细菌药物敏感试验的标准操作程序（药敏SOP文件）

细菌药物敏感试验的 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 操作程序（药敏SOP文件） 改良Kirby-Bauer法 将含有抗菌药物的纸片贴在已接种待测菌的琼脂平板上。抗菌药物在琼脂内 由纸片中心向四周扩散，其浓度呈梯度递减。经过 规定 关于下班后关闭电源的规定党章中关于入党时间的规定公务员考核规定下载规定办法文件下载宁波关于闷顶的规定 时间、条件的孵育培养后， 在纸片周围一定距离内细菌生长受到抑制，形成透明的抑菌圈。其直径大小与药 物浓度的对数呈线性关系。抑菌圈的大小反映待试菌对测定药物的敏感程度。 各种标本分离出的待测病原菌。 , 普通培养箱： , CO培养箱： 2 1. 培养基： M-H琼脂（商业成品）：用于非苛养菌的药物敏感性试验。 5%脱纤维羊血M-H琼脂（商业成品）：用于苛养菌的药物敏感性试验。 HTM：用于嗜血杆菌的药物敏感性试验。 2. 试剂： 无菌生理盐水（自制） 比浊仪（法国生物梅里埃公司生产）或麦氏标准比浊管（商业成品） 3. 抗菌药物纸片： 1） 品牌： 英国OXOID 2） 储存条件：-20?冰箱 3） 使用期限：有效期内使用，常用纸片开启后60天有效。不常用的纸片，开 启后装在含有干燥剂的密封盒内，-20?冰箱保存，有效期内使用。 1 4．其他：无菌棉拭、纸片分配器、镊子、游标卡尺或毫米尺、接种环。 在平板上挑取适量已分纯菌落，将细菌溶于0.9%无菌生理盐水中，用比浊仪或0.5麦氏标准比浊管将菌液浓度调整至0.5麦氏单位，含菌量1-2× 810cfu/L。 1. 测试平板接种：用无菌棉签浸入调节好的细菌悬液，将多余细菌悬液在管壁 挤出，在平板上反复涂布三次，每次旋转平皿60?，最后沿平板周围涂两圈， 保证涂布均匀。 平板在室温下干燥3-5min后贴纸片：无论用手工贴或纸片分配器，必须使 纸片完全与琼脂 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 面接触，各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应 大于15mm，一旦贴在某一位置，不应变动位置。15分钟后将贴有纸片的平 板置35?孵育18-24小时 结果判读：用或毫米尺量取抑菌圈直径（以mm为单位），根据CLSI 标准，按敏感（S）、中介（I）、耐药（R）报告。以没有明显肉眼可见生长 物区域为抑菌圈边绝缘，极其细小菌落生长可以忽略不计。由于培养基内抗 药成份使其对甲氧苄啶和磺胺甲噁唑引起的轻微细菌生长，生长层小于20% 可以忽略不计。 我们以CLSI/NCCLS修订的选药分组为根本标准，同时参照国内知名医院的 经验来进行药物敏感试验。 • 肠肝菌科细菌抗菌药物选择，见表1。 • 铜绿假单胞菌抗菌药物选择，见表2。 • 不动杆菌属细菌抗菌药物选择，见表3。 • 嗜麦芽窄食单胞菌和伯克霍德菌抗菌药物选择，见表4。 • 葡萄球菌属细菌抗菌药物选择，见表5。 • 肠球菌属细菌抗菌药物选择，见表6。 • 肺炎链球菌属细菌抗菌药物选择，见表7。 • 除肺炎链球菌之外的链球菌属细菌抗菌药物选择，见表8。 2 • 沙门氏、志贺氏菌抗菌药物选择，见表9 • 嗜血杆菌属抗菌药物选择，见表10 • 肠杆菌科及不动杆菌属细菌纸片法药敏判断标准，见表11。 *• CLSI/NCCLS大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、奇异变形杆菌ESBLs 检测的筛选和确证试验，见表12。 • 铜绿假单胞菌等糖不发酵革兰阴性杆菌纸片法药敏判断标准，见表13。 • 葡萄球菌属细菌纸片法药敏判断标准，见表14。 *• CLSI/NCCLS纸片扩散法检测葡萄球菌中由mecA基因介导的耐药，见表15。 • 肠球菌纸片法药敏判断标准，见表16。 • 肺炎链球菌纸片法药敏判断标准，见表17。 • 除肺炎链球菌以外的其他链球菌纸片法药敏判断标准，见表18。 • 沙门菌、志贺菌纸片法药敏判断标准，见表19。 • 嗜血杆菌属纸片法药敏判断标准，见表20。 • 纸片法药敏标准菌株质控范围，见表21。 1 阿米卡星 ? 亚胺培南 ? 庆大霉素 美罗培南 ? ? 氨苄西林 ? 环丙沙星 ? 哌拉西林 ? SXT-TMP ? ? 头孢唑啉 ? 头孢西丁 ? 头孢克罗 ? 氨苄西林/舒巴坦 ? 头孢丙烯 ? 头孢哌酮/舒巴坦 ? 头孢呋辛 ? 哌拉西林/他唑巴坦 ? 头孢噻肟 ? 头孢噻肟/克拉维酸 头孢吡肟 ? 头孢他啶/克拉维酸 头孢他啶 ? 呋喃妥因 ? ? ESBLs 3 2 阿米卡星 ? 亚胺培南 ? 庆大霉素 ? 美罗培南 ? 哌拉西林 ? 环丙沙星 ? 头孢哌酮 ? 氧氟沙星 ? 氨曲南 ? 替卡西林/克拉维酸 ? 头孢他啶 ? 头孢哌酮/舒巴坦 ? 头孢吡肟 ? 哌拉西林 /他唑巴坦 ? 阿米卡星 ? 亚胺培南 ? 庆大霉素 ? 美罗培南 ? 哌拉西林 ? 环丙沙星 ? 头孢呋辛 ? SXT-TMP ? 头孢噻肟 ? 氨苄西林/舒巴坦 ? 头孢他啶 ? 头孢哌酮/舒巴坦 ? 头孢吡肟 ? 哌拉西林/他唑巴坦 ? ***头孢他啶 ? 左氧氟沙星 ? *美罗培南 ? SXT-TMP ? 米诺环素 ? 4 * 为伯克霍尔德菌所选用药物 ** 为嗜麦芽窄食单胞菌所选用药物 其余为两菌共选用药物。 5 青霉素 ? 万古霉素 ? 庆大霉素 ? 替考拉宁 ? 苯唑西林 ? 左氧氟沙星 ? 头孢唑啉 ? SXT-TMP ? ? 头孢呋辛 ? 头孢西丁 ? 克林霉素 ? 氨苄西林/舒巴坦 ? 红霉素 ? 呋喃妥因 ? 磷霉素 ? 利福平 ? MRS 注：头孢西丁药敏结果可判别MR菌株，但报告时报苯唑西林耐药或敏感。 6 氨苄西林 ? 环丙沙星 ? 呋喃妥因 ? 庆大霉素（120 ug） ? 万古霉素 ? 红霉素 ? 替考拉宁 ? 7 **青霉素（E-test） ? 氯霉素 ? 万古霉素 ? 克林霉素 ? 5 *红霉素 ? 苯唑西林 ? 左氧氟沙星 ? 头孢丙烯 ? * 判别PSSP及PNSP菌株。 ** 适用于PNSP菌株，进一步确证PSSP、PISP和PRSP。 8 青霉素 ? 头孢丙烯 ? 红霉素 ? 头孢曲松 ? 克林霉素 ? 万古霉素 ? 左氧氟沙星 ? 9 氨苄西林 ? 环丙沙星 ? 氨苄西林/舒巴坦 ? 氯霉素 ? 头孢曲松 ? 复方新诺明 ? 10 氨苄西林（AMP） 四环素（TEC）? ? 头孢他啶（CAZ） 头孢丙烯（CPR） ? ? 氯霉素（CHL） 阿齐霉素 ? ? 美罗培南（MEM） ? 试验条件： 质控菌： 培养基：M-H琼脂 大肠埃希菌 ATCC 25922 接种物：菌落悬浮液（0.5麦氏单位） 大肠埃希菌 ATCC 35218（用于测定β-内酰培养条件：35?2?，空气，16-18小时 胺酶） 6 抗菌药物 纸片含量（ug） 判断标准（mm） 备注 阿米卡星（AMC） 30 15-16 庆大霉素（GEN） 10 13-14 氨苄西林（AMP） 10 14-16 氨苄西林/舒巴坦10/10 12-14 （AMP/SUL） 哌拉西林（PIP） 100 18-20 头孢唑啉（CEZ） 30 15-17 头孢克洛（CEC） 30 15-17 头孢丙烯（CPR） 30 15-17 头孢呋辛（CXM） 30 15-17 头孢噻肟（CTX） 30 15-22 头孢他啶（CAZ） 30 15-17 亚胺培南（IPM） 10 14-15 环丙沙星（CIP） 5 16-20 呋喃妥因（NIT） 300 15-16 尿液中的肠杆菌科细菌 加做 复方磺胺甲噁唑1.25/23.75 11-15 （SMZ-TMP） 头孢西丁（FOX） 30 15-17 头孢哌酮/舒巴坦75/35 16-20 （CFP/SUL） 哌拉西林/三唑巴坦100/10 18-20 （PIP/TAZ） 头孢吡肟（FEP） 30 15-17 美罗培南（MEM） 10 14-15 头孢他啶/克拉维酸30/10 见注1。 （CAZ/CLA） 头孢噻肟/克拉维酸30/10 见注1。 （CTX/CLA） 注： 1．大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌要进行ESBLs确证试验测定，当头孢他啶/克拉维酸 与头孢他啶抑菌圈直径相差?5mm者，或头孢噻肟/克拉维酸与头孢噻肟直径相差?5mm者应报告 为产ESBLs，并对所有青霉素类；一、二、三代头孢菌素类抗生素报告耐药。 2．如遇菌血症或无菌体液中分离出奇异变形杆菌时，并当临床医生需要时亦要进行ESBLs的检测。 方法 初筛试验 表型确证试验 培养基 MH琼脂 MH琼脂 抗微生物药头孢泊肟 10μg或 头孢他啶 30μg 物纸片浓度 头孢他啶 30μg或 头孢他啶/克拉维酸 30/10μg 氨曲南 30μg或 和 头孢噻肟 30μg或 头孢噻肟30μg 头孢曲松 30μg或 头孢噻肟/克拉维酸 30/10μg （使用一种以上的药物进行筛选将会（确证试验要求同时做上述四种纸片） 提高检测的敏感性） 接种 同纸片扩散法 同纸片扩散法 孵育条件 同纸片扩散法 同纸片扩散法 7 孵育时间 同纸片扩散法 同纸片扩散法 结果判度 头孢泊肟抑菌圈 ?17mm 2药中任何一个药物，在加克拉维酸后，抑 头孢他啶抑菌圈 ?22mm 菌圈直径与不加克拉维酸的抑菌圈相比， 氨曲南抑菌圈 ?27mm ?5mm者，判定为产ESBL 头孢噻肟抑菌圈 ?27mm 头孢曲松抑菌圈 ?25mm 意味着可疑有ESBL的产生 质控建议 阴性对照： 阴性对照： 大肠埃希菌 ATCC 25922 大肠埃希菌ATCC 25922：加有克拉维酸 （参考质控标准，见表） 的抑菌圈比没有加克拉维酸的抑菌圈? 阳性对照： 2mm。 肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 阳性对照： 头孢泊肟抑菌圈 9-16mm 肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 头孢他啶抑菌圈 10-18mm 头孢他啶/克拉维酸抑菌圈?头孢他啶抑 氨曲南抑菌圈 9-17mm 菌圈5mm 头孢噻肟抑菌圈 17-25mm 头孢噻肟/克拉维酸抑菌圈?头孢噻肟抑 头孢曲松抑菌圈 16-24mm 菌圈3mm ESBLs筛选试验中，肺炎克雷伯菌ESBLs确证试验中，肺炎克雷伯菌（ATCC （ATCC 700603）作为质评菌株；肺炎700603）和大肠埃希菌（ATCC 25922）作 克雷伯菌（ATCC 700603）或大肠埃希为常规质控菌株。 菌（ATCC 25922）作为常规质控菌株。 *常规实验中不推荐对奇异变形杆菌的ESBLs筛选，除非有临床特别要求。 试验条件： 质控菌： 培养基：M-H琼脂 大肠埃希菌 ATCC 25922 接种物：菌落悬浮液（0.5麦氏单位） 铜绿假单胞菌 ATCC 27853 培养条件：35?2?，空气，16-18小时；嗜麦芽窄食单胞 大肠埃希菌 ATCC 35218（用于测定 菌和洋葱伯克霍尔德菌需培养20-24小时。 β-内酰胺酶） 抗菌药物 纸片含量（ug） 判断标准（mm） 备注 阿米卡星（AMK） 30 15-16 庆大霉素（GEN） 10 13-14 哌拉西林（PIP） 100 ?17R ，?18S 铜绿假单胞菌 头孢他啶（CAZ） 30 15-17 16-20 洋葱伯克霍尔德菌 头孢哌酮（CFP） 30 16-20 氨曲南（ATM） 30 16-21 亚胺培南（IPM） 10 14-15 环丙沙星（CIP） 5 16-20 复方磺胺甲噁唑1.25/23.75 11-15 （SXT-TMP） 替卡西林/克拉维酸75/10 ?14R ，?15S 铜绿假单胞菌 （TIC/CLA） 头孢哌酮/舒巴坦75/35 16-20 （CFP/SUL） 哌拉西林/三唑巴坦100/10 ?17R， ?18S 铜绿假单胞菌 （PIP/SUL） 头孢吡肟（FEP） 30 15-17 美罗培南（MEM） 10 14-15 8 16-19 洋葱伯克霍尔德菌 米诺环素 30 15-18 左氧氟沙星（LEV） 5 14-16 注： 1．