沙雅县胡杨林土壤可培养细菌的多样性分析

沙雅县胡杨林土壤可培养细菌的多样性分析 沙雅县胡杨林土壤可培养细菌的多样性分 析 新疆农业科学2011,48(5):832—840 XinjiangAgriculturalSciences 沙雅县胡杨林土壤可培养细菌的多样性分析 马丽艳木?阿木东,谢仁娜依?甫拉提2,卡依尔?玉素甫, 艾尼江?尔斯曼,玛丽帕?吐达洪,程刚,祖母拉提?阿布都热依木, 艾尔肯?热合曼,木合塔?阿不都克里木 (1.新疆大学生命科学与技术学院.鸟鲁木齐830046;2.新疆师范大学生命科学学院,鸟鲁木齐830054) 摘要:【目的】了解新疆沙雅县胡杨林土壤可培养细菌的多样性.【方法】沙雅县胡杨林采集土壤样品,采 用两种不同的培养基(LB,TSA)分离纯化细菌,并对它们进行16SrDNA测定和系统进化分析.【结果】分离纯 化不同 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 型的57株细菌.对它们16SrDNA序列分析表明,57株菌分别属于3个大类群厚壁菌门 (Firmicutes),放线菌门(Acfinobacteria),丫一变形菌纲(一Proteobacteria),13个属,33个种;芽孢杆菌属是优势 细菌种群,它占已测种群的67.2%.其中6株菌M28,M13,CT3,YS30—1,CM5,CL19初步被认为是潜在的 新种(16SrDNA相似率为96.780%,97.961%).【结论】沙雅县胡杨林可培养细菌不仅具有比较高的多样 性,并存在一些潜在的新的细菌菌种资源,极具进一步发掘的潜力. 关键词:胡杨林;可培养细菌;16SrDNA序列;多样性;沙雅县 中图分类号:S154文献标识码:A文章编号:1001—4330(2011)05—0832—09 C!ulturableBacterialDiversityintheSoilOfPopulus euphraticaForestinShayarCounty Maryam?Hamdun,Shirenay?Pulat,Khayir?Yusuf1,Ghenijan?Osman,MaripatTurdahon, CHENGGang,Zumret?Abdurehim,Erkin?Rahman,Muhtar?Abdukerim (1.CollegeofScienceandTechnology,XinjiangUn&emiq,Urumqi830046,China;2.Collegeof Science,XinjiangNormalUniversity,Urumqi830054,China) Abstract: 【Objective]Thepurposeofthiswritingistoinvestigatethediversityofcuhurablebacteriafromthe soilinnaturalPopulozeuphraticaforestinShayarcountyofXinjiang.【Method】 Bacteriawereisolatedfromthe soilofPopuluseuphraticaforestbyusing2typesofdifferentcuhuralmedium(LB,TSA).Theywereexaminedby using16SribosomalDNAsequenceanalysis.【Result】 Atotalof57phenotypicallydifferentisolatesWeresequenced andaccordingtotheir16SrDNAsequencesimilaritiestotypestrainsofdescribedorganisms,theyhavebeenplaced intothreephylogeneticgroups(Firmicutes,Actinobacteriaand7一 Proteobaeteria),13genera,and33species. Bacilluswasthemostpredominantandoccupiedthemajorityofisolates(67.2%).Amongthem,M28,M13, CT3,YS30—1,CM5,CL19with96.780%一 97.961%sequencesimilaritiestotheircloselyrelatedmembers werepresumedtobepotentialnovelspecies.【Conclusion】 Theresultshowedthatthebacteriacultivatedfrom PopuluseuphraticaforestinShayarcountyhaverelativediversityandtheyarelikelytobethepotentialresources whichmightbeexcavatedinthefuture. Keywords:naturalPopuluseuphraticaforest;cultivableBacteria;16SrDNA;diversity;Shayarcounty 0引言 【研究意义】胡杨(PopuluseuphraticaOily)是杨属中最原始,最古老的树种,生长在最恶劣,最残酷的 气候环境之中.