人和动物有病原性,尤其对婴儿和幼畜禽,常引起严重腹质试验,M—R,V—P试验,柠檬盐利用试验,硫化氢产生,接 泻和败血症.随着大型集约化养禽业的发展,病原性大肠杆菌触酶试验,氧化酶试验,硝酸盐还原试验等. 对畜牧业所造成的损失日益明显[“.禽类在感染大肠杆菌后1,6.5药敏试验按文献[4]介绍的纸片扩散法操作和判定. 急性者体温升高,常因腹泻而突然死亡.慢性者呈剧烈腹泻,1.6.6动物致病性试验小白鼠感染试验:将纯化后的细菌 有时见全眼球炎.成年鸡感染后多表现为关节滑膜炎,输卵管接种于普通肉汤,37?培养24h,腹腔注射小白鼠4只,每只0. 炎和腹膜炎[.我们从陕西省某驼鸟养殖场分离到一种细菌,2mI:对照组2只小白鼠腹腔注射灭菌普通肉汤0,2mE/只. 通过对其生物学特征,生化试验,致病性等进行一系列的研究,对注射后的小白鼠隔离饲养,观察其发病及死亡情况,对死亡 确定为大肠埃希氏菌,现将结果 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 如下.的立即解剖,无菌采取肝脏,脾脏病料,涂片,革兰氏染色,镜 1材料与方法检.并在鲜血琼脂平板上划线分离培养. 1,1痛料来源本属动物回归试验:15只20日龄雏鸡随即分为2组.第 采自陕西省某驼鸟养殖场病死驼鸟的肺脏,肝脏和脾脏组1组10只,腹腔注射0.2ml/R24h肉汤培养物;第2组5 织. 1,2主要培养基 鲜血琼脂,普通琼脂,半固体糖发酵培养基,普通肉汤,M — R,V—P,靛基质,硝酸盐还原试验用培养基按廖延雄【3J介绍 的方法制备.麦康凯琼脂由卫生部上海生物制品研究所生产. 1.3所用试剂 M—R,V—P,能基质,接触酶,氧化酶,硝酸盐还原试验用 试剂,革兰氏染色液,美兰染色液按文献[4]介绍的方法制备; 药敏纸片(上海卫生技术服务公司生物试剂所). 1.4实验动物 小白鼠(西北农林科技大学实验动物中心),20日龄雏鸡 (西北农林科技大学畜牧站). 1.5血清 大肠杆菌标准抗0血清由中国兽药监察所制备,本实验 室保存. 1.6细茵的分离与鉴定 1.6.1细菌的分离无菌采取病料于鲜血琼脂平板上划线分 离,37?有氧条件培养24h,可疑菌落接种于普通肉汤,再划 线于鲜血琼脂平板上,挑取单个菌落经涂片,染色,镜检,证实 为纯培养物,将其接种于鲜血琼脂斜面上进行培养,得到纯培 养物. 1.6.2形态结构,染色特性与运动性检查按文献[2]介绍的 方法进行. 1.6.3培养特性试验分离菌接种于普通琼脂平板,鲜血琼 收稿日期:2002—09—09 作者简介:许信刚(1974一),男,陕西武功人,讲师,在职博士 生,主要从事兽医微生物学和免疫学研究. 只,为空白对照组,腹腔注射0.2ml只灭菌普通肉汤,观察其 发病及死亡情况. 1,6,7血清型鉴定0抗原的制备按文献[4]介绍的方法操 作及判定. 2结果 2.1细茵分离结果 从病死驼鸟肝脏和脾脏组织均分离到一株革兰氏阴性没 有溶血现象的纯细菌培养物. 2.2形态结构及染色性 分离菌呈中等大小的杆菌,两端略圆,多呈单个存在,也有 成双或聚集成团,分离菌革兰氏染色为革兰氏阴性,美兰染色 无两极着色现象. 2,3培养特性 分离菌为兼性厌氧菌,有运动性;在普通琼脂平板上37? 