反式_BPDE诱发人胎气管上皮细胞p53基因突变的研究

反式_BPDE诱发人胎气管上皮细胞p53基因突变的研究 Carcinogenesis Teratogenesis and Mutagenesis Vol 12 No 3 J uly , 2000 癌变畸变?突?变 2000 年 7 月第 12 卷第 3 期 () 文章编号 :1004 - 616 X200003 - 0136 - 03 ? 反式 - B PD E 诱发人胎气管上皮细胞 p 53 基因突变的研究 雷毅雄 ,陈家 ,吴中亮 ,易 菲 )(510182 广州医学院化学致癌研究所 ,广东 广州 () () 摘要 :目的 :探讨苯并 a芘在人肺癌发生中的作用 。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 :用苯并 a芘的代谢产物反式 - B PD E ,作用于体外培养的人胎气 管上皮细胞 8,12 周后 ,用 PCR - SSCP 方法检测 p53 抑癌基因第 6 ,7 ,8 外显子的点突变情况 。结果 :经反式 - B PD E 处理的 人胎气管上皮细胞 ,p53 第 7 ,8 外显子有点突变 ,而这些细胞都未出现典型的转化细胞形态特征的改变 。结论 : 反式 - B PD E 可诱发人胎气管上皮细胞 p53 基因点突变 ,此抑癌基因的点突变早于细胞形态学的改变 。 () 关键词 :苯并 a芘 ;气管上皮细胞 ;p53 基因 ;点突变 中国分类号 : R730123 文献标识码 :A STUDY O N THE POI NT M UTATIO N OF THE p53 TUMO R S UPP RESSO R GENE I N HUMA N FETAL TRAC HEAL EPITHEL I UM CELL TREATED WITH TRA NS - BPD E L E I Yi - xio ng , CH EN J ia - kun , WU Zho ng - liang , YI Fei ( )Guangz hou I nstit ute f or Chem ical Carci nogenesis , Guangz hou Medical College , Guan gz hou 510182 , Chi na Abstract : Purpose : In o rder to st udy t he effect s of t rans - B PD E o n t he develop ment in human lung cancer , hu2 ( ) man fetal t racheal epit helium cells HF T Escult ured in vit ro were expo sed to t rans - B PD E , a metabolite of () () benzo ap yrene B aP . Methods : Fo r 8,12 weeks , t he point mutatio ns in exo n 6,8 of p 53 t umo r supp res2 so r gene in t hese HF T Es were detected by PCR - SSCP assay. Results : The result s showed t hat t he HF T Es t reated wit h t rans - B PD E had point mutatio ns in exo ns 7 and 8 of p 53 t umo r supp resso r gene , even t ho ugh no malignantly t ransfo r med characteristics were o bserved in cellular mo rp hology. Concl usion : t hese result s suggest t hat t rans - B PD E can induce point mutatio n in p 53 t umo r supp resso r gene in t hese HF T Es and t he point muta2 tio n and activatio n of p 53 may occur in t he cells befo re mo rp hological t ransfo r matio n . () Key words :Benzo ap yrene ; t racheal epit helium ; p 53 t umo r supp resso r gene ; point mutatio n 70 % - 80 %的肿瘤发生与化学致癌物的作用有 学致癌物作用与 p 53 原抑癌基因活化的关系便成为 () 关 ,而人类肿瘤中最常见的一种遗传学改变是抑癌基 目前研究的热点 。本实验用苯并 a芘代谢活化的终 1 ,2 (因的突变或纯合性缺失. 大量实验研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明 ,乳 致癌物 ,反式 - 7 ,8 - 二羟 - 9 ,10 - 环氧苯并芘 简称 ) 腺癌 、结肠癌 、膀胱癌 、宫颈癌 、成骨肉瘤 、胃癌 、肝癌 、 反式 - B PD E, 作用于体外培养的人胎气管上皮细 3 肺癌等肿瘤中均有 p 53 抑癌基因的突变. 因此 ,化 胞 ,观察其转化活性 ,并用 PCR - SSCP 方法检测细 ? 收稿日期 :1999 - 10 - 15 ; 修订日期 :2000 - 02 - 14 ( ) 基金项目 :广东省自然科学基金资助项目 940397:卫生部课题基金资助项目 ( ) 作者简介 :雷毅雄 1960 - ,男 ,广东省广州市人 ,副教授 ,医学硕士 。 