杭州市中医院检验科微生物标本采集
操作规程
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1.1基本原则
1、发现感染应及时采集微生物标本作病原学检查,三级医院微生物标本送检率不应低于60%。
2、尽量在抗菌药物使用之前采集标本。
3、标本采集时应严格无菌操作,减少或避免机体正常菌群及其它杂菌污染。
4、标本采集后应立即送至细菌室。床旁接种可提高病原菌检出率。
5、以棉拭子采集的标本如咽拭子、肛拭或伤口拭子,宜插入运送培养基送检。
6、送检标本应注明姓名、床号、标本来源、检验目的和标本采集具体时间,使细菌室能准确及时接种相应的培养基和适宜的培养环境,提高阳性检出率。
1.2血液与骨髓的送检方法
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目前标本主要问
题
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:
1、 标本初次送检率和多次连续送检率太低
2、 标本采集不能严格无菌,操作不合格的多
3、 医生申请只做普通培养,没有做到需氧厌氧同时培养。
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标本采集质量直接关系到血液培养的阳性率,而标本采集质量受多种因素影响,如采血的时间、部位、容量和采血的频率,因此严格掌握每种因素都可提高血液培养的阳性率。
1、一般原则:在出现临床症状后应尽快抽血样作培养,最好在发热初期、高热或寒战时,原则上应选择在抗菌药物应用之前,对已应用药物而病情不允许停药的患者应在下一次用药前采血。
2、采血部位:肘静脉。疑似细菌性心内膜炎时,以肘动脉或股动脉采血为宜,切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本。
3,采血最佳时间与频率:急性败血症应在治疗前24小时内抽血3次或者更多次,并在不同部位,如左右手臂或颈部,分别做厌氧、需氧培养以及内毒素、降钙素原检测;急性心内膜炎在治疗前1-2小时内分别在3个不同部位抽血样;怀疑伤寒病人,在病程第1-2周内采静脉血液;肺炎链球菌在寒战、高热或者休克时;布鲁杆菌感染除在发热期采血,还要多次采血,一般是24小时抽3-4次;分枝杆菌感染早期采血样阳性率高。怀疑菌血症因尽早采血,体温上升阶段采血可提高阳性率,但要防止因等待而延误时机,对已用抗菌药物而不能停药者,可在下次用药前采血。对疑为伤寒病人,在第1-3周内采集骨髓是最佳时间,在病灶或髂前(后)上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml 作细菌培养。
4、采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养瓶前,认真识别相应颜色的瓶,并仔细检查培养瓶有无变色或混浊。过火消毒针头,血培养瓶撕掉塑料盖后,瓶口不是无菌部位必须消毒。消毒不能用碘酒消毒而是75%酒精消毒。同时做需氧和厌氧培养时,应先将标本接种到厌氧瓶中,然后再注入需氧瓶,严格防止将空气注入厌氧瓶。
5、每次采血量成人5,10ml,婴幼儿1,2ml,培养基与血液之比以10:1为宜,以稀释血液中的抗生素。
6、血培养瓶务必立即送至临床微生物室,如因故不能立即送检时,应将已接种的瓶放在室温,切勿放在冰箱存放。
7、其他无菌体液:胸腹水、脑脊液、心包积液、胆汁等穿刺取得后都可按照无菌操作注入血培养瓶内送检。
1.3尿液的送检方法
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目前标本存在的主要问题:
1、 不能严格做到消毒后取中段洁尿,常培养三种以上的细菌,几乎都是污染所至。
2、标本送检不及时,尿杯运送时封闭不严实。
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1、中段尿:女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口;男性须翻转包皮冲洗,用0.1%新洁尔灭消毒尿道口,灭菌纱布擦干后,收集标本。
