[word格式] 高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量及有关物质

[word格式] 高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量及有关物质 高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量及 有关物质 338 中圃兽科太警 JournalofChinaPharmaceuticalUniversity2004,35(4):338,340 高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量及有关物质 高青,周立春,夏瑞,雒剑 (北京市药品检验所,北京100035) 【摘要】目的:采用HPLC方法测定石杉碱甲及其制剂的含量.方法:采用c1R(25emx4.6mm)色谱柱, 0.[)2%三乙胺的甲醇一水(5o:50)溶液为流动相,柱温4JD?,流速1ml/min,检测波长310nln.结果:在1.0—51.0 /xg?ml范围内,色谱峰面积与对照品浓度呈现有良好的线性关系,r=1.000;平均回收率为99.9%(RSD为 0.6%,n=9).结论:该方法简便准确,重现性好,在本色谱条件下,石杉碱甲与其降解产物能很好的分离,可以 准确测定石杉碱甲的含量,也可以用于原料及其制剂有关物质的限度检查. 【关键词】石杉碱甲;高效液相色谱 【中图分类号】.7;P031.71【文献标识码】A【文章编号】 1000-5048(2004)04-0338—03 石杉碱甲(HuperzineA)系从石杉科石杉属植 物千层塔[Hupe~iaserrata(Thunb)]中分离得到的新 生物碱,是可逆性胆碱酯酶抑制剂,主要用于治疗 重症肌无力和中老年记忆力减退及早老性痴呆,记 忆减退等病症J.石杉碱甲片为北京四环制药厂 生产,由北京药品检验所进行试行 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 转正工作. 试行标准_4J中含量测定采用提取浓缩后比色测定, 操作十分繁琐,并且由于本品规格很小,每片仅含 50,最后定容的溶剂体积只有0.8n1l,测定误差 很大;有关物质采用薄层色谱法,专属性及灵敏度 均达不到要求.本文经过方法学验证后将含量测 定和有关物质检查均修订为HPLC方法,灵敏度 高,重现性好,操作简便,结果准确,已经批准成为 国家正式标准. 1仪器与试药 日本岛津LC一10Avp高效液相色谱系统. 乙腈为进口色谱纯试剂;三乙胺为分析纯试 剂. 石杉碱甲对照品(本所标定,按峰面积归一化 法计算,纯度为99.5%以上)及片剂(批号为 001219,001220,001221)均由北京四环制药厂提供. 2色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂; 【收稿日期】2003—11-24【通讯作者】Tel:010.66016661 流动相:含0.02%三乙胺的甲醇一水(50:50)溶液; 柱温:40?;检测波长:310nm;流速:1ml/min;进 样量:20l;经理论板数按石杉碱甲峰计算不低于 4O00. 3含量测定 3.1对照品溶液的制备 精密称取石杉碱甲对照品25mg,置100ml量 瓶中,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度, 摇匀,精密量取2ml,置100ml量瓶中,加 0.01m0l/嗌酸溶液稀释至刻度,摇匀,即得每毫 升含石杉碱甲5g的溶液. 3.2供试品溶液的制备 取本品10片,精密称定,研细,精密称取细粉 适量(约相当于石杉碱甲0.25mg),置50n1l量瓶 中,加0.01moL/L盐酸溶液适量,振摇使溶解,加 0.01moL/L盐酸溶液稀释至刻度,摇匀,滤过,弃去 初滤液,精密量取续滤液作为供试品溶液. 3.3线性关系 取石杉碱甲对照品25mg,精密称定,置100ml 量瓶中,加0.01moL/L盐酸溶液溶解并稀释至刻 度,摇匀,分别精密量取该溶液1,2.5,5,10,25, 50n1l,分别置250ml量瓶中,用0.01mol/L盐酸溶 液稀释至刻度,摇匀,精密量取上述溶液各20l, 分别注入液相色谱仪,记录色谱图,以峰面积对浓 4期高青等:高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量及有关物质339 度(t~#rrd)进行线性回归,得回归方程如下: A=4.2474c+0.0527(r:1.000) 结果 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明,石杉碱甲浓度与峰面积之间具有良 好的线性关系,线性范围为1.0,51.0g/rnJ. 3.4进样精密度试验 取石杉碱甲对照品,按”3.1”项方法制成5 rnl的溶液,重复进样5次,求得峰面积的RSD为 0.2%. 3.5重复性试验 取石杉碱甲原料,按”3.1”项方法制成5g/rnl 的溶液6份,分别按样品测定项下方法测定,求得 含量平均值为99.5%,RSD为0.46%,方法显示较 高的重复性. 3.6回收率试验 取石杉碱甲对照品适量,按石杉碱甲片处方配 成含主药80%,100%和120%的模拟样,按照含量 测定项下操作,测得平均回收率为99.9%,RSD为 0.6%,n=9. 3.7辅料干扰试验 按石杉碱甲片处方配制辅料混合物,精密称取 0.325g,置50rnJ量瓶中,加0.01moL/L盐酸溶液 溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过.精密量取续滤液 20l注入液相色谱仪,记录色谱图(图1).