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人类乳头瘤病毒(HPV)的检测方法.doc

人类乳头瘤病毒(HPV)的检测方法

王静美
2017-10-26 0人阅读 举报 0 0 暂无简介

简介:本文档为《人类乳头瘤病毒(HPV)的检测方法doc》,可适用于综合领域

人类乳头瘤病毒(HPV)的检测方法人类乳头瘤病毒(HPV)的检测方法现代预防医学年第卷第期ModemPreventiveMedicine,Vo,NO文章编号:()中图分类号:R文献标识码:A人类乳头瘤病毒(HPV)的检测方法井明霞,陈继明,郭晓青,张金莉,芮东升|美链人粮赢舞窀甄瑰埝菠毡|宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一占女性生殖系统恶性肿瘤的半数以上严重威胁着妇女的健康全世界每年大约有万人患病中国新发病例约计万,占目前已发现的所有女性肿瘤的是仅次于乳腺癌而引起妇女癌症相关死亡的重要原因宫颈癌的发病机理目前尚不清楚但已有很多研究证明,的宫颈癌组织中可检出人乳头瘤病毒(humanpap~omavirus,HPV)目前,已经明确HPV感染为宫颈癌前病变和浸润性宫颈癌发生的必要条件大量研究资料表明,HPV与宫颈癌及癌前病变密切相关,高危型HPV(HRHPV)感染与宫颈癌关系最为密切随着病变程度的加重HPV的检出率也逐渐增高『所以,许多专家提出将HPV的检测作为宫颈癌的一种筛查手段目前,针对HPVDNA检测作为宫颈癌原始筛查方法以及与细胞学联合在筛查中的意义的研究报道较多~本文将就HPV检测方法的相关内容进行小结重点介绍目前应用最为广泛的PCR法和杂交捕获试验由于HPV至今尚不能在体外培养又无合适的实验动物因而对其检测主要依赖于形态学方法和分子生物学技术目前HPV检测方法主要有细胞学法,斑点印迹法荧光原位杂交法Southem杂交法多聚合酶链反应(PCR)法和杂交捕获法等细胞学法敏感度和特异度较低斑点印迹法具有放射性目前较为公认的敏感度和特异度高的方法是捕获代法其他敏感度较高的方法有原位杂交,PCR法但PCR法特异度很低,假阳性率较高而核酶印迹原位杂交法复杂,不宜大规模I临床使用细胞形态学检测宫颈HPV阳性细胞的特征性改变是出现了特异性挖空细胞初期在表层出现当不典型增生达以上时挖空细胞:减少,此时表现为低分化鳞癌的形态特点感染HPV,的宫颈上皮阳性为中层挖空细胞核出现了密集浓染的蓝紫色颗粒产物从慢性宫颈炎一宫颈上皮内瘤变(CIN)一宫颈癌(CaCx),HPV杂交信号渐强,由上皮表层到棘层,分布呈散在一簇状一弥漫状免疫组织化学法用SP法染色测HPV,早期蛋白E单抗能有效证明感染组织中存在的E蛋白阳性标志为核内出现棕黄色颗粒作者简介作者单位井明霞(一),女,博士研究生,石河子大学科技处副处长,副研究员,研究方向:肿瘤流行病学新疆石河子大学科技处,石河子,新疆石河子大学医学院附属医学新疆石河子大学医学院【综述】研究表明抗HPVE单抗可直接定位于宫颈癌组织对宫颈癌有较好定向选择性有可能作为人宫颈癌放射免疫显影诊断的载体基因扩增技术人乳头瘤病毒DNA的多聚合酶链反应扩增评价HPV检测方法最关键的凶素是检测灵敏度,以基因扩增为基础检测HPVDNA是目前最灵敏的检测方法,呵检测出低水平的病毒感染并且能够比较准确地对HPV感染状态进行分类因此成为实验室和流行病学研究的理想工具但是,由于基因扩增过程中污染造成的假阳性及技术成本高,目前不宜作为I临床实验室HPV感染的常规检测荧光定量多聚合酶链反应技术荧光定量多聚合酶链反应(FQPCR)是年由美罔PerkinFlmer公司研制成功的一种新型核酸定量检测方法该法将普通PCR的高灵敏性,DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性有机结合,克服了传统PCR在许多方面的缺点和局限性由于荧光探针的引入而且被释放的荧光基团数目与PCR产物数量相同使得该方法对DNA模板定量的准确性与特