非发酵细菌属除铜绿假单胞菌、不动杆菌属细菌、嗜麦芽窄食单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌外，均需用稀 释法进行药敏试验。 2．铜绿假单胞菌在治疗过程中易产生耐药，因此在治疗3-4天后需重新进行药敏试验。 3．嗜麦芽窄食单胞菌纸片法药敏只需报告：米诺环素、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑； 洋葱伯克霍尔德菌只报告：头孢他啶、美罗培南、米诺环素、复方磺胺甲噁唑。 试验条件： 质控菌： 培养基：M-H琼脂 金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 接种物：菌落悬浮液（0.5麦氏单位） 大肠埃希菌 ATCC 35218（用于测 培养条件：33-35?（不能超过35?），空气，定β-内酰胺酶） 16-18小时；苯唑西林、万古霉 素结果需24小时观察结果。 抗菌药物 纸片含量（ug） 判断标准（mm） 备注 庆大霉素（GEN） 30 13-14 青霉素（PEN） 10units ?29 S，?28 R 头孢西丁（FOX） 30 金葡菌、路登葡萄球对头孢西丁耐药需向 菌：?20 S，?19 R 临床报告为MR细菌， 其他凝固酶阴性葡萄同时报告万古霉素结 球菌：?25 S，?24 R 果。 氨苄西林/舒巴坦10/10 12-14 （AMP/SUL） 头孢唑啉（CEZ） 30 15-17 头孢呋辛（CXM） 30 15-17 万古霉素（VAN） 30 ?15 S 培养24小时观察结果 红霉素（ERY） 15 14-22 克林霉素(CLI) 2 15-20 复方磺胺甲 噁唑1.25/23.75 11-15 （SMZ-TZP） 磷霉素(FOS) 20 13-15 利福平(RIF) 5 17-19 替考拉宁(TEC) 30 11-13 左氧氟沙星(LEV) 5 14-16 呋喃妥因（NIT） 300 15-16 尿液标本需加做 注： 1．对于MR的葡萄球菌，氨苄西林、头孢菌素类和其他β-内酰胺类抗生素应报告耐药。 2．需进行克林霉素诱导试验（D-试验）检测，若D-试验阳性的葡萄球菌，应报告克林霉 素耐药。 3．葡萄球菌属细菌药敏结果要严格控制在33-35?（不能超过35?）。 4．如出现对万古霉素中度敏感或耐药的菌株需进行MIC测定。 9 抗菌药物 细菌 抑菌圈直径（mm） 备注 金黄色葡萄球菌和抑菌圈直径?19必须报告 路登葡萄球菌 ?19 ?20 苯唑西林耐药，?20报告苯 头孢西丁唑西林敏感。 （30ug） 凝固酶阴性葡萄球抑菌圈直径?24必须报告 菌（除路登葡萄球?24 ?25 苯唑西林耐药，?25报告苯 菌） 唑西林敏感。 * 使用标准纸片扩散法条件，必须培养24小时观察结果，如果18小时出现耐 药可报告结果。读取头孢西丁结果使用反射光。 原理：克林霉素诱导试验是指使用常规药物敏感试验方法对红霉素耐药并对克林 霉素耐药的葡萄球菌属进行的测定，又称为D-试验。 菌株：常规分离的葡萄球菌属细菌。 抗菌药物： 红霉素 15μg 克林霉素 2μg 质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 25923；另外可用内部分离到的D-试验阳性和 阴性的金黄色葡萄球菌。 步骤：（标准纸片扩散法） 1．根据葡萄球菌属细菌纸片扩散法所需的培养基、接种物和培养条件。 2．红霉素与克林霉素纸片边缘到边缘距离为15-26mm。 3．经过培养后，观察克林霉素靠近红霉素纸片处的区域情况。 结果观察：当克林霉素的抑菌圈在靠近红霉素纸片处发生变形，犹如英文字母“D” 时，称为D-试验阳性。 结果报告：当D-试验阳性，需向临床报告克林霉素耐药。 备注：测克林霉素诱导型耐药的D形试验扩大到β溶血链球菌（A、B、C、D群）和来自阴 道及尿的B群链球菌。细节和葡萄球菌的类似。