2、导尿管导尿采样可减少污染。对留置导尿者,可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁,用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液;或拔去闭式引流的集尿袋,弃取导尿管前段尿液,留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。不可从集尿袋的下端管口留取标本。
3、送检标本以晨起第一次尿为宜。
4、 室温下尿标本耽搁稍久可导致尿内细菌浓度明显增加而影响病原菌与污染菌的区分。不能立即送检者,可暂存4?冰箱,不得加消毒剂或防腐剂。
1.4痰标本的送检方法
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目前标本存在的主要问题:
1、 病人吐痰液前清水漱口不够,标本携带口腔污染菌太多。
2、 不能做到咳深部的痰,常有口水痰的标本。
3、 三次痰送检不是一次性分三份取标本,而是分不同时段留取三次合格痰标本
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1、咳痰:清水反复漱口后用力咳痰,从呼吸道深部咳出新鲜痰液于无菌容器送检。痰量极少者可用45?10%氯化钠溶液雾化吸入导痰。
2、 对咳嗽乏力或昏迷病人,可用吸痰管经鼻腔或口抵达气管腔内吸引痰液。用纤维支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌,但不能完全避免咽喉部正常菌群感染。
3、 肺部感染伴人工气道如气管切开或气管插管患者,可用吸痰管经人工气道估插至叶支气管水平吸引痰液。
4、 婴儿肺结核作分枝杆菌检查用胃管取痰最佳。
5、 痰标本不能及时送检者,可暂存4?冰箱。室温下耽搁数小时可使定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率明显降低。
1.5化脓和创伤标本的送检方法
1. 开放性感染和已溃破的化脓灶:标本采集前先用灭菌生理盐水冲洗表面污染菌,用灭菌拭子采取脓液及病灶深部的分泌物;如慢性感染,污染严重,很难分离到致病菌,可取感染部位下的组织,研磨成组织匀浆接种于适宜的培养基。
2. 闭锁性脓肿:
(1) 皮肤化脓和皮下软组织化脓感染:用2.5%-3%碘酊和75%酒精消毒周围皮肤,穿刺抽取脓汁及分泌物送检,也可在切开排脓时,以灭菌注射器或棉拭子采取。
(2) 淋巴结脓肿:结淋巴结穿刺术取脓液,盛于灭菌容器内送检。
(3) 乳腺脓肿:在手术引流时采集脓液,盛于灭菌容器内送检。也可作脓肿穿刺,采集脓液标本检查。
(4) 肺脓肿:体位引流使病肺处于高处,引流的支气管开口向下,痰液顺体位引流至气管咳出;也可在纤维支气管镜检或手术时采集。
(5) 肝脓肿:在手术引流时采集脓液,盛于灭菌容器内送检。也可作脓肿穿刺,采集脓液标本检查。
(6) 胆囊炎:十二指肠引流术采集胆汁:标本分三部份,即来自胆总管、胆囊及肝胆管;手术时采集;在行胆囊及胆管手术时,可从胆总管、胆囊直接采取;胆囊穿刺法:行胆道造
影时采集胆汁。
(7) 脑脓肿:在手术引流时采集脓液,盛于灭菌容器内送检。也可作脑脓肿穿刺采集脓液标本送检。
(8) 肾周脓肿:在手术引流时采集脓液,盛于灭菌容器内送检。也可作肾周穿刺采集脓液标本检查。
(9) 阑尾脓肿:在手术时采集脓液,盛于灭菌容器内送检。
(10) 胸腔脓肿(脓胸):以胸膜腔穿刺术抽取脓液,盛于灭菌容器内送检。
(11) 腹腔积液:经腹腔穿刺术抽取脓液,盛于灭菌容器内送检。
(12) 心包积液:在手术引流时采集脓液,盛于灭菌容器内送检。也可作心包穿刺采集脓液标本送检。
(13) 盆腔脓肿:已婚妇女可经阴道后窟窿切开引流或穿刺采集脓液检查;也可在肛镜暴露下经直肠穿刺或切开引流采集脓液标本检查。
(14) 关节腔积液:采用膝关节腔穿刺术取关节液。留于灭菌容器内送检。