培养24h后,形成圆形,表面光滑湿润,边缘整齐,灰白色半透 明的中等大小的菌落;在鲜血琼脂平板上无溶血现象;在麦康 凯琼脂平板上形成圆形,表面光滑,湿润,边缘整齐的红色小菌 落.该菌在二糖铁琼脂斜面上培养后,使其斜面,底部均变黄, 且有气泡产生;在营养肉汤中生长呈均匀混浊,管底有絮状沉 淀,振摇则里絮状分散,液面有菌环.培养物涂片,经革兰氏染 色镜检可见革兰氏阴性,中等大小的杆菌,两端略圆,多单个存 在. 2.4生化特性该菌株能发酵葡萄糖,乳糖,麦牙糖,蔗糖,鼠 李糖,果糖,阿拉伯糖,甘露醇,木糖,纤维二糖产酸产气,不发 酵棉子糖,山梨醇,靛基质试验阳性,M—R阳性,V—P阴性, 不利用拧橡酸盐,不产生硫化氢,接触酶试验阳性,尿素酶试验 阴性,苯丙氨酸脱羧酶试验阴性,氧化酶试验阴性,产生黄色 素,对KCN无抵抗力. 犬瘟热病综合诊断一于辉 HeilongjiangJournalofAnimal ScienceandVeterinaryMedicine27 2.5药敏试验结果 药敏试验证明该菌对氟哌酸,丁胺卡那,妥布霉素,氯霉素 高度敏感;复合磺胺,呋喃妥因,万古霉素中度敏感;卡那霉素, 四环素,庆大霉索,羧苄青霉素,青霉素,头孢呋新,卡那霉素, 头孢唑啉,链霉素等不敏感. 2.6动物致病性结果 2.6.1分离菌对小白鼠致病性小白鼠于感染后12h开始 死亡,至24h全部死亡.死后解剖,可见肠道有出血现象,并 从死亡小白鼠的心,肝,脾等内脏器官均能分离到感染菌.对 照组小白鼠未见异常. 2.6.2分离菌对本属动物回归试验雏鸡腹腔感染后12h 全部开始发病,表现为腹泻症状;至24h时8只死亡.剩余2 只精神沉郁,48h后耐过恢复正常.对死亡的立即剖检,发现 肠道出血,尤其十二指肠出血严重,肠系膜淋巴结肿大.腹腔有 黄色渗出物.并从死亡小鸡的心,肝,脾等内脏器官均能分离 到感染菌.空白对照组未见异常. 2.7血清型鉴定结果 该菌的血清型为01. 3讨论 3.1分离茵通过培养特性,菌体形态,菌落形态,染色特性,生 化试验等一系列的系统鉴定,确定该菌为驼鸟大肠埃希氏菌. 大肠埃希氏菌可感染包括驼鸟在内的各种年龄的家禽.但幼驼 鸟感染性很高,可引起不同程度的死亡.有关资料报道大 肠杆菌病是驼鸟的一种主要疾病,大肠杆菌在新兴的养驼业中 是一个普遍存在的病原.我们在动物感染试验中发现,所分离 的大肠埃希氏菌肉汤培养物腹腔感染小白鼠均能在l2,24h 内致小白鼠死亡.本属动物回归试验也能使20日龄雏鸡腹腔 感染发病死亡,出现与自然病例相似的临床症状和病理变化. 这说明分离菌属于病原性大肠杆菌. 3.2大肠杆菌容易对抗生索产生耐受性,给临床选用抗生索 带来较大的困难,因此应引起驼鸟养殖业的高度重视.所以药 敏试验选择敏感药物是临床用药防治大肠杆菌的最佳选择.另 外改善饲养环境,加强饲养管理,做到以防为主.以治为辅. 3.3大肠埃希氏菌的血清型较多,在驼鸟上已经分离鉴定出 的大肠杆菌有0l,02,()5,06,()8,09,035,055,078,而国内以 Ol,02,O78,035血清型为常见【5J.本试验分离的大肠杆菌血清 型为0l. 参考文献: [1]袭孝良,陶茂辉.驼鸟大肠杆菌病的诊治及致病性大肠杆菌Olol 的分离鉴定[J].中国兽药杂志,1997,23(8):30—33. [2]蔡宝祥.家畜传染病[M].北京:中国农业出版社,1998.54—55. [3]廖延雄.兽医微生物实验诊断手册[M].