它们具有耐寒,耐热,耐碱,耐涝和耐干旱的特性,是极端干旱的沙漠地区唯一的乔木树 收稿13期:2011—04—1l 基金项目:新疆维吾尔自治区科技支疆项目(201091236);国家自然科学基金(31060002) 作者简介:马丽艳木?阿木东(1984一),女(维吾尔族),新疆人,硕士研究生,研究方向为资源微生物学,(E—mai1)meryemgul@163.conl 通讯作者:木合塔?阿不都克里木(1962一),男(维吾尔族),新疆人,副教授,研究方向为微生物遗传学,(E—mail)muhtar97@sina.cn 5期马丽艳木?阿木东等:沙雅县胡杨林土壤可培养细菌的多样性分析?833? 种….塔里木河流域分布着全世界最大的一片天然胡杨林,其面积近30×10hm2_2j,它约占全国胡杨林 总面积的90%和全世界胡杨林总面积的55%以上I3J.胡杨林是荒漠陆地中生产力最高,结构与功能 最完善,最稳定的生态系统』.沙雅县位于新疆南部,阿克苏地区东部,塔里木盆地北部,塔里木河中 游,属暖温带大陆性干旱气候,气候温和,热量丰富,降水稀少,夏季干热,冬季干冷,这样复杂多样的大 型地貌和生态环境在全国独一无二,在全球亦属典型.其境内新发现的一片面积近两百万亩的原始胡 杨林,在这种极端恶劣的自然环境里蕴藏着丰富的相应特殊功能的微生物,如嗜热,嗜冷,嗜盐,嗜碱和 耐干旱微生物等.由于极端环境微生物(extremophiles)具有其独特的环境适应模式,特殊的生理机制, 独特的基因类型,并有多种代谢产物可以加以利用,因而不仅成为了生命科学理论研究的理想材料,并 且成为一类具有很大开发潜力的生物资源6J.【前人研究进展】袁秀英等J2007年对内蒙古的胡杨根 际真菌与内生真菌多样性进行了研究.塔里木大学的范君华等8j对阿拉尔市果林地和胡杨林地土壤养 分进 行测 数字推理题500道详解公务员考试成语大全公务员考试常识4000题公务员行测学霸笔记图行测常识900题及答案 定,分离了细菌,并且测定了它们的酶活性.上述研究中均使用了经典的形态表型分类法,只 是在属的范畴上进行了粗略的描述,没能将分离菌株鉴定到种的水平.王宁等_9J对塔河胡杨林特殊病 灶微生物进行了分离和报道;孜来古丽等_I从塔河胡杨林样品中分离22个菌株,发现其中有3个潜在 的新种;卡依尔等Hlj从塔河废弃古河道胡杨中分离了可培养内生细菌;何香等l12]从新疆沙雅县的胡杨 林中发现新菌种沙雅鞘氨醇杆菌(Spingobacteriumshayense)并进行了报道.【本研究切人点】针对沙雅县 胡杨林土壤可培养细菌资源,尚未见系统地进行分离和用现代细菌分类学方法进行研究的报道.【拟解 决的关键问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 】对这种特殊地理环境下的胡杨林土壤细菌的多样性进行分析,将为今后新疆极端环境微 生物的研究奠定基础.采用稀释平板法分离培养沙雅县胡杨林可培养细菌,并根据16SrDNA片段序 列对分离菌株进行了系统发育分析,初步获得沙雅县胡杨林可培养细菌的物种多样性信息. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1土样采集 从新疆沙雅县的胡杨林(N40.5634.8",E83.2218.5)采集土样,装入已灭过菌的样本塑料罐, 4?运输和保存,直到使用.图1 A:沙雅县天然胡杨林采样位.占 图1新疆沙雅县胡杨林采样点示意图(A:40.5634.8"N,83.2218.5"E) Fig.1SamplesiteintheShayarcountyofmiddlereachesoftheTarimRiverinXinjiang.China 1.1.2培养基 实验中采用溶菌肉汤培养基LB(胰蛋白胨10g,酵母浸粉5g,氯化钠10g,琼脂粉l5,20g,蒸馏水 l000mL,调pH值至7.0,8.0),胰蛋白胨大豆琼脂培养基TSA(胰蛋白胨15g,大豆蛋白胨7.5g,氯化 钠30g,琼脂粉1520g,蒸馏水1000mL,调pH值至7.0,8.0)两种培养基. ? 834?新疆农业科学48卷 1.1.3主要试剂和仪器 PHB一8型笔式pH计(上海虹益仪器仪表有限公司);TaqDNA聚合酶购自宝生物工程(大连)有限 公司;引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成;PCR产物纯化试剂盒由上海生工生物工程技术 服务有限公司提供;PCR仪为ALD.1244型,购自BIO.RAD公司;凝胶成像分析仪ALPHAIMAGERTM 2200及成像软件AlphaEase4.1.0,购自AlphaInnotech公司;恒温振荡摇床和恒温培养箱购自江苏省金坛 市医疗仪器厂. 1.2细菌的分离 把采来土壤样品,用置于冰浴的LB和TSA液体培养基稀释至10,一10倍,取100涂布到上述 的两种固体培养基,分别在28,37?培养3,7d.