铁皮石斛化学成分研究
一、前言
1、药材现状:
铁皮石斛( Dendrobium officinale Kimura et Migo)又名铁皮兰、黑节草,系兰科植物铁皮石斛的新鲜或干燥茎,分布于安徽、浙江、福建、广西和云南等
地,生于树干或岩石上。现已通过人工组培方法,大田栽培获得成功,近年在浙江、云南等地已形成较大种植规模。铁皮石斛收载于历版《中国药典》,在《中国药典》2010 年版以前均列于石斛项下,为石斛的来源之一。因石斛药材品种多,来源复杂,性状和质量差异较大,铁皮石斛的性状、化学成分等与金钗石斛、马鞭石斛等均不同,如金钗石斛含石斛碱类成分而铁皮石斛无; 金钗石斛和马鞭石斛均有苦味,铁皮石斛味淡,嚼之有黏性; 金钗石斛与马鞭石斛直径较粗,铁皮石斛直径细小; 金钗石斛和马鞭石斛一般只作黄草使用,价格便宜,而铁皮石斛加工成价格昂贵的枫斗,故于2010 年版《中国药典》将铁皮石斛从石斛中分列出来,单列为一个品种。近代研究表明,铁皮石斛具有抗肿瘤、降血糖、抗氧化等作用,在治疗胃肠道疾病和增强免疫等方面也具有较好疗效[ 1-3 ]。通过查阅文献,我们发现铁皮石斛化学成分的研究基础非常薄弱,未有系统研究铁皮石斛与非铁皮石斛在化学成分方面的差异,故有必要对其区别性成分进行系统研究。
2、化学成分研究:
从铁皮石斛中分离得到了20个化合物,分别鉴定为3, 4′2 -二羟基-5-甲氧基联苄(1) ,二氢白藜芦醇(2) , dendromoniliside E (3) , denbinobin (4) , 2, 4, 7-三羟基29, 10-二氢菲(5) ,钩状石斛素(6) , ( - ) -loliolide (7) ,腺苷(8) ,尿苷(9) ,鸟苷(10) ,蔗糖(11) , 52羟甲基糠醛(12) ,反式阿魏酸二十八烷基酯(13) ,对羟基反式肉桂酸三十烷基酯(14) ,对羟基顺式肉桂酸三十烷基酯(15) ,胡萝卜苷(16) ,β2谷甾醇(17) ,十六烷酸(18) ,三十一烷醇(19)及十七烷酸(20)。[ 4 ]化合物1~20均为首次在铁皮石斛中分离得到。其中化合物1-10的化学结构式见图(1)
图(1) 化合物1~10的结构式
二、实验仪器与材料
(1)药材
药材于2006年采自于浙江省义乌市,由中国医学科学院药用植物研究所郭顺星研究员鉴定为铁皮石斛D. candidum。
(2)实验仪器与试剂
Perkin Elmer 341 旋光仪; Inova 501 及VarianUnity 600型核磁共振仪( TMS内标) ; 质谱仪(AGZAB 2F型质谱仪) ;Waters Pre LC, 2487双波长检测
器;制备色谱柱为Waters SymmetryPrep C18 column(718 mm ×300 mm, 5μm) ;柱色谱用硅胶(青岛海洋化工厂) ; GF254和HF254薄层板(烟台汇友硅胶开发有限公司) ; Sephadex LH220 和Sephadex G225( Pharmacia) ; HP2MGL 型大孔树脂(三菱) ;色谱纯试剂为Burdick&Jackson;实验所用试剂分析纯试剂均为北京化工厂生产。药材于2006年采自于浙江省义乌市,由中国医学科学院药用植物研究所郭顺星研究员鉴定为铁皮石斛D. candidum。
挥干溶剂
三、实验步骤与结果
干燥的铁皮石斛药D.candidum 2.6 kg粉末
8倍量乙酸乙酯回流提取3次,提取时间分别为1.5, 1, 1 h
提取液
药渣
用95%乙醇回流提取1遍, 70%乙醇回流提取2遍,合并提取液减压浓缩
减压浓缩
乙酸乙酯提取物57g
(下见流程图2)
乙醇提取物350g
混悬于水中,依次用石油醚、氯仿及正丁醇萃取(下见流程图3、4、5)
石油醚萃取物20 g,氯仿萃取物20 g,正丁醇萃取物70 g。
流程图1
乙酸乙酯提取物57g
硅胶柱( 100 ~200目)进行分离,用石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱
13个流分( Fr. 1~13)
Fr.4
Fr.3
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
化合物13(60mg)
化合物19(50mg) 和20 (30mg)
Fr.5
重结晶
化合物17 (4g)
Fr.6
硅胶柱色谱(300~400目) ,流动相用石油醚-丙酮梯度洗脱
6 个亚流分( Fr.6a-Fr.6f)
流程图2
Fr.6f
Fr.6d
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
化合物14(20 mg)
Fr16b′
Fr16a′
重结晶
化合物4(1mg)
制备HPLC (53%甲醇,流速3 mL·min- 1 )
化合物1(28mg)
Fr.7
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