(15) 肛周脓肿:在患者的皮肤和黏膜表面,先用碘酊消毒,然后用75%酒精脱碘,再用灭菌干燥注射器穿刺抽取,将采集的标本置于灭菌容器中。疑为厌氧菌感染时,应作厌氧培养,取出标本后应将注射器内空气排空,同时将针头插入胶塞内,以防空气进入。
3 注意事项:
(1) 尽可能在用药前采集标本,如患者在采集标本前已用药,请在检验申请单上注明,检验人员可在培养基内加入相应拮抗物,以利于提高阳性检出率。
(2) 采集标本时应注意脓汁及分泌物的性状、色泽及气味,为分离鉴定致病菌提供依据。
(3) 疑有某种细菌感染,若该细菌对干燥敏感,用棉拭子采集标本后,应立即放入液体培养基内;或采标本前先将棉拭子沾少许肉汤以保持标本湿度。
(4) 不能立即送检的标本,应放4?保存;培养淋病奈瑟氏菌和脑膜炎奈瑟氏菌的标本除外。
(5) 深部脓肿常由包括厌氧菌在内的混合细菌感染所致,采集标本应遵守厌氧菌感染标本的采集原则。
1.6粪便的送检方法
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目前标本送检存在主要问题:
1、 挑取部位不符合要求
2、运送器皿不符要求
1. 采集时间:
(1) 采样原则:腹泻病人应在急性期采集,以提高检出率,亦最好在用药之前。
(2) 沙门氏菌感染、肠热症在2周以后;胃肠炎病人在急性期、早期采集新鲜粪便。
2. 采集方法:
(1) 自然排便采集法:挑取有脓血、黏液部分的粪便2~3g(液状粪便则取絮状物),盛于蜡纸袋内送检。
(2) 直肠拭子法:对不易获取粪便者或婴幼儿,可用肛拭采集。将拭子前端用无菌甘油水湿润。然后插入肛门约4,5cm(幼儿约2,3cm)处,轻轻旋转擦取直肠表面黏液后退出,置运送培养基内送检。
3. 注意事项:
(1) 虽粪便含有多种杂菌,但仍应尽量采用无菌容器。
(2) 为提高检出率,要采集新鲜粪便作培养。
(3) 腹泻病人应尽量在急性期采集标本(3天以内),以提高阳性率。
(4) 标本最好在用药前采集。
(5) 用于厌氧培养的标本应尽量避免与空气接触,最好在床边接种。
1.7生殖道标本送检
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目前标本培养存在问题:
1、怀疑淋病患者,最好同时做衣原体检查,因为临床同时感染的情况很常见,淋病培养阳性的标本要做B-内酰胺酶检测,因为目前淋球菌的耐药率逐渐增加。
2、对于怀疑非淋病患者,在做支原体培养的同时要申请普通细菌培养,因为常有细菌感染支原体的结果,往往需要再次采集标本,带来麻烦。
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1、男性分泌物:清洗尿道口,并用无菌纱布或者棉球擦拭,采取尿道口溢出的脓性分泌物或用专用拭子插入尿道内2-4厘米取分泌物。如无脓液溢出,可从阴茎的腹面向龟头方向按摩,促使分泌物溢出。
2、阴道分泌物:用窥器扩张阴道,用灭菌拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或者后穹隆分泌物培养。
3、宫颈分泌物:用窥器扩张阴道,先用灭菌棉球擦取宫颈口分泌物,再用灭菌棉拭子插入宫颈管2厘米处采集分泌物,转动并停留10-20秒钟,让拭子充分吸附分泌物,再将棉拭子置入灭菌试管内送检。阴道内有大量正常菌群存在,采取宫颈标标本应避免触及阴道壁。
4、前列腺按摩液:清洗尿道口,冲洗尿道膀胱,从肛门用手指按摩前列腺,使前列腺溢出,用无菌容器收集。
5、精液 受检者应在5天以上未排精,清洗尿道口,采用手淫或体外排精法,射于无菌容器内及时送检。
1.8咽拭子、口腔拭子的送检
1、病人清水漱口后,由检查者将其舌外拉时悬幽垂尽可能向外牵引,棉拭子越过舌根到咽后壁或悬幽垂的后侧,反复擦拭数次,插入运送培养基。棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液。
2、 对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病,用棉拭子在病灶部位擦拭数次即可。