异性都有很大提高常用的PCR扩增仪与传统PCR扩增仪相比,应用更广泛,定量测量,检测效率明显提高,扩增产物无需电泳分析,无管道内污染及结果重复性好等特点由于HPV一型特异引物可与HPV型模板DNA发生错配传统PCR法扩增时常对两者的扩增产物不易区分而造成HPV假阳性结果,但应用FQPCR技术,HPV型DNA不能扩增,从而增强了HPV分型检测的特异性此外,FQPCR技术检测HPV感染的敏感性较传统PCR法增高,当HPV,,,,亚型含量平均为拷贝基因组个细胞时即可用此法检测到杂交俘获试验第代杂交俘获试验为克服基因扩增技术的不足,几年前美圉Digene公司开发出一种新的HPVDNA检测技术一第l代杂交俘获试验(hybridcapturetestIHCI)其原理是利用对抗体捕获佶号的放大和化学发光信号的检测HCI不需要基因扩增,利用两套单链全长RNA混合探针,可以检测种低危型HPV(,,,,)及种高危型HPV(,,,,,,,,)理论上检测灵敏度是个HPVDNA拷贝经过临床试验评价,HCI检测灵敏度低于PCR及其他基因扩增技术,但其特异度和阳性预测值却高于现代预防医学年第卷第期ModernPreventiveMedicine,,Vo,NOPCR第代杂交俘获试验最近Digene公司推出的杂交捕获代试验(hybridcapturetest一,HC一)更敏感,由原先的试管法改为孔平板法,提高了工作效率,降低了成本,更适于大人群的筛查该法同时能检测种高危型HPV(HPV,,,,,,,,,,,和型),已得到世界范围的认可Pe等对德国例患者经HC一检测,发现HC一检测CIN级的敏感性远较常规细胞学高前者是,而后者是,而且HC检测CIN的特异性,阳性预测值和阴性预测值分别为,和,与细胞学检测基本吻合HC一检测方法的缺点是不能测定具体的HPV型别此外,HC一作为杂交反应,存在交叉杂交的问题,即与不在混合探针中的其他HPV型起交叉反应引起假阳性结果而降低特异性…第代杂交俘获试验第代杂交俘获试验(hybridcapturetes卜,HC一)是Digene公司生产的新一代捕获杂交法和HC一样也用RNA探针,但用一段带有生物素的寡核苷酸代替HCII中的特异性抗体,将RNADNA杂交体固定在链霉素包被的孔中由于这段寡核苷酸与HPVDNA的另一段序列互补,从而减少了非特异性杂交造成的假阳性结果而且这种检测方法能特异性地检测出靶序列的单个核苷酸的改变从而使检测HPV基因型变异体成为可能HC一也用混合探针,故也不能对HPV进行分型,加上专利的因素,使这种方法的研究和发展受到一定限制杂交捕获基因表达芯片技术(HCExpressArray)Digene公司在杂交捕获法的基础上结合基因芯片推出了HCExpressArray技术这项技术利用芯片上固定的病毒不同亚型的特异性DNA探针,对病毒进行分型判断此技术目前用于基因表型分析的研究,且该技术快速分型和定量的特点使其在HPV的分型检测中具有非常广阔的应用前景HC操作比较简单,基本步骤如下:样本DNA双链解离为单链(DNA单链与全长RNA探针结合为RNADNA杂交复合物包被在试管壁或微孔壁上的特异性抗体与RNADNA杂交复合物结合,使之固定结合有多个碱性磷酸酶的第二抗体与RNADNA杂交复合物结合,使信号放大(碱性磷酸酶使酶底物发光,分光光度计测量发光强度后与标准值比较通过碱性磷酸酶的含量确定RNADNA杂交复合物的含量但是,HC也有一定的局限性,主要有:检测结果阴性并不能排除HPV感染,因为可能存在病毒感染水平很低或者采样不正确导致的假阴性(标本采集及保存有特殊的要求,必须应用Digene公司提供的专用器材及试剂,或者应用液基细胞学剩余标本不能区分HPV具体型别如果所得相对光单位值接近或者小于O,则不能确定HPV感染结语与展望HPV是引起宫颈癌及癌前病变的必要因素,宫颈癌的筛查是降低宫颈癌发病率最经济有效的方法HPV的检测已是宫颈癌早期筛查的一个重要方面许多研究支持将HPV检测传统的巴氏涂片结合,HPV检测阳性可作为细胞学检查ASCUS结果行阴道镜检查的指征,在