孕妇围产期对B群链球菌预防用药时 选青霉素，氨苄西林，过敏时低危孕妇可用头孢唑林，高危孕妇就要选克林霉素和红 霉素，但最近出现红霉素及克林霉素的耐药株，所以用药前要有这两药的药敏结果。 在美国A群链球菌耐红霉素的有10%，耐克林霉素的有7%，B群链球菌耐红霉素的有 25%，耐克林霉素的有15%。 10 试验条件： 质控菌： 培养基：M-H琼脂 金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 接种物：菌落悬浮液（0.5麦氏单位） 培养条件：35?2?，空气，16-18小时；万古 霉素24小时观察结果。 抗菌药物 纸片含量（ug） 判断标准（mm） 备注 庆大霉素（GEN） 120 7-9 氨苄西林（AMP） 10 ?16R， ?17S 环丙沙星（CIP） 5 16-20 万古霉素（VAN） 30 15-16 红霉素（ERY） 15 14-22 呋喃妥因（FUR） 300 15-16 替考拉宁（TEC） 30 11-13 VRE增做如下药敏： 氯霉素（CHL） 30 13-17 四环素（TEC） 30 15-18 磷霉素（FOS） 20 13-15 利福平（RIF） 5 17-19 注： 1．当进行万古霉素对肠球菌药敏试验时,药敏平皿应培育24小时,并用透射光观察结果。 2．当万古霉素抑制圈内出现薄雾状或任何生长现象均表示耐药，如出现中介值和耐药菌株 需进行VRE菌株确认。 试验条件： 质控菌： 培养基：5%羊血M-H琼脂 肺炎链球菌 ATCC 49619 接种物：菌落悬浮液（0.5麦氏单位） 培养条件：35?2?，5%CO，20-24小时。 2 抗菌药物 纸片含量（ug） 判断标准备注 （mm） 青霉素 1 ug苯唑西林 ?20 见注1。 红霉素 15 16-20 克林霉素 2 16-18 左氧氟沙星 5 14-16 头孢丙烯 30 15-17 PISP、PRSP需用E-test 方法（增做如下药敏）： 青霉素 见注2 头孢曲松 ?0.5 ug/ml 脑脊液标本 ?1 ug/ml 非脑脊液标本 万古霉素 ?1 ug/ml 美罗培南 ?0.25 ug/ml 11 注： 1．当苯唑西林抑菌圈直径?19mm时，需加做青霉素E-test，确证PSSP、PISP、 PRSP。 2．青霉素MIC：?0.06 ug/ml PSSP 0.125-1 ug/ml PISP ?2 ug/ml PRSP 试验条件： 质控菌： 培养基：5%羊血M-H琼脂 肺炎链球菌 ATCC 49619 接种物：菌落悬浮液（0.5麦氏单位） 培养条件：35?2?，5%CO，20-24小时。 2 抗菌药物 纸片含量（ug） 判断标准（mm） 备注 青霉素（GEN） 10units ?24 红霉素（ERY） 15 16-20 克林霉素（CLI） 2 16-18 左氧氟沙星（LEV） 5 14-18 头孢丙烯（CFP） 30 15-17 头孢曲松（CRO） 30 ?24 β-溶血 25-26 α-溶血 万古霉素(VAN) 30 ?17 注： β-溶血链球菌（A、B、C、G群）和来自阴道和尿液的B群链球菌应测红霉素诱导耐药试验（D-试验）。若D-试验阳性应报告临床克林霉素耐药。（链球菌 D-试验方法同葡萄球菌相同，红霉素纸片与克林霉素纸片边缘12mm。） 试验条件： 质控菌： 培养基：M-H琼脂 大肠埃希菌 ATCC 25922 接种物：菌落悬浮液（0.5麦氏单位） 大肠埃希菌 ATCC 35218（用于测 培养条件：35?2?，空气，16-18小时 定β-内酰胺酶） 抗菌药物 纸片含量（ug） 判断标准 备注 氨苄西林（AMP） 10 14-16 氨苄西林/舒巴坦10/10 12-14 （AMP/SUL） 头孢曲松（CRO） 30 14-20 注2 12 环丙沙星（CIP） 5 16-20 氯霉素（CHL） 30 13-17 复方磺胺甲噁唑（SXT） 1.25/23.75 11-15 注： 1. 对于肠道内沙门菌、志贺菌只需做氨苄西林、一种喹诺酮类、复方磺胺甲噁 唑，并作为常规报告。