Fr.7e
5个亚流分( Fr.7a~Fr7e)
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
化合物15(10mg)
流程图2
Fr.9
硅胶柱色谱(300~400目) ,
流动相用石油醚-丙酮梯度洗脱
Fr.9b
6 个亚流分( Fr.9a-Fr.9f)
制备HPLC(37%甲醇; 流速3 mL ·min- 1 )
化合物2(4mg)和化合物5(5mg)
Fr.9a
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化, 制备HPLC ( 37% 甲醇,流速3 mL ·min- 1 )
Fr.12
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 柱色谱
化合物7(8mg)
Fr.13
通过制备HPLC ( 30 min 内由
20%甲醇梯度洗脱至80%甲醇;流速3 mL·min- 1 )
2个亚流分( Fr.12a-Fr.12b)
Fr.12b
通过制备HPLC (30 min内由10%甲醇梯度洗脱至80%甲醇;流速3 mL ·min- 1 )
化合物3(4.6mg)
化合物9(3.5mg)
流程图2
石油醚萃取物20 g,
硅胶柱(100~200目)进行分离,用石油醚2乙酸乙酯系统梯度洗脱
5个流分( Fr. 1~Fr.5)
Fr.5
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
Fr. 2
Fr.3
化合物16(50 mg)
重结晶
流分
化合物17( 2.5 g)
化合物18 ( 2 g)
流程图3
Fr.1
氯仿提取物20 g
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
硅胶柱(300~400目)进行分离,用氯仿2甲醇系统梯度洗脱
化合物17(150 mg)
10 个流分( Fr. 1~Fr.10)
流程图4
Fr.6
Fr.2
通过制备HPLC(28%甲醇; 流速4 mL ·min- 1 )
通过制备HPLC(10%甲醇,流速3 mL ·min- 1 )
化合物6(20mg)
化合物12(5.5 mg)
Fr.9
Fr.7
通过制备HPLC (15%甲醇;流速3 mL·min- 1 )
Sephadex LH-20 (氯仿-甲醇1 ∶1 ) 纯化
化合物8( 3.5 mg)
化合物16 (200 mg)
Fr.10
重结晶
化合物11(300 mg)
流程图4
正丁醇萃取物70 g
用水超声溶解,过滤,取滤液上HP2MGL 型大孔树脂柱,依次用水、10%乙醇、30%乙醇和60%乙醇进行洗脱,每个梯度洗脱至洗脱液颜色变浅,减压回收溶剂,
60%乙醇洗脱物10 g
10%乙醇洗脱物3 g
30%乙醇洗脱物10 g
水洗脱物45g
通过制备HPLC (15min由10%甲醇梯度洗脱至20%甲醇,后15 min由20%甲醇梯度洗脱至50%甲醇;流速3 mL·min- 1 )
化合物10 (6.5 mg)和化合物8 (20 mg)
流程图5
四、化合物结构鉴定
化合物1 无色针晶; 1H-NMR (MeOD, 500MHz) δ: 6.96 ( 2H, d, J = 8.5 Hz, H-2′, 6′) , 6.67(2H, d, J = 8.5 Hz, H-3′, 5′) , 6.21 (1H, br s, H-2) ,6.20 (1H, br s, H-6 ) , 6.17 ( 1H, d, J = 2.0 Hz, H-4) , 3.69 ( 3H, s, OCH3-5) , 2.74 ( 4H, m, H-α,α′) 。以上波谱数据与文献[ 5 ]报道基本一致,故确定其为3, 4′-二羟基-5-甲氧基联苄。
本文档为【铁皮石斛研究】,请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑,
图片更改请在作品中右键图片并更换,文字修改请直接点击文字进行修改,也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享,如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服,我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生,若发现您的权利被侵害,请联系客服邮件isharekefu@iask.cn,我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权,请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传,仅限个人学习分享使用,禁止用于任何广告和商用目的。