1 细胞培养与染毒 1 细胞的形态学改变 气管取自 4,6 月胎龄的水囊引产胎儿 。气管植块 经免疫组化检查和罗丹宁染色 ,证实培养的人胎 接种到鼠尾胶薄玻片上 ,在含 5 %CO的 37 ?培养箱中 气管上皮细胞是上皮细胞 。反式 - B PD E 处理前后 , 2 μ培养 ,用 MCDB - 153 培养基 ,并补充 10g/ ml 胰岛素 、 其形态无显著的变化 ,细胞贴壁生长呈多边形铺路石 μμ20ng/ ml 上皮细胞生长因子 、5g/ ml 转铁蛋白 、1mol/ L 样排列 ,无叠层生长 ,细胞界限清楚 ,胞质丰富 ,胞核 氢化可的松和 2 %的胎牛血清 。待上皮细胞细胞晕生长 和核仁清晰 ,为典型的上皮细胞形态 。未发现有明显 μ到 015cm 左右时 ,往细胞培养液中加入终浓度为 110g/ 的转化细胞的形态特征 。 ) (ml 的反式 - BPDESIGMA 公司,37 ?培养 24h 后 ,换正 2 人胎气管上皮细胞 p 53 基因突变 以无染毒的人 常培养液 。每周染毒 1 次 ,共染毒 8,12 次 。 胎气管上皮细胞为正常对照 , 用 PCR - SSCP 方法分别检测经反式 - B PD E 染毒的人 2 DNA 抽提 ( 用 PB S 冲洗细胞 ,直接加入小量细胞裂解液 含 胎气管上皮细胞 p 53 基因突变情况 。结果可见图 1 , ) SDS , ED TA , RNA 酶后 ,37 ?裂解消化 1 h 。将裂解 经反式 - B PD E 染毒的人胎气管上皮细胞 DNA 单链 μ细胞液移管 , 加入 100g/ ml 蛋白酶 K , 50 ?孵育 2 h 电泳迁移率发生了明显变化 ,染毒 8 次的细胞 p 53 基 后 ,于 37 ?中消化过夜 ,按常规的酚和氯仿抽提法进 4 因第 7 和第 8 外显子均有突变 ,而染毒 12 次的细胞 行 DNA 抽提。用紫外分光光度法测定 DNA 浓度 p 53 基因第 7 外显子缺失一条较大的 DNA 带 ,显示 ( ) 和纯度 ,OD 值 260 nm/ 280 nm在 118,210 之间 ,则 该样本 DNA 序列发生较大的改变 。 认为 DNA 纯度合格 。 1 2 3 4 5 6 7 8 9 3 PCR 扩增 取小量 DNA 样本进行 p 53 第 6 ,7 ,8 ,外显子基 μ因扩增 , 总 反 应 体 系 100l , 扩 增 循 环 参 数 为 93 ? 30s ,60,67 ? 45s ,72 ? 30s ,共 34 个周期 。引物为 : 5 - CAC T GA T T GC TC T2 exo n 6 sense TA GGTC T GGC - 3 A GT TCAAACCA GAC2 antisense 5 - C TCA GGGG - 3 - C TCC TA GGT T G2 exo n 7 5 sense GC TC T GAC T GT - 3 5 - CAA GT GGC TCC T2 antisense GACC T GGA - 3 CC TA TCC T GA G2 exo n 8 5 - sense TA GT GGTAA TC TAC - 3 GTCC T GC T T GC T2 antisense 5 - TACC TC GC T TA GT - 3 4 p 53 基因突变检测5 p53 基因突变检测采用 PCR - SSCP 方法. 分别取 μp53 第 6 ,7 ,8 外显子 PCR 扩增产物 10l 与等量变性上 样液混合 ,95 ?变性 5min ,立即冰冻 ,行 8 %聚丙烯酰胺 () μ29 :1垂直电泳 ,100V ,4h ;将凝胶浸泡于含 015g/ ml 溴 Figure 1 PCR - SSCP analysis of t he point mutatio ns in t he p53 in human — 137 — fetal t racheal epit helium cells t reated wit h t rans - B PD E 起抑癌基因的点突变 ,这在某种程度上可以解释为什 Lines 1 ,4 and 7 : Samples 1 , 4 and 7 , t he no n - t reat ment samples ; () 么苯并 a芘是一种危险的致肺癌因素 。用人胎气管 Lines 2 ,5 and 8 : Samples 2 ,5 and 8 , t reated 8 times wit h t rans - B PD E ; 上皮细胞模型进行化学致癌实验 ,更能反映出化学致 Lines 3 , 6 and 9 : Samples 3 , 6 and 9 , t reated 12 times wit h t rans - 癌物在人类肺癌发生中的作用 ,为人类肺癌化学病因 B PD E ; 的研究提供一种可供参考的模式 。 () ( ) p53 exo n 6 Lines 1 ,2 and 3, no migratio n change no mutatio n; () p53 exo n 7 Lines 4 ,5 and 6, t here is migratio n change in samples 5 and 6 co mpared wit h no n - t reat ment sample 4 ; 参考文献 : () p53 exo n 7 Lines 7 ,8 and 9, t here is a change in sample 8 , in t his sam2 1 L evine AJ , Mo mand J , Finlay CA. The p53 t umo r supp resso r gene ple , o ne majo r band is deleted t hat means t he o bvio us change in DNA J . N at u re , 1991 ,351 :453 - 456 . sep uencing of t he sample . 