半微量凯氏定氮法

半微量凯氏定氮法半微量凯氏定氮法半微量凯氏定氮法 1(原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。 2(试剂所有度剂均用不含氨的蒸馏水配制。 (1)硫酸铜(CuSO4•5HO); 2 (2)硫酸钾; (3)硫酸; (4)硼酸溶液(20g/L); (5)混合指示液:1份(1g/L)甲基红乙醇溶液与5份1g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用...

半微量凯氏定氮法半微量凯氏定氮法 1(原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。 2(试剂所有度剂均用不含氨的蒸馏水配制。 (1)硫酸铜(CuSO4•5HO); 2 (2)硫酸钾; (3)硫酸; (4)硼酸溶液(20g/L); (5)混合指示液:1份(1g/L)甲基红乙醇溶液与5份1g/L溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份(1g/L)甲基红乙醇溶液与1份1g/L次甲基蓝乙醇溶液，临用时混合。 (6)氢氧化钠溶液(400g/L); (7)标准滴定溶液:硫酸标准溶液[c(1/2H2SO)=0.0500moL/L]或盐酸标准溶液4 [c(HCI)=0.0500moL/L]。 3(仪器定氮蒸馏装置如图所示。 4(操作方法 (1)样品处理:精密称取0.02-2.00g固体样品或2.00-5.00g半固体样品或吸取10.00-20.00mL液体样品(约相当于氮30-40mg)，移入干燥的100mL或500mL定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20mL硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45?斜于于小孔的石棉网上，小心加热，待内容物全部碳化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下放冷，小心加20mL水，放冷后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。同时做试剂空白试验。 (2)按图3-5装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约三分之二处，加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。 1一电炉;2一水蒸气发生器(2L平底烧瓶);3一螺旋夹; 4一小玻杯及棒状玻塞; 5一反应室;6一反应室外层;7,橡皮管及螺旋夹;8 一冷凝管: 9一蒸馏液接收瓶 (3)向接收瓶内加入10mL 20g/L硼酸溶液及混合指示剂1-2滴，并使冷凝管下端插入液面下，吸取10.0mL样品消化稀释液，由小漏斗流入反应室，并以10mL水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞，将10mL 400g/L氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞，使其缓慢流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小烧杯中，以防漏气，夹紧螺旋夹7，开始蒸馏，蒸气通入反应室，使氨通过冷凝管而入接收瓶内，蒸馏5min，移动接收瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以硫酸或盐酸标准溶液(0.05moL/L)滴定至灰色或蓝紫色为终点。同时准确吸取10mL试剂空白消化液按(3)操作。 5(计算 V,V，c，0.01412 ……………………………(3-9) X,，F，10010m，100 式中:X---样品中蛋白质的含量，g/100g(g/100mL); V---样品消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，mL; 1 V---试剂空白消耗硫酸或盐酸标准溶液的体积，mL; 2 c---硫酸或盐酸标准溶液的浓度，moL/L; 0.014---1.00mL硫酸[c(1/2H2SO)=1.000moL/L]或盐酸[c(HCI)=1.000moL/L]标准溶液4 中相当的氮的质量，g; m---样品的质量(或体积)，g或mL; F---氮换算为蛋白质的系数。一般食物为6.25;乳制品为6.38;面粉为5.70;玉米、高梁为6.24;花生为5.46;米为5.95;大豆及其制品为5.71;肉与肉制品为6.25;大麦、小米、蒸麦、燕麦、裸麦为5.83;芝麻、向日葵为5.30。 6(说明 (1) 凯氏定氮法测定氮的含量，依据蛋白质中含氮的多少，换算为蛋白质的含量。 (2) 消化过程中，加入硫酸钾可以提高反应温度，加入硫酸铜作为催化剂，提高反应速度。 (3) 蒸馏过程中，不能使系统漏气，放入碱液时，应小心、缓慢。 (4) 食品中含氮量一般为15,-17.6,，根据不同食品含氮量略有差异，采用不同的换算系数。以上换算系数是食品中含氮量为16,的氮换算为蛋白质的系数。 (5) 食品中还有非蛋白质物质含氮，故用此法测定蛋白质称为粗蛋白。 (6) 蒸馏时，蒸汽发生要充足，均匀，加碱要够量，动作要快，防止氨损失。冷凝管出口应浸入吸收液中，防止氨损失。 (7) 我国规定含乳饮料中蛋白质?1.0,。

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