根据细胞与菌落形态,颜色,大小分别挑取不同类型 的细菌,并在上述的两种培养基上划线纯化,镜检纯化后的土壤细菌用含30%甘油的LB培养置于一 70?保存备用. 1.3细菌基因组DNA的提取及16SrDNA扩增 用常规方法提取细菌基因DNAE],使用通用引物[H]对细菌16SrDNA进行扩增.扩增条件参照文 献【15J进行. 1.4PCR产物测序及系统发育树的构建 测序由上海生物工程技术有限公司完成,将每一个16SrDNA基因序列通过Blast(. nlm.nib.gov/blast/blast.cgi)和EzTaxonserver2.1与数据库的SSUrRNA序列进行相似序列搜索,根 据最相似序列确定其系统发育地位.用ClustXEj(Version1.81,availablefrom clustalw)对序列进行对位排 序,MEGA4.0E](MolecularEvolutionaryGeneticsAnalysis)计算遗传距离,邻 结法(Neighborjoining)构建系统发育树状图. 1.5培养基优势度指数 培养基优势度通过下列公式计算:D=N/N. 其中?为各种培养基分离的细菌的种类数量,?为分离到细菌的全部种类数量u?. 1.6核酸序列登录号 研究中得到的16SrRNA基因序列已提交Genbank.表1 2结果与分析 2.1菌株的分离与表型特征 用2种不同培养基(LB,TSA)进行培养与筛选,通过菌落特征和显微细胞形态观察,从胡杨林土壤 中分离得到57株细菌.细菌的简单染色结果表明:8株菌是球菌,49株菌是杆菌.细菌的革兰氏染色 结果表明:55株菌是革兰氏阳性菌,2株菌是革兰氏阴性菌.菌株生长温度实验结果表明,大多数菌株 在15,37?生长,在28cc下生长速度较快;盐浓度实验结果显示,多数菌株生长盐浓度范围为2%一 10%.部分菌株在没有Na的条件下都能够生长,其他的菌株在没有Na的条件下都不能生长.3株 菌(KM2,CL20,CL19)的NaC1浓度分别是0%一16%,0%,15%和2%,15%,盐浓度较高,属于耐盐 菌;pH实验结果显示,大多数菌株的生长pH为69.表l 表1沙雅县天然胡杨林土壤可培养细菌的形态和生理特性 Table1Morphologicalandphysiologicalcharacteristicsofculturable bacterialstrainsfromPopuluseuphraticaforestsoilinShayarcounty 5期马丽艳木.阿木东等:沙雅县胡杨林土壤可培养细茵的多样性分析.835. 续表1表1沙雅县天然胡杨林土壤可培养细菌的形态和生理特性 Table1Morphologicalandphysiologicalcharacteristicsofculturable bacterialstrainsfromPopuluseuphraticaforestsoilinShayarCOUIity 菌株分离号 Numbersof isolates 革兰氏 G1-am staining 细胞形态 Cell morphology 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 球状 球状 杆状 球状 球状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 杆状 球状 球状 杆状 球状 球状 生长温度(?) Growth temperature pH范围 pHrange 盐浓度(%) NaCl COncentra【lOn 分离培养基 Isolation medium M2 M24 M54 M56 M34 Ml3一l Ml3 M44 M5O CT3 CI一l YS3O一1 M9 M3一l Mi5 M17 M3O M53一l M36 M39 M55 M60 M40 M43 M48 ALl0 CM13 MG KMl3 M5一l Ml2 L25 M57 M64 KM2 CM5 QL2 CL2O CLI9 CT25一l CM2 CM9 CMl7 M42 CMl4 KM57 KM9 CT4 KM7 KMlO 4—37 4—37 4—37 4—37 4—37 4—37 30—37 28—37 28,37 l5,37 30,37 28—37 30,37 15—37 28—37 28—37 28—37 28—37 15—37 28—37 28—37 28—37 28—37 28—37 28—37 l5—37 5—37 5—37 5—37 l5—37 28—37 28—37 28—37 28—37 5—37 28—37 28—37 10—37 2837 25,3O 15,37 15—37 28,37 28—37 28,37 530 30—37 2837 28—37 28—37 6—10 6,8 6—8 6—10 6—10 6—10 7—1O 6—8 6,8 5—8 7—8 7—9 7—8 6—9 6—9 6,9 6,9 6,9 6—9 6—9 6—9 6—9 6—9 7—9 6一ll 4—8 6—10 6一IO 6—10 6—8 6—9 6一lO 6—10 6—1O 6—10 6—10 6—9 6—9 6一lO 6—9 6—9 