但对于肠道外沙门菌需做氯霉素和一种三代头孢菌 素，并报告。 2. 对于<16岁骨骼系统未发育完全的小儿应报头孢曲松的药敏结果，不报环丙 沙星和氯霉素。 试验条件： 质控菌： 培养基：嗜血杆菌试验培养基(HTM) 流感嗜血杆菌 ATCC 49247 接种物：菌落悬浮液（0.5麦氏单位） 流感嗜血杆菌 ATCC 49766 培养条件：35?2?，5%CO，16-18小时。 大肠埃希菌ATCC35218(测试阿西2 林/克拉维酸时) 抗菌药物 纸片含量（ug） 判断标准（mm） 备注 氨苄西林（AMP） 10 19-21 头孢他啶（CAZ） 30 ?26 氯霉素（CHL） 30 26-28 10 ?20 美罗培南（MEM） 30 26-28 四环素（TEC） 30 15-17 头孢丙烯（CPR） 阿齐霉素 15 ?12 1. 美国NCCLS药敏规则指出，耐苯唑西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）或耐苯唑 西林的凝固酶阴性的葡萄球菌（MRCNS）应报告对所有头孢类和其他β-内酰 胺类如阿莫西林/克拉维酸，氨苄西林/舒巴坦耐药。 2. 产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的革兰阴性杆菌，应报对所有三代头孢菌素 和氨曲南耐药。 3. 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测： 用30μg头孢西丁纸片扩散法确证。金黄色葡萄球菌的头孢西丁抑菌圈直径 ?19mm，应报告苯唑西林耐药，头孢西丁抑菌圈直径?20mm，报告苯唑西林敏感；凝固酶阴性葡萄球菌的头孢西丁抑菌圈直径?24mm，应报告苯唑西林耐药，头孢 西丁抑菌圈直径?25mm，报告苯唑西林敏感。 13 4. ESBLs检测的筛选和确诊试验： CLSI/NCCLS规定肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌 ESBLs的筛选试验和确证试验（表12）。目前，NCCLS推荐的纸片扩散法或MIC法是世界许多国家用于检测ESBLs的表型标准方法。这两个方法仅适用于肺炎克雷伯 菌、产酸克雷伯菌、大肠埃希菌及奇异变形杆菌。当菌株产ESBLs时，不论其体外药敏试验是否敏感，均应报告为对所有超广谱头孢菌素和氨曲南耐药。 5. ESBLs菌株的报告 , 凡ESBLs菌株必须向临床报告。 , 应注明ESBLs菌株对所有的青霉素类、头孢菌素类抗生素和氨曲南耐药。 , 如实报告头孢哌酮/舒巴坦（SCF）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、替卡西林 /克拉维酸（TIM）和亚胺培南（IPM）药敏结果。 1. 敏感（S）：表示被测细菌引起的感染，除禁忌症外，可用该抗生素常用剂量 而达到治疗目的。 2. 中介（I）：表示被测菌株可通过剂量受到抑制，或在药物被生理性浓集的部 位受抑制。由于微小的技术因素失控可以对结果解释错误，所以这范围只是 抑菌环直径介于敏感和耐药之间的缓冲域。抑菌环落入中介范围，其意义不 明确，如果没有其它可以替代的药物，应重复或再以稀释法测定MIC。 3. 耐药（R）：被测菌不能被该抗生素的常用剂量在组织内或血液中的浓度达到 抑制作用，且不管其剂量大小或细菌所在部位。 肠杆菌科（任何亚胺培南-I或R 阿米卡星-R 种） 氟喹诺酮类-R 大肠埃希菌 氨苄西林-S ESBL确认阳性 克雷伯菌属 氨苄西林-S ESBL确认阳性 嗜麦芽窄食单胞碳青霉烯类-S 复方磺胺甲噁唑-R 菌 肠球菌属 万古霉素-R 金黄色葡萄球菌 万古霉素-I或R 14 凝固酶阴性葡萄万古霉素-I或R 球菌 肺炎链球菌 氟喹诺酮类-R 青霉素-R c万古霉素-NS 3代头孢菌素-R cß-溶血链球菌 氨苄西林或青霉素-NS c万古霉素-NS 草绿色链球菌 万古霉素-NS a. 当表中所列结果来自个别患者分离的细菌，应用以下一条或多条予以证实： 1. 