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牛膝菊中的萜类及甾醇类成分

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牛膝菊中的萜类及甾醇类成分牛膝菊中的萜类及甾醇类成分 牛膝菊中的萜类及甾醇类成分 云南大学(自然科学版),2007,29(6):613,616 JournalofYunnanUniversity 53—1045/NIssN0258—7971 牛膝菊中的萜类及甾醇类成分 潘争红,赵檑,黄荣,马国义,李祖强 (1.云南大学化学学院,云南昆明650091;2.悉尼大学药学系,澳大利亚) 摘要:在细胞毒试验结果指导下,同步对牛膝菊(Galinsogaparviflora)全株的有效部位进行化学成分分离 纯化,得到7个化合物,通过理化数...

牛膝菊中的萜类及甾醇类成分
牛膝菊中的萜类及甾醇类成分 牛膝菊中的萜类及甾醇类成分 云南大学(自然科学版),2007,29(6):613,616 JournalofYunnanUniversity 53—1045/NIssN0258—7971 牛膝菊中的萜类及甾醇类成分 潘争红,赵檑,黄荣,马国义,李祖强 (1.云南大学化学学院,云南昆明650091;2.悉尼大学药学系,澳大利亚) 摘要:在细胞毒试验结果指导下,同步对牛膝菊(Galinsogaparviflora)全株的有效部位进行化学成分分离 纯化,得到7个化合物,通过理化数据测定及波谱数据分析,鉴定了化学结构,分别是:对映,贝壳杉一16一烯 一 19一酸(1);对映一15一当归酰氧基一16一贝壳杉烯一19一酸(2);对映一15一当归酰氧基一16,17一环氧一 19一贝壳杉烷酸(3);豆甾醇(4);一菠甾醇(5);一菠甾醇硬脂酸酯(6);口一谷甾醇(7).同时,细胞毒试验表 明,牛膝菊的氯仿及乙酸乙酯提取物有一定细胞毒活性,其Ic5o分别为8.5,】0.5g/mL. 关键词:牛膝菊;细胞毒性;萜烯;甾醇 中图分类号:Q949.758.5;Q946文献标识码:A文章编号:0258—7971(2007)06—0613—04 牛膝菊(G.parvifloraCav.Ic.etDescr.)_l为 菊科(Compositae)牛膝菊属(GalinsogaRuiz)植 物,又名辣子草,铜锤草,珍珠草,向阳花.牛膝菊属 植物主要分布于热带美洲,全世界共有5个种,我 国有2个种,牛膝菊仅分布于西南地区的云南,四 川,贵州等省l2j. 牛膝菊全株可人药,民间用于治疗各种疾病, 有止血,消炎(扁桃体炎,咽喉炎,急性黄胆肝炎)等 功效.本课题组通过细胞毒试验,发现其有一定的 细胞毒活性.关于该植物的化学成分及抗癌活性, 国内外尚无人报道. 本文的化学成分研究是在抗癌活性药理筛选 结果指导下进行的.用HL60(人白血病)细胞对牛 膝菊的95%乙醇提取物及溶剂分步提取的组分进 行细胞毒性筛选试验的结果表明,氯仿和乙酸乙酯 分步提取的组分有一定的细胞毒性,其Ic0分别为 8.5,10.0g/mL.对有活性的氯仿和乙酸乙酯组 分进行分离纯化,得到l8个单体.通过理化数据测 定及lD一和2D—NMR及MS等波谱分析,鉴定 出其中的7个萜类及甾醇类化合物,分别是:对映 一 贝壳杉一16一烯一l9一酸(1);对映一l5一当归 酰氧基一16一贝壳杉烯一l9一酸(2);对映一l5一 当归酰氧基一l6,l7一环氧一l9一贝壳杉烷酸(3); 豆甾醇(4);a一菠甾醇(5);a一菠甾醇硬脂酸酯 (6);B一谷甾醇(7).化合物l,7均为首次从该植 物中分离得到. 1实验部分 1.1仪器和材料熔点用北京第三光学仪器厂x 一 6型显微熔点测定仪测定,温度未校正.NMR用 Brucker公司AvanceDRX500型核磁共振仪测 定,TMS为内标.MS用英国VG公司AutosDec一 3000型质谱仪测定.柱层析用粗硅胶(0.075, 0.037mm)为青岛海洋化工厂产品,细硅胶(40, 60m)及TLC硅胶片(F254)为Merck公司产品, 牛膝菊采自云南省石屏县,由云南大学胡志浩 教授鉴定,拉丁学名为Galinsoga口0riflor~Car. Ic.etDescr. 1.2分离提取干燥的牛膝菊全株10kg,95%乙 醇浸泡30d,提取浸膏(A0,950g),用石油醚,氯 仿,乙酸乙酯,及甲醇分步萃取,得组分A1,A,A, A4.对A1(155g)及细胞毒试验筛选有活性的组分 A2和A3(m2=105g,m3:100g),用硅胶多次柱 层析,以石油醚一乙酸乙酯一甲醇作洗脱剂,得 *收稿日期:2007—07—02 基金项目:国家自然科学基金资助项目(29962004). 作者简介:潘争红(1979一),男,广西人,硕士生,主要从事天然药物成分方面的研究 通讯作者:李祖强(1943一),男,云南人,教授,主要从事抗癌活性天然药物成分研究 614云南大学(自然科学版)第29卷 A1,A5,Alh,A7b,A1,A7等19个组分.分别用 (0.075,0.037ram)硅胶为吸附剂,以(石油醚/乙 酸乙酯/甲醇)为洗脱剂梯度洗脱或用细硅胶真空 抽提层析再重结晶,纯化得18个单体.