6,9 6—10 6—10 3,7 6,12 8—9 6—9 6—8 6—8 2—6 2—8 2—6 2—6 2—6 2—6 O一15 2,lO 2,】O 0—10 O一8 2—8 O一8 210 2,1O 2,10 2—1O 2一lO 2—1O 2,1O 2一lO 2,10 2一lO 2,8 2,4 2—8 2—1O 2—12 2一l2 2,4 3—5 2,1O 2一lO 2—10 0一l6 2一l0 2—10 O—l5 2一l5 2一lO 3—9 3—9 2,10 2一lO 2,lO 2,l0 O,2 2—6 0—2 0—2 2.2]6SrDNA序列系统发育分析 根据16SrDNA序列测序结果,对57株细菌进行了系统发育进化分析,结果表明,57 株细菌共归类 ?阻璩嵋吩眦瞰瞰嵋嵋墟 ++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++++ ? 836?新疆农业科学48卷 为3个大的系统发育类群,厚壁菌门(Firmicutes),放线菌门(Actinobacteria),丫一变 形菌纲(丫一 Proteobacteria),属于l3个属,33个种.其中38株菌属于Bacillus属,1株菌属于Planomicrobium属,2株 菌属于Staphylococcus属,1株菌属于Terribacillus属,2株菌属于Planococcus属,1株属于Sediminibacillus 属,1株菌属于Paenibacillus属,1株属于Aerococcus属,4株属于Streptomyces属,1株属于Arthrobacter 属,2株属于Kocuria属.l株属于Acinetobacte属,2株属于Moraxella属.Bacillus属的分离率最高,占 所有分离菌株的67.2%,包括15种.表2,图2 表2沙雅县天然胡杨林可培养细菌的群落结构和16SrDNA序列同源性 Table2PopuluseuphraticaforestsoilbacterialcommunityinShayarcountyand16SrDNAho mology 菌株分离号 Numbers ofjsolales 注册号 Accessionno 类群 Genus 相似菌株(登录号) Closestspecies (AccessionDo) 16SrDNA 相似性(%) 16Sr1)NA Homology 相似菌株分离 来源Closest specJe~o13gJ M】一l M2l M28 M3l M6 M7 MlO M2 M24 M54 M56 M34 M13一l Ml3 M44 M5O C CL9一l Y$30一l M9 M3一l Ml5 Ml7 M3O M53—1 M36 M39 M55 M6o M40 M43 M48 AL10 CM13 MG KMi3 M5—1 Ml2 L25 M57 M64 KM2 CM5 QL2 JF4l1280 HQ699493 JF41l229 JF411230 JF41l23l JF4I1232 JF4ll233 JF4l1281 HQ699494 JF411234 JF4l1235 JF411236 JF411237 HQ699497 HQ699498 JF411294 HQ326993 HQ326991 JF411242 JF41l284 JF4l1282 JF411286 JF411287 JF411288 JF4l1295 JF4l1289 JF411290 JF411296 JF411297 JF411291 JF4l1292 JF411293 JF411305 HQ699506 JF4l1284 JF4l1309 JF4I1283 JF4l1285 JF411320 HQ699510 HQ69951I JF411250 HQ699501 HQ234287 Bacillus P1andreicrobium Staphylococcus 扎bacillus Prbococcll$ Bacillusnlabeusis(AY998119) Bacillusniabeusis(AY998ll9) Bacillusniabensis(AY9981l9) Bacillusniabeusis(AY998119) BaciUusniabeusis(AY9981l9) Bacillusniabensis(AY998ll9) Bacillusniabeusis(AY9981l9) Bacillusoceanisediminis(GQ292772) Bacillusaceanisediminis(GQ292772) Bacillmoceaniseminis(GQ292772) Bacillusoceanisediminis(GQ292772) Bacillusoceanlsediminis(GQ292772) Bacillusoceanisediminis(GQ292772) Bacillusviemamen.sis(ABO99708) Bacillusidriensis(AY9O4O33) Bacillusidrieusis(AY904033) Bacillusseohaeanensis(AY667495) Bacilluskorleusis(EU6o3328) Bacilluskorleusis(EU6O3328) Bacilluskorlensis(EU603328) Bacillustequileusis(EU138487) Bacillustequilensis(EU138487) Bacillustequileusis(EU138487) Bacillustequileusis(EU138487) Bacillustequileusis(EU138487) Bacillustequileusis(Eul38487) Bacillustequileusis(EU138487) Bacilhtstequilemis(EU138487) Bacillustequileusis(EU138487) Bacillussafeusis(A17234854) Bacillusatrophaeus(AB021l81) Bacillusaltitudinis(AJ831842) Bacillusinfantis(AY904032) Bacillussubtillssubsp.inaquosorum(EU138467) Bacillussubtilissubsp.inaquosorum(EU138467) Bacillusthioparaus(DQ371431) Bacillusberingensis(FJ889576) Bacillusaquimaris(AF483625) Pnomicrobiumglaciei(EU036220) Staphylococcussaprophytieussubspsaprophyticus (APoO8934) Staphylococcusequorumsubsp./torttgn (ABoo9939) Tcrribacillusgorieusis(DQ519571) Pllococ~ussalinarum(F】765415) Planococcusmaltriensis(AJ544622) 98.138 98.054 97.96l 98.480 98.279 98.420 98.414 99.641 99.641 99.785 99.785 99.641 99.785 97.825 98.3l9 99.234 96.989 99,810 97.326 98.542 lo0.0oO 99.229 99.229 99.229 l0o.00 99.914 99.914 l0o.Oo0 lo0.ooO 99.580 99.312 99.382 99.78l 99.829 l0o.000 99.380 98.885 98.692 98.682 棉花垃圾堆肥 棉花垃圾堆肥 棉花垃圾堆肥 棉花垃圾堆肥 棉花垃圾堆肥 棉花垃圾堆肥 棉花垃圾堆肥 沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 沉淀 越南鱼露 越南鱼露 越南鱼露 越南鱼露 沙土 沙土 沙土 坟穴 坟穴 坟穴 坟穴 坟穴 坟穴 坟穴 坟穴 坟穴 航天器表面 土壤 低温管 病人 土壤 土壤 废水 海水 海水 冰川 99.725透析膜 99.036 99.930 97.663 99.01l 奶酪 沿海水 海洋太阳能盐场 蓝藻垫样品 5期马丽艳木?阿木东等:沙雅县胡杨林土壤可培养细菌的多样性分析?837? 续表2表2沙雅县天然胡杨林可培养细菌的群落结构和16SrDNA序列同源性 Table2PopuluseuphraticaforestsoilbacterialcommunityinShayarcountyand16SrDNAho mology 在所有分离到的菌种中有6株可能是国际新记录种,它们是:菌株M28与模式菌株Bacillus niabensis4T19(T)(AY998119)的16SrDNA的序列相似性为97.961%;菌株M13与模式菌株Bacillus vietnamensis15—1(T)(AB099708)的16SrDNA的序列相似性为97.825%;菌株CT3与模式菌株Bacillus seohae?nensisBH724(T)(AY667495)的16SrDNA的序列相似性为96.989%;菌株 YS30一l与模式菌株 B0cilluskorlens~ZLC一26(T)(EU603328)的16SDNA的序列相似性为97.326%;菌株CM5与模式菌株 19/0nococcll~salinarumISL一16(T)(FJ765415)的16SrDNA的序列相似性为97.663%,菌株CL19与模式 菌株PaenibacillusgraminisRSA19(T)(AJ223987)的16SrDNA的序列相似性为96.780%.表2 2.3不同培养基上可培养细菌的分布和优势度指数 通过两种培养基分离的菌株多样性比较,此次分离的菌株在不同培养基上的分布有明显的差异. 用LB培养基分离的38株细菌,属于Bacillus,Planomicrobium,Terribaeillus,Planococcus,Sediminibacillu, Paen站acillus,Strept0myce,Arthrobacter,Moraxell.