确保不常见结果不是因为抄写错误、污染或用了有缺陷的试剂板、平皿或卡片。 2. 检查患者过去的结果，确认是否是曾经分离过的菌株和已经得到证实的。 3. 确认菌株的鉴定正确性。 4. 重复药敏试验并确认结果，有时改换一种试验方法重复结果是有帮助的。 5. 对于表中某些抗生素只有敏感判断标准的菌株，如果表现出不敏感（表中列为NS）, 万古霉素中介度或耐药的葡萄球菌： 5.1 确认菌株鉴定正确 5.2 确认药敏试验结果 5.3 保留菌株 5.4 将菌株送参考实验室，并用NCCLS参考稀释方法试验 b. 当表中所列结果来自个别患者分离的细菌，如果不是已知耐药规则中常见的，应该考虑 按?类中所列步骤进行验证。 c. 对这些抗生素/细菌组合，到目前为止，还未有耐药记载。 1. 培养基的质控 根据《中华人民共和国卫生行业标准WS/T232－2002商业性微生物培养基质量检验规程》要求，常规使用培养基只需对淋球菌培养基进行室内质控（质控菌 株使用标准菌株：淋病奈瑟菌43069或43070进行生长试验，奇异变形杆菌43071或表皮葡萄球菌12228做部分抑制试验）即可。 血平板、麦康凯平板、伊红美兰平板、SS平板、沙保罗平板、营养肉汤、 结核分枝杆菌培养基、支原体培养基等只需商家提供质控证明即可。 购买的培养基，必须检查每批培养基，包括：平板的裂纹、充碟均匀、培养 基裂纹、溶血、冷冻、过多的气泡或者斑点、污染的检查。 凡购买的培养基，生产厂商必须提供质控在控证明 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 。 2. 质控菌株的保存及其工作质控菌株的使用 1）质控菌株的保存 （1）培养基：无菌脱纤维羊血、脱脂牛奶、大豆－胰蛋白消化肉汤（TSB）＋10－15％甘油 15 （2）浓度：0.5个麦氏单位、淋球菌1.0个麦氏单位、0.5－1.0ml/支，转种一次保证足够一年的使用量。 （3）温度：<-70?保存 （4）溶解转种后丢弃，处理（送高压蒸汽灭菌） 2）工作质控菌株 最多下传三代，用琼脂斜面或平板保存于2－8?，可用四周，每月启用一支新标准菌株。 3. 鉴定仪器及其配套试剂的质控 鉴定仪器及其配套试剂的质控严格按照说明书进行。 4. 药敏纸片质控 1） 质控菌株应按标准方法与临床标本分离菌同步进行药敏试验。 2） 更换抗生素纸片或培养基时必需用相应质控菌株测试。 采用药敏K-B法进行室内质控。所有抗生素纸片在实行常规监控（一周一次 质控）前应用质控菌株连续监测20-30天，对每种药，每种菌，连续20次或30 次试验中，结果不超出质控范围1个或3个，可转为一周一次质控的方法。只要 抑菌圈直径超出可接受范围都必需校正。当失控原因不明时，可用相应质控菌株 连续监测5天，如果全部达到可接受范围，可恢复一周一次质控。纸片法药敏标 准菌株质控范围，见表19。 3） 使用质控菌株要求包括主要的菌属和全部的抗生素谱，所以标准菌株要包括： 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌（产ESBL菌株）、粪肠球菌、肺炎链球菌。 5. 鉴定血清和鉴定用试剂和纸片 鉴定血清质控每个季度进行一次 鉴定用试剂质控每天进行，包括触酶、氧化酶、凝固酶、革兰染液和抗酸染 液。 鉴定用纸片在有效期内每个月进行一次，包括：奥普托欣、杆菌肽、β-内 酰氨酶、?因子、?因子、?＋?因子。 6. 药敏纸片室内质控失控报告需要包含几个方面： 1）失控项目名称 16 2）记录此次质控使用的药敏纸片、MH培养基、盐水等的批号 3）记录失控值、失控菌株和孵箱温度 4）分析失控原因：药敏纸片（效期和药效）、培养基（效期和培养基厚度等）、 比浊仪、孵箱温度、标准菌株污染或者变异、人为因素等，药敏试验过 程涉及到的因素都应在分析范围之内。 5）纠正措施 6）采取纠正措施后的结果 7）最后的结论及其经验教训，以后应该注意的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 。 