其中从A 柱中梯度洗脱,重结晶得化合物1,2,从合并的 (A7b,A1)柱中分离纯化得化合物2,3,从合并的 (A5,Alh)柱中分离纯化得化合物4,5,6,从A2b柱 中分离纯化得化合物6,7. 1.3细胞毒性试验分别称取10nqg的An,A】, A2,,A4等5个样品,用二甲亚砜配成0,1,10, 100g/mL溶液,置于培养瓶中,分别加入含有等 同数目的HL60(人白血病)细胞的10%小牛血清 的RPMI1640培养基,保存在5%CO,的37?的 恒温箱内.分别在12,24,48,72h的时问段,观察 细胞生长情况,最后用染料排斥试验法计算对 HL60细胞生长抑制率.体外试验在悉尼大学癌症 医学系药理实验室实施. 2结果与讨论 2.1细胞毒活性牛膝菊的粗提物(A)及其分 步提取组分(Al,A2,A3,A4)的Ic5o分别为18, 25.8,8.5,10.5,50.1g/mL.结果表明,氯仿及乙 酸乙酯提取组分有一定的细胞毒活性. 2.2结构鉴定化合物1,白色针状晶体,m.P. 166,168,?(CH3OH).结合ESI—MSm/z:303 [M+H]及H,CNMR和DEPT谱得分子式 C20H3002,其不饱和度为6.CNMR和DEPT谱 (见表1)显示有:3个CH,2个CH3,10个CH2,5 个季碳.其中184.12是羧酸羰基(COOH)信号, 155.91(c)和103.01(cH2)表明有环外双键存 在,去除羰基和双键,还有4个不饱和度,且碳的吸 收峰均在高场都是饱和碳,可以推断含有4个环, CNMR和HNMR谱数据与文献[3,4]对照基 本一致,可确定化合物1是一个贝壳杉烯型二萜类 化合物,命名为对映一贝壳杉一16一烯一19一酸 (ent—kaur一16一en一19一oicacid).此化合物是首 次从牛膝菊属植物中分离得到. 化合物2,白色晶Il1.P.198,199?.ESI—MS m/z:401[M+H]及H,CNMR和DEPT谱得 分子式C25H36O4,HNMR(CDCI3,500MHz): 7.27(1H,s,COOH),6.06(1H,q,J=7.0Hz,H一 3),5.36(1H,s,H一15),5.13(2H,s,H一17), 2.79(1H,s,H一13),2.16(2H,d,H一3),1.98 (3H,d,J=7.0Hz,H一4),1.88(3H,s,H一5), 1.23(3H,s,H一18),1.28(1H,t,J=3.5Hz,H一 9),1.12(1H,t,J=12.2Hz,H一5),0.96(3H,s,H 一 20);CNMR和DEPT谱(见表1)显示有:5个 CH(包括在1个双键CH),4个CH3,9个CH2(包 括在1个环外双键),7个季碳(包括在2个羰基). 去除2个双键和2个羰基,还剩4个不饱和度,通 过对比化合物2和1的cNMR图谱,可见两者 具有相似的骨架结构,区别在于化合物2多了1个 酯C一0,1个C=CH,2个CH3,由H6.06(1H, cf,J=7.0Hz,H一3),1.98(3H,d,J:7.0Hz,H一 4)及与文献[3]对照可知,这是个当归酰基信号; 另外,15位碳的化学位移明显向低场移动(48.98 变成80.54),推断化合物2为1的15位当归酰化 物.综上所述,化合物2鉴定为对映一15一当归酰 氧基一16一贝壳杉烯一19一酸(ent一15一angelov— loxv一16一kauren一19一oie—acid)[,.此化合物 是首次从牛膝菊属植物中分离得到. 化合物3,白色片晶,m.P.234,235?,结合 ESI—MSm/z:417fM+H]及H,CNMR和 DEPT得分子式C25H36O5,HNMR(CDC13,500 MHz):7.27(1H,s,COOH),6.06(1H,cf,J=7.0 Hz,H一3),4.80(1H,s,H一15),3.12(1H,d,Ha一 17),2.78(1H,d,He一17),2.18(2H,d,H一14), 1.98(3H,d,J=7.0Hz,H一4),1.93(3H,s,H一 5),1.24(3H,s,H一18),1.22(1H,t,H一9),1.11 (1H,t,H一5),0.98(3H,s,H一20);比较化合物2 和3的CNMR和DEPT谱,见表1,区别仅在于 化合物3比2少1个C===CH,而多了1个 CH2OCH2基团,再比较16,17位的化学位移,推断 化合物3为2的16,17位(端烯)环氧化物.与文献 [5]对照基本一致,鉴定该化合物为对映一15一当 归酰氧基一16,17一环氧一19一贝壳杉烷酸(ent一 15一angeloyloxy一16.17一epoxy一19一kauranoic acid).此化合物首次从牛膝菊中得到. 