结果表 明,石杉碱甲片的辅料对石杉碱甲的含量测定没有 影响. #min Fig】.HPLCofblankexcipients 3.8稳定性试验 取含量测定项下溶液室温放置,分别在2,4, 6,8,12,24h精密量取20l,注入液相色谱仪,求得 峰面积的RSD为0.4%,结果表明含量测定用溶液 室温放置至少可稳定24h. 3.9样品含量测定 取石杉碱甲对照品及片剂,按”3.1”和”3.2”项 下方法制备对照品溶液和供试品溶液,分别精密量 取上述溶液20l进样,记录色谱图,供试品图谱与 对照品图谱相同(图2),按外标法以峰面积计算供 试品的含量,并同时按原卫生部试行标准测定含 量,结果见表1. 468lOl2 //mI几 Tab1Contentdetemfinabonofhuperzine—Atablet 4有关物质 色谱条件与系统适用性,样品溶液的配制及样 品测定同含量测定项下. 4.I破坏性试验 取石杉碱甲对照品适量,分别用1mol/L盐酸 溶液,1moL/L氢氧化钠溶液,30%过氧化氢溶液水 浴加热,光照10d及105oC高温4d进行破坏.结 果表明:在破坏性试验图谱中,各杂质与主峰均有 良好的分离度;相邻杂质之间的分离度大于1.5. 4.2灵敏度 取”3.2”项下供试品溶液,定量稀释制成每毫 升中含0.1g(2%),0.04g(0.8%),0.02g (0.4%)的溶液,精密量取20l注入液相色谱仪, 记录色谱图.结果显示本方法可检测出0.4ng的 本品,灵敏度符合测定要求. 4.3样品有关物质测定 取”3.2”项下的供试品溶液作为有关物质测定 的供试品溶液,并精密量取适量供试品溶液,用流动 相稀释成0.05g/rnl的溶液,作为对照溶液,精密量 取对照溶液20注入液相色谱仪,调节检测灵敏 度,使主峰高约为满刻度的25%,再精密量取供试品 溶液20注入液相色谱仪,记录色谱图(图3).限 度为不得超过标示量的4.0%.结果见表2. 340中圃善科久擎.,China一Univ35卷 02468l0l2l4 t/min Fig3.HPLCofrelatedsubstances Tab2.Determinationo1relatedsubstancesinhuperzine—Atablet 5讨论 5.1色谱柱及流动相的选择 参考文献l引,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充 剂;以含0.02%三乙醇胺的甲醇一水(50:50)为流动 相;柱温为40?.经试验,本品主峰对称性不好, 与相邻杂质峰的分离度小于1.0;并且由于流动相 粘度较大,柱压偏高;将上述流动相中的三乙醇胺 换为三乙胺,其它组分及比例不变,试验结果表明 峰对称性好,柱压低,本品主峰保留时问为8.4min (柱长25cm),理论塔板数按石杉碱甲峰计算为 3000,石杉碱甲峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5. 经试验不同品牌cI8色谱柱,均有很好的峰形和分 离度,据此判断本方法耐用性良好. 5.2含量均匀度检查 石杉碱甲片为小规格片剂,需进行含量均匀度 检查,原方法为比较紫外吸收度值,不能直接得到 含量结果.本法确定的色谱条件可快速准确地测 定出含量均匀度结果. 5.3有关物质检查 由于本品制剂规格小,每片仅含50g,另外, 石杉碱甲原料是从自然植物中提取的生物碱,杂质 可能比人工合成品要高,因此有关物质限度定的比 较宽,为不得超过标示量的4.0%.实际测得的杂 质含量低于TLC方法测得的数据,推测应该是 HPLC方法排除_r辅料的干扰,结果更准确可靠. 【参考文献】 [1]王月娥(WangYE),岳冬贤(YueDX),脚希灿(TangXC),等. 石杉碱If{的抗胆碱酯酶作用[J].中国药理(Acta Pharrruw~lSin),1986,7(2):IIO. [2]张锐武(ZhangRW),唐希灿(TangXC),韩燕艺(HanYY),等. 百杉碱甲治疗老年期记忆障碍的药物评价[J].中国药理学 报(ActaPharmaeolSin),199l,12(3):250.252. [3]朱晓东(ZhuXD),唐希灿(TangXC).4i杉碱甲促进小鼠的 问辨别学习和记忆[J].药学(ActaPharmSin),1987,22 (II):8l2_8l7. [4]卫生部新药标准(试行)[S].WS-127(X.1o7).94. [5]周芝芳(ZhouZF),林志红(LinZH),谢桦(XieH),等.高效 液相色谱法测定石杉碱甲胶囊的含垦[J].药物分析杂志 (ChJPharmAna1),1998,18(2):104—107. DeterminationofHuperzineAinItsPreparationbyHPLC GAOQing,ZHOULi—Chun,XIARun,LUOJian (InstituteforDControl,100035,China) 【ABSTRACT】 AIM:ToestablishHPLCmethodf0rthedeterminationofhuperzineAinitspreparation.METHOD: UsingCI8column(250mill×4.6mil1),0.02%triethylaminemethanolsolution—water(50:50)asmobilephase,ata flowrateof1ml/min,coulmntemperatureis40?,andthedetectionwaveleng thWas310FIIII.RESUL.T:I11e calibrationcurvewaslinearintherangeof1.0, 51.0g/m1(r=1.0000).rI11eaveragerecoverieswere99.9% (RSD=0.6%,n=9).CONCLUSION:I11ismethodissimple,accurateandreproducible.Underthiscondition, huperzineA’srelatedsubstancewillbeseparated.Thereforethismethodcanb eusedinthedeterminationofcontentof therelatedsubstance. 【KEYWORDS】HuperzineA;HPLC;Determinationofcontent