8）操作者、室内组长、科室主任签名和日期。 , 金黄色葡萄球菌（ATCC 25923） , 大肠埃希菌 （ATCC 25922） , 大肠埃希菌 （ATCC 35218） , 铜绿假单胞菌 （ATCC 27853） , 肺炎链球菌 （ATCC 49619） , 粪肠球菌 （ATCC 29212） 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 铜绿假单胞菌 肺炎链球菌 抗菌药物 纸片含量 ATCC 25922 ATCC 25923 ATCC 25923 ATCC 49619 阿米卡星 30ug 19-26 - 18-26 - 庆大霉素 10ug 19-26 19-27 16-21 - 青霉素 10units - 26-37 - 24-30 苯唑西林 1ug - - - 8-12 氨苄西林 10ug 16-22 - - - 优立新 10/10ug 20-24 29-37 - - 哌拉西林 30ug 24-30 - 25-33 - 头孢唑啉 30ug 23-29 29-35 - - 头孢克洛 30ug 23-27 - - - 头孢呋辛 30ug 20-26 27-35 - - 头孢噻肟 30ug 29-35 - - - 头孢他啶 30ug 25-32 - 22-29 - 头孢哌酮 75ug - - 23-29 - 头孢曲松 30ug - - - 30-35 头孢吡肟 30ug 29-35 - 24-30 - 头孢丙烯 30ug 21-27 - - 25-32 17 头孢西丁 30ug 23-29 23-29 - - 氨曲南 30ug - - 23-29 - 亚胺培南 10ug 26-32 - 20-28 - 利福平 5ug - 26-34 - - 环丙沙星 5ug 30-40 - 25-33 - 万古霉素 30ug - 17-21 - 20-27 红霉素 15ug - 22-30 - 25-30 氯霉素 30ug - - - - 克林霉素 2ug - 24-30 - 19-25 复方新诺明 1.25/23.75ug 24-32 24-32 - - 呋喃妥因 300ug 20-25 18-22 - - 替考拉宁 30ug - 15-21 - - 替卡西林/克拉维酸 75/10ug - - 20-28 - 哌拉西林/三唑巴坦 100/10ug 24-30 - 25-33 - 磷霉素 200ug - 25-33 - - 美罗培南 10ug 28-34 - 27-33 - 左氧氟沙星 5ug - 25-30 - 20-25 大肠埃希菌 粪肠球菌 抗菌药物 纸片含量 ATCC 35218 ATCC 29212 阿莫西林/克拉维酸 20/10ug 18-22 - 氨苄西林 10 ug 6 - 氨苄西林/舒巴坦 10/10ug 13-19 - 哌拉西林 100 ug 12-18 - 哌拉西林/三唑巴坦 100/10ug 24-30 - 替卡西林/克拉维酸 75/10ug 21-25 - 庆大霉素 120 ug - 16-23 流感嗜血杆菌 抗菌药物 纸片含量 ATCC 49247 氨苄西林（AMP） 10ug 13-21 头孢他啶（CAZ） 30 ug 27-35 氯霉素（CHL） 30ug 31-40 10 ug 20-28 美罗培南（MEM） 30ug 14-22 四环素（TEC） 30ug 20-27 头孢丙烯（CPR） 阿齐霉素 15ug 13-21 1. 培养基的质量,如PH、厚度、硬度和表面湿度等。对每批商品化或自配MH 18 琼脂必须用标准质控菌株进行检测，合格后方能使用。 2. 药敏纸片的质量、含药量和保存方式。 3. 接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于麦氏标准比浊管的正 确使用和保存。 4. 试验操作质量。 5. 孵育条件、温度和时间。 6. 抑菌圈测量工具的精度。 7. 质控标准菌株本身的药敏特性是否合格，有无变异。 19