等9个不同的属和22个种,用TSA培养基分离的19株 细菌,属于Bacillus,Staphylococcus,Aerococcus,Kocuria,Acinetobacter等5个属的14个种,而其中属于 Bacillus属的三个种 Bacilluskorlensis,Bdcillustequilensis,Bacillussubtilissubsp.inaquosorum在两种培养基 上都分离得到,因此,所分离到细菌的全部种类数量为33(?值).据此计算培养基优势度指数,LB培 养基的优势度指数为0.667,TSA培养基的优势度指数为0.424.可以看到,种和属水平上LB培养基比 TSA培养基有较高的多样性.表3 表3LB,TSA,两种培养基分离菌株的多样性与优势度指数 Table3Thediversityanddominantindexofcultivablebacteriaon2 differentculturalmedium(LBandTSA) 3讨论 3.1为了解沙雅县天然胡杨林地区土壤可培养细菌资源的特征并分离获得这些微 生物菌种资源,研究 首次从沙雅县天然胡杨林土壤样品中使用LB和TSA两种培养基,总分离出57株土壤可培养细菌.分 别属于厚壁菌门(Firmicutes),放线菌门(Actinobacteria),丫一变形菌纲(7一Proteobacteria)等三大类的 13个属,33个种(增加).其中厚壁菌门为沙雅县天然胡杨林土壤中主要优势细菌群,Bacillus为主要 的优势细菌属.这一点与自然土壤和环境中所得到的研究结果一致.根据微生物观测结果来看,产 ? 838?新疆农业科学48卷 Firmicutes Actinobacteria ThenumbersaboVeeachbrahehindicatebootstrapValuesofdistance.Thebootstrapva]uesw ereobtainedafterabootstraptes,withl, 000replicBtiom numbersintheparenthesisindicateaccessionnumbersofcorrespondingsequences 图2沙雅县天然胡杨林可培养细菌的16SrDNA系统进化分析 Fig?2PhylogeneticanalysisofculturablebacterialisolatesfromPopulus euphraticaforestinShayarcountybasedonthe16SrDNAsequences 5期马丽艳木?阿木东等:沙雅县胡杨林土壤可培养细菌的多样性分析?839? 芽孢细菌在极端环境下具有比较强的适应和生存能力的特性决定了这类细菌的优势度??驯. 3.216SrRNA基因分析结果显示,研究中分离的57株菌与本实验室在新疆境内其它胡杨林位点筛选 的菌种有一定的差异.环境条件如气候,地质和土壤类型在物种数量和群落结构中起重大作用l'. 尤其是土壤温度,水分,pH值,土壤理化变量和营养等因素对土壤细菌的多样性有强烈的影响_2,并其 影响在沙漠生态系统中更加明显2.根据上述信息可以推断,沙雅县天然胡杨林地区土壤可培养细菌 群落结构和其他地区微生物资源之间的差异是该区域的土壤类型和地理环境引起.这说明胡杨林生境 下的微生物种群存在明显的地域性.这些结果揭示了沙雅县天然胡杨林土壤可培养微生物有较丰富的 系统发育多样性,遗传多样性和物种多样性. 3.3在所有的分离菌株中,6株菌M28,M13,CT3,YS30—1,CM5,CL19与其系统发育关系最密切的模 式菌株的16SrRNA基因相似率分别为 97.961%,97.825%,96.989%,97.326%,97.663%,96.780%,占 总分离菌株的10.5%,代表着潜在的新分类单位,需要开展进一步的实验来确定其最终的分类地位. 分离的细菌大部分与来自沙漠,海洋,盐场,冰川,土壤,坟穴,废水以及动物器官分离得到的菌株具有很 高的相似性. 3.4利用优势度指数分析各培养基分离到土壤细菌的多样性,LB培养基优势度指数为0.667,TSA培 养基优势度指数为0.424.可以看到,LB培养基比TSA培养基有较高的优势度指数.这可能是因为LB 培养基的盐含量比较低,适合于大多数菌株的生长,而TSA培养基的盐含量高,从而抑制一些低浓度盐 环境下生长的菌株,因此胡杨林土壤可培养细菌在LB培养基上可获得较好的生存环境. 4结论 获得的菌株中有与多环芳烃降解有关的菌株,如:Acinetobacterlwoffii等,而它们对此环境的作用还 尚不清楚.沙雅县天然胡杨林独特的生态系统蕴藏着丰富的细菌种质资源,限于培养条件所获得菌株 只是沙雅县天然胡杨林土壤微生物资源的一角.所获得结果将有助于人们深人认识和开发这一特殊区 域的微生物资源.研究后续工作集中于通过优化培养条件,改良培养基将有可能获得更多的可培养细 菌,开发沙雅县天然胡杨林更多的新菌种资源.除了进,步加强纯培养研究外,结合DGGE分析,荧光 原位杂交和样品宏基因组分析等免培养分析技术,促进沙雅县天然胡杨林微生物多样性特征得到更客 观的反映实属必要. 