化合物4无色针状晶体,Il1.D.168,170?,由 ESI—MS(m/z):413[M+H],结合DEPT和"C NMR可推知其分子式为:C29H48O.HNMR(CD— C13,500MHz):5.36(1H,s,H一6),5.17(1H,dd, J=15.2,8.4Hz,H一22),5.03(1H,dd,J=15.2, 8.4Hz,H一23),3.55(1H,1TI,J=4.8Hz,H一3); CNMR(CDC13,125MHz)140.70(C一5), 138.33(C一22),129.25(C一23),121.72(C一6), 第6期潘争红等:牛膝菊中的萜类及甾醇类成分615 71.80(C一3),56.86(C一17),55.93(C一14), 51.24(C一24),50.13(C一9),42.30(C一4),42.21 (C,13),40.52(C一20),39.67(C一12),37.25(C 一 1),36.51(C一10),31.89(C一2,8,25),31.66(C 一 7),28.93(C一16),25.42(C一28),24.37(C一 15),21.22(C一21),21.08(C,11,27),19.41(C一 19),18.98(C一26),12.27(C一29),12.05(C一 18).HNMR,?CNMR数据与文献[6,7]一致,鉴 定化合物4为豆甾醇(stigmastero1). 表1化合物1—3的CNMR数据(c,aX1l3,125 MHz) Tab.1CNMRdataofcompound1—3(c,CDCI3,125 MHz) 化合物5,白色粒晶,由cI—Ms(m/z):412 [M],IR(cm):3420显示有羟基吸收峰,3010 — 2780,1630,1010说明有双键存在,结合H NMR可推断其分子式:C29H480.H—NMR谱图 数据与一菠甾醇【8,9J对照基本一致,鉴定此化合 物为d一菠甾醇(d—sDinastero1). 化合物6,白色蜡状晶体,m.P.108,110. Leibermanner—Burchard反应显示为甾体化合物, 由EI—Ms(m/z):679[M+1],结合DEPT和 CNMR可推知其分子式为:c47H82O2.IR(em) 显示有羰基存在.4.65(m,H一3),5.03(m,H一 23),5.13(m,H,7,22)是甾体化合物的骨架化学 位移.172.96显示有酯羰基.再结合H一 HCOSY,HSQC,HMBC对H—NMR 和?CNMR进一步仔细分析和指认,上述数据与文 献[8]对照基本一致.鉴定化合物为一菠甾醇硬 脂酸酯. 化合物7,无色针状晶体,m.13.138139, Liebermann—Burchard反应显示为甾体化合物,由 EI—Ms(m/z):415[M+1],结合HNMR和 CNMR可推知其分子式为:c29H5n0.1HNMR (CDC13,500MHz):0.68(3H,S,H一18),0.81 (3H,d,J=6.6Hz,H一27),0.84(6H,,H一26,H 一 29),0.96(3H,d,J=6.6Hz,H一21),1.00(3H, S,H一19),3.53(1H,m,H一3),5.36(1H,m,H一 6).HNMR和CNMR图谱与』3一谷甾醇[10,11] 对照基本相同.故确定其结构为』3一谷甾醇(』3一 sj,ostero1). 参考文献: [1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志(第 74卷)[M].北京:科学出版社:1985. [2]傅立国,陈潭清,郎楷永,等.中国高等植物(第11卷) [M].青岛;青岛出版社,2005. [3]龚运淮.天然有机化合物的"C核磁共振化学位移 [M].昆明:云南科技出版社,1986. [4]龚运淮,丁立生.天然产物核磁共振碳谱分析[M].昆 明:云南科技出版社,2005. 15JFerdinandBohlmann,JurgenZiesche,KINGRM,eta1. EudesmanolidesandditerpenesfromWedeliatrilobata andanent—kaurenicacidderivativefromAspiliaparvifo— lia[J].Phytochemistrv,1981,20(4):751-756. [6]张晓琦,戚进,叶文才.苍耳茎化学成分的研究[J].中 国药科大学,2004,35(5):404—405. 616云南大学(自然科学版)第29卷 张卫东,陈万生,孔德云,等.中药灯盏细辛化学成分 研究(?)[J].第二军医大学,2000,21(10):914— 916. HELLERSR,MIOLINEGWA.EPA/NIHMSSpec— traldatabase[M].Washington.US:GovermentPrinting 0ffice.1979.83.48—7. [9]田晶,肖志艳,陈雅开,等.夏枯草皂甙A的结构鉴定 [J].药学,2000,35(1):29.31. [10]白素平,范秉琳,闫福林.东风菜中甾体成分研究 [J].新乡医学院,2005,22(3):185.187. [11]陆江海,黄勤安,赵玉英,等.醉鱼草化学成分的研究 [J].