北京:中国农业大学出版 社,1995.81一ll4. 【4]曹澎泽.郭玉瑛.兽医微生物学及免疫学技术[M].北京:北京农 业大学出版社,1992.1—53. [5]张常印.芮兵.从病死驼鸟中分离鉴定出035血清型大肠杆菌【J3. 动植物检疫.1999.2(29):23—25. [6]崔保安.卢中华.驼鸟大肠杆菌病的诊断与防治[J].黑龙江畜牧 兽医.2001,4:38.(003) 犬瘟热病综合诊断 于辉 (佛山科技学院农牧学院动科系,广东南海528231) 中图分类号:$858.292文献标识码:B文章编号:1004—7034(2002)1l 一0027—02 犬瘟热是由副黏病毒科麻疹病毒属犬瘟热病毒(Canine distempervirus,CDV)引起的犬科,鼬科,浣熊科等多种动物的 一 种急性,热性,高度接触性传染病.该病在临床上以双相热 性,卡他性鼻炎及随后引起的支气管炎,卡他性肺炎,严重的胃 肠炎和神经症状为主要特征,少数病犬可见下腹部脓性皮疹及 足垫角化过度.发病率几乎达100%,死亡率30%,80%不 等,素有”毁灭性传染病”之称….由于本病经常引起混合感染 及继发感染,给经济动物养殖业造成巨大的经济损失.要减少 犬瘟热病造成的经济损失,尽早采取防治措施,因此对该病的 诊断尤为重要. 1临床诊断 临床诊断主要通过本病的流行特点,临床特征及类症病的 鉴别. 1.1流行特点 在自然条件下可感染多种犬科野生食肉兽,如小熊猫,貉, 貂,黄鼠狼,以及豺,狼,獾等.本病一年四季都可发生,冬春季 多发.6月龄以内的幼犬特别易感染,症状典型,死亡率极高. 世界各地都有流行. 1.2临床症状, 体温呈双相热型.病初以呼吸道炎症为主,表现为流涕, 打喷嚏,咳嗽,常为干咳,严重时鼻镜龟裂,呼出恶臭气体,流脓 收稿日期:2002—09一O4 作者简介:于辉(1971,),男,黑龙江呼兰人,在读硕士. 性鼻液,堵塞鼻孔,张口呼吸呈腹式.肺部听诊,支气管音粗 厉.闻干性罗音或湿性罗音或捻发音.可视黏膜发绀,眼睑周 围有散性出血点.眼睑干燥,呈脓性眼结膜炎,角膜溃疡.甚至 穿孔.若以消化道炎症为主时,主要表现为食欲不振或废绝, 呕吐,腹泻,排出带有黏液的稀便,有时带有血液.在后期出现 非化脓性脑炎并导致神经症状.流涎,空嚼,有时全身肌肉振 颤.转圈,共济失调.口吐白沫,牙关紧闭,最后抽搐而死. l,3I临床类症鉴别 犬瘟热在临床上容易与感冒,呼吸道疾病,胃肠炎,犬细小 病毒性肠炎,传染性肝炎等相混淆,根据其临床特征与犬瘟热 进行初步鉴别诊断.单纯性胃肠炎时,无双相热型,无鼻,眼分 泌物等.传染性肝炎时,有黄疸等.犬细小病毒性肠炎呕吐剧 烈,频繁,饮水后立即发生呕吐,渴欲强烈,排出的番茄汁样血 便次数多,数量大.感冒时体温升高,无双相热型,鼻流清涕, 无流泪现象.而犬瘟热双相热型,眼,鼻有分泌物,严重时有脓 性分泌物;病犬饮水后较少发生呕吐,初便秘,后腹泻,粪便稀 薄,恶臭,有时混有气泡和血液;鼻,足垫过度角化;末期常出现 腹痛,肌肉振颤等神经症状,甚至惊厥直至死亡. 2实验室常规诊断 2.1包涵体检查 包涵体主要存在于膀胱,胆管,胆囊,肾盂上皮细胞内.取 清洁载玻片,滴加生理盐水1滴,用小刀在膀胱黏膜上刮取上 皮细胞,与生理盐水混合研匀,制成涂片,置空气中自然干燥 后,用甲醇固定,苏木精一伊红染色后镜检.细胞核染成蓝紫