一定程度上减少重复细胞学检查,减少阴道镜检查,减少在随诊中高危人群的丢失此外HPVDNA检测可以预示治疗后病变残存和复发的高危患者同时血清HPVDNA可能成为宫颈癌治疗后的病情监测的有效肿瘤标志物因此,HPV检测的临床意义不容忽视HPV的检测作为宫颈癌的筛查已逐渐向临床推广,但是不同的HPV型别有不同的致病能力所以发展HIV基因型的分型方法越来越重要目前HC一法是唯一通过FDA批准的可在临床使用的一种检测HPVDNA的技术但他不能对HPV进行具体分型而且存在交叉杂交的问题PCR扩增后进行测序不仅可以检测具体型别还可以检测所有型别在一定改进之后有较大的发展前景但是假阳性及技术成本高的问题限制了其在临床常规检测中的广泛应用针对现有方法的缺点和不足通过不断的努力,将各种检测方法有机结合取长补短,相信在不久的将来会产生简单,快速,方便,价廉,且敏感性,特异性很高的HPV检测方法应用于宫颈癌的筛查中参考文献:BoschFX,LofinczAMunozN,etaThecausalrelationbetweenHumanpapillomavirusandcervicalcancerlJJJClinPatho():AderssonS,RylanderE,LarssonB,etaTheroleofhmllanpapillomavirusincervicalcarcinomacarcinogenesisJEuropeanCancer,,:,SchiffmanMHEpidemiologyofcervicalarcinogenesisJjCancer,:JCheahPLLoolLMPimmunohistochemicalexipression:messagesincervicalcarcinogenesisJPathology,():DuensingSMungerKCentresomeabnormalitiesandgenomicinstabilityinducedbyhumanpapillomavirusonproteinsJProgCellCycleRes,,:WalboomersJM,JaeobsMV,ManosMM,etaHunanpapillomavirusisanecessarycauseofinvasivecervicalcancel"worldwideJPathol,:GeorgetteDamasusAwatai,etaHumanpapilh)mavirusandcervicalscreeningJCurtOpinObstetGynecol,,:PetryKUetaInclusionofHIWtestinginroutinecervicalcaucerscreeningforwomenaboveyearsinGerman)':ResultforpatientsJBrJCancer,,:ThomasC,WrightJr,etaInterimguidancefortheuseofhmuanpapillomavirusDNAtestasanadjuncttocervicalcytolog)forscreeningJObstetGynecol,,:ShalinlIKulasingam,etaEvaluationofhumanpapillonmvirustestinginprimaryscreeningforcervicalabnormalitiescomparisonofsensitivity,specificity,andfrequencyofreferralJJAMA,,:,CastlePE,SchiffmanM,BurkRD,etaRestrictedcr(reactivityofhybridcapturewithnononcogenichumanpapilhmmvirustypesJCancerEpidemiolBiomarkersPrev,,():f收稿日期:)

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