中草药,2001,32(4):296.299. TerpenesandsterolsfromGalinsogaparrflora PANZheng-hong,ZHAOLei,HUANGRong,MAGuo.yi,LIZu.qiang (1.ExperimentalCenter,YunnanUniversity,Kunming650091,China; 2.FacultyofPharmacy,theUniversityofSydney,NSW,Australia) Abstract:ThechemicalconstituentsofGalinsogaparvflorawerestudied.Sevencompoundswereisolat- edfromG.parvflorabycolumnchr0mat.gramphiesofsephadexLH-20andsilicage1.Theirstructureswere identifiedbyphysicalandchemicalpropertiesandspectraldataanalysis.Allthesevencompoundswereisolated fromthisplantforthefirsttime.Thesecompundsare:ent-kaur-16-en-19-oicacid.ent-15-angeloyloxy-16-kau? ren-19-oic-acid,ent-15-angeloyloxy-16,17-epoxy-19-kauranoicacid,stigmasterol,a-spinasterol,a- spinasterylq0ctadecanate,』 3-sitoste1.CytotoxicityscreeningoftheextractsfromGalinsogaparvifloraCavwas carriedoutbyHL60cel1.Twoextractivefractionsobtainedwithchloroformandethylacetatepossessanti- canceractivities.TheirIC50are8.5,10.5t~g/mLrespectively. Keywords:GalinsogaparvifloraCav.;cytotoxicity;terpenes;sterols ***************************** (上接第612页) S—wavevelocitystructuresinbothsidesofDayingjiangfault inversedbyreceiverfunction FUZhu.wu,LIUJian-hua2,XUYi,WENLi.min,XUWai.fen,MAHong-hu (1.DepartmentofGeophysics,YunnanUniversity,Kunming650091,China; 2.InstituteofGeologyandGeophysics,TheChineseAcademyofSciences,Beijing100029, China) Abstract:Thestudiedareais24.2.一25.2.N,97.o一 98.5.E.Thestudiedfivedigitalseismicstations distributedinthebothsidesoftheDayingjiangfaultinthestudiedarea.TheS— wavevelocitystructureswithin thedepthof0一 l00kmbeneathfivestationsareinversedfromthebroadbandteleseismicPwaveformsbyre- ceiverfunction.Theresultsshow:InthenorthwestsideoftheDayingjiangfault,thedepthofMohoisabout 38km.andinthesoutheastside,thedepthofMohois40—42km.TheS— wavevelocitystructuresofthecrust anduppermantledifferobviouslyinthebothsidesofthefauh.Inthesoutheastside,therearelowervelocity zonesinbothcrustanduppermantlebeneaththestations:butinthenorthwestside,therearelowervelocity zonesonlvinthecrustbeneaththestations.Inthestudiedarea,theS.wavevelocitystructuresshowsstrong horizontalheterogeneity. Keywords:Dayingjiangfault;receiverfunction;S— wavevelocitystructure;crust;uppermantle;Yunnan
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