叁考文献: [1]王立明,张秋良,殷继艳.额济纳胡杨林生长规律及生物生产力的研究[J].干旱区资源与环境,2003,17(2):94,99. [2]王世绩.全球胡杨林的现状及保护和恢复对策[J].世界林业研究,1996,(6):37—44. [S]CH~NYa—Ning,WANGQiang,RUANXiao,eta1.PhysiologicalResponseofPopuluseuphratlcatoArt ificialWater—rechargeoftheLower ReachesofTarlmRiver[J].BulletinofBotany,2004,46(12):1393一l401. [4]程小玲,刘淑清.浅议塔里木胡杨保护区胡杨林的保护[J].中南林业调查规划,2004,23(1):33—35. [5]NielsThevs.CharacteristicsofEcology,SpatialDistribution,andUtilizationoftheTugai VegetationattheMiddleReachesoftheTarimRiver, Xinjiang,China[D].Ernst—Mofitz—Arndt—UniversitfitGreifswald,2006,12.07:1一l44. [6]刘志恒.现代微生物学[M].北京:科学出版社,2002:186—238. [7]袁秀英,石林,胡达古拉.胡杨根际真菌与内生真菌多态性的研究[J].西北林学院,2007,22(6):85—88. [8]范君华,刘明,高疆生,等.塔里木河上游不同林地土壤养分和微生物以及酶活性变化初探[J].中国农学通报,2005,21(1):184— 187. [9]wANGNing,SHENGGuang,DENGAihua,eta1.IsolationandMorphologyStudyofPathogenicMicroflorainNaturalPopuluseuphraticaOliver standofTarimRivervalley[JJ.Biotechnology,2007,17(4):61—63. [10]Zilaygu1.MIJIT,XiangruMA,Abduwaly.ABDUREHIM,Erkin.RAHMAN.CultivablebacteriadiveesityinasmallaofNaturalPopalus EuphraticaForestofTarimRiverValley,China[J].Biotechnology,2009,19(5):19—22. [11]卡依尔?玉素甫,谢仁娜依?甫拉提,玛丽帕?吐达洪,等.Ugan古河道胡杨可培养 内生细菌的多样性[J],微生物,2011,51(2):178 一 i88. [12]XiangHe,TingXiao,HaljuKuang,eta1.Sphingobacteriumshayensesp.nov.,isolatedfromforests0Il[J].InternationalJournalofSystematic andEvolutionaryMicrobiology,2010,60:2377,2381. [13]SambrookJ,RusselDWeta1.Molecularcloning:Alaboratorymanua1.3rdedn.CSHLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYork,2001. [14]DeLong,E.Feta1.Archaeaincoastalmarineenvironments[J].ProoNatlAcadSciUSA,1992,89:5685—5689. [15]ThompsonJD,Gibsoneta1.TheClustalXwindowsinterface:flexiblestrategiesformultipleseqaencealignmentaidedbyqualityanalysistools[J]. NucleicAcidsRes,1997.24:4876—4882. ? 840?新疆农业科学48卷 [16]TamuraK,DudleyJ,NeiM,KumarS.MEGA4:MolecularEvolutionaryGeneticsAnalysis(MEGA)softwareversion4.0[J].MolBiolEvol, 2007.24:l596—1599. [17]GarbevaP,vanVeenJA,vanElsasJD.PredominantBacillusspp.inagriculturalsoilunderdifferentmanagementregimesdetectedviaPCR—DGGE [J]MierobEcol,2003,45:302—316. [18]DeFede,KLSexstone,AJ.DifferencialresponseofsizefractionatedsoilbacteriainBIOLOGmicrotitreplates[J].SoilB