2 李伟峰 , 赵彤 1p16 基因与肺癌 J 1 国 外 医 学 呼 吸 系 统 分 册 , ( ) 1997 ,17 1:5 - 71 3 Hollstein M , Sidransky D , Vogelstein B , et al . p53 mutatio ns in 讨 论 human cancersJ . S cience , 1991 ,253 :49 - 53 . () 苯并 a芘是一种广泛存在的环境污染物 ,实验 4 ( ) 卢圣栋 1 现代分子生物学实验技术 M1 第一版 1 北京 :高等教 室研究和肿瘤流行病学调查均提示它与人类肺癌的 育出版社 ,1993150 - 601 6 ( ) 发生有关。苯并 a芘是一种前致癌物 ,进入机体 Ainswo rt h PJ , Sur h L C , Co ulter - Mackie MB. Diagno stic single 5 ( ) 后需经微粒体酶代谢激活 ,才可转变成能与 DNA 共 st rand co nfo r matio nal polymo rp hism SSCP: a simplified no n - ra2 7 () N u2 dioisotopic met ho d as applied to a Tay - Sachs Bl variant J . 价结合的终致癌物。有研究显示苯并 a芘的终致 8 cleic A ci ds Res , 1991 , 19 :405 - 406 . 癌物之一反式 - B PD E 可与鸟嘌呤形成加合物,进 6 Brislow L . Occupatio ns and cigaret te smo king as facto rs in lung 9 而诱发点突变。本实验结果显示 ,反式 - B PD E 可 cancer J . A m J Publ Heal t h , 1954 , 44 :177 - 180 . 诱导人胎气管上皮细胞 p 53 抑癌基因第 7 ,8 外显子 ( )7 Ko reeda M , Moo re PD , Wislocki P G et al . Binding of benzo a 点突变 ,而这些细胞尚未出现典型的转化细胞形态特 p yrene 7 , 8 - diol - 9 , 10 - epo xides to DNA , RNA and p rotein of 征改变 。表明反式 - B PD E 可诱发人胎气管上皮细 S cience , 1978 , mo use skin occurs wt h high stereo selectivit y J . 199 :778 - 781 . 胞 p 53 基因点突变 ,抑癌基因的点突变早于细胞形态 8 J eff rey AM , Weinstein IB , J ennet te KW et al . St ruct ure of benzo 学的改变 。过去 ,我们用人胎气管上皮细胞模型进行 ( ) a p yrene nucleic acid adduct s fo r med in human and bovine 转化实验 ,也发现反式 - B PD E 有诱导气管上皮细胞 bro nchial explant sJ . N at u re , 1977 , 269 :348 - 350 . H - ras 癌基因 12 位点密码子点突变作用 ,而且癌基 ( )9 Carot hers AM , Grunberger D. DNA base changes in benzo a 10 因的点突变早于细胞形态学的改变。以上结果提 p yrene diol epo xide - induced dihydrofolate reductase mutant s of Ca rci nogenesis , 1990 , 11 :189 - Chinese hamster ovary cellsJ . 示 ,人气管上皮细胞的体外转化 ,早期不一定出现明 192 . 显的转化细胞的形态特征 ,癌基因和抑癌基因的点突 10 詹德进 ,陈家坤 , 靳波 ,等 1 反式 - B PD E 诱发人胎气管上皮细 变往往早于细胞的形态学改变 。反式 - B PD E 不仅 胞 H - ras 癌基因点突变的研究 J 1 卫生毒理学杂志 , 1992 , 6 可引起人气管上皮细胞癌基因的点突变 ,同时亦可引 ( ) 4:233 - 235 . 书 关于书的成语关于读书的排比句社区图书漂流公约怎么写关于读书的小报汉书pdf 讯 由第三军医大学曹佳教授主编 ,中 、日 、德 、瑞典等国数名长期从事微核研究的专家共同撰写的《微核试验 —原理 、方法及其在人群监测和 毒性评价中的应用》一书 ,已由军事医学科学出版社出版 。本书共十一章 ,详细介绍了微核实验的原理 、形成动力学 、以及在红细胞 、淋巴细胞 、 上皮脱落细胞 、肝细胞 、植物紫露草等检测材料中的应用 ,及微核对非整倍体的检测 ,流式仪和图像的自动化检测 。附录中收录了化学诱变剂 中 、英文目录 、 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 微核实验 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 等 。 ( ) ( 该书定价 15100 元 另加邮费 110 元款到即寄书 。汇款地址 : 重庆市高滩岩第三军医大学卫生毒理学教研室 孙华明 电话 : 023 - ) 68752295。