兴地区汉族青少年维生素D受体基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性分布研究

兴地区汉族青少年维生素D受体基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性分布研究 兴地区汉族青少年维生素D受体基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性分布研究 【摘要】 目的:探讨维生素D受体(vitamin D receptor，VDR)基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性的分布情况。方法:随机抽取绍兴地区青少年212名作为研究对象，提取其外周血DNA，利用聚合酶链反应(PCR)、基因测序技术检测VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点多态性。结果:BsmI位点基因型bb、Bb和BB的频率分布分别为89.62%、8.49%、 1.89 %;Tru9I位点基因型TT、Tt和tt的频率分布为6 1.79%、33.96%、4.25%;ApaI位点基因型aa、Aa和AA的频率分布分别 为60.38%、30.38%、8.96%。结论:绍兴地区汉族青少年VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点具有多态性。 【关键词】 受体 骨化三醇 基因多态性 青少年 Abstract: Objective:To investigate the distribution of vitamin D receptor gene BsmI，Tru9I，ApaI site gene polymorphism in adolescent. Methods: Polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing technology were performed to analyze the VDR genotype in 212 adolescents in Shaoxing region. Results: The frequency of bb, Bb and BB in the BsmI site were 89.62%, 8.49% and 1.89%, respectively;TT, Tt and tt in the Tru9I site were 6 1.79%, 33.96% and 4.25%; aa, Aa and AA in the ApaI site were 60.38%, 30.38% and 8.96% respectively. Conclusion: There is gene polymorphism in the vitamin D receptor BsmI，Tru9I and ApaI site in adolescent of Han nationality in shaoxing. Key words: vitamin D receptor; gene polymorphism; adolescents 人类维生素D受体(Vitamin D receptor，VDR)基因位于12号染色体长臂1区3带上，全长约75 kb，共有11个外显子和数个内含子[1]。VDR在多种组织中均能 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达，在细胞内VDR与1，25(OH)2D3激素信号分子结合成激素-受体复合物，该复合物与靶基因特定DNA序列上的激素反应元件结合，从而对结构基因的表达产生调节。因 而VDR本质上是一个配体依赖的转录因子，它与1，25(OH)2D3一起在调节机体钙磷代谢、细胞增殖与分化以及免疫功能等方面起重要作用。本研究利用聚合酶链反应(PCR)和基因测序技术对绍兴地区汉族青春发育期少年VDR基因BsmI、Tru9I、ApaI位点的多态性进行分析，旨在探讨VDR基因型频率的分布，为进一步观察其与青少年的生长发育关系打下基础。 1 对象和方法 1.1 研究对象 按分层抽样的方法随机抽取212名绍兴地区在校正常学习和生活的青春发育期汉族少年，其中男生90名，女生122名，年龄17,18周岁，平均年龄(17.8?0.5)岁。征得老师与家长同意后，签署知情同意书，抽取全血2,3 ml，采用EDTA-K2抗凝备用。 1.2 研究方法 1.2.1 基因组DNA提取: 全血提取DNA 试剂盒由杭州晓逸科技有限公司提供。 1.2.2 PCR 扩增和DNA测序: 根据研究需要通过美国NCBI(美国国家生物信息中心)的GeneBank获取VDR基因序列及其相应位点的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)信息。利用Primer 5.0软件设计引物序列。引物由上海鼎安生物科技有限公司合成。 含BsmI、Tru9I多态性位点PCR扩增的引物I 序列为 P1: 5‘-ATAAGGAAATACCTACTTTGCTGGTTT-3‘ P2: 5‘-TAGGTGCTCAATAAATTGTTGCTAAG-3‘ 扩增参数为95 ?预变性5 min;95 ?变性60 s，53 ?复性60 s，72 ?延伸90 s，重复35个循环;72 ?延伸10 min。 含ApaI多态性位点PCR扩增的引物II序列为 P1: 5‘-ACCTAGGTCTGGATCCTAAATGCAC-3‘ P2: 5‘-GTTAGGTTGGACAGGAGAGAGAATG-3‘ PCR反应条件为95 ?预变性5 min;95 ?变性45 s，55 ?复性45 s，72 ?延伸90 s，重复35个循环;72 ?延伸10 min。 PCR产物行1%琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像仪观察结果。PCR产物基因序列经纯化后送北京华大基因进行测序。 1.3 统计学处理方法 各位点等位基因的频率采用直接计算法，并采用Hardy-Weinberg平衡定律对基因型分布进行检验。 2 结果 2.1 PCR及DNA测序结果 针对VDR基因上的3个多态性位点，分别采用 两对引物进行扩增，结果由引物I 扩增的片段，包含BsmI、Tru9I多态性位点，长约580 bp;由引物II扩增的片段，包含ApaI多态性位点，长约630 bp(见图1)。 DNA测序结果显示VDR基因第8内含子的+283位点，即BsmI位点存在碱基C/T多态;第8内含子的+443位点，即Tru9I位点也存在碱基C/T多态;第9外显子的-46位点，即ApaI位点存在碱基C/A多态。基因测序结果见图2,4。 2.2 VDR基因多态性分布 目前国际上以B/b、A/a、T/t分别表示BsmI、ApaI、Tru9I位点等位基因，B、A、T 表示缺乏内切酶位点，b、a、t 表示存在酶切位点。本次研究结果显示，绍兴地区汉族青少年人群中VDR基因第8内含子BsmI位点碱基为C/C、C/T和T/T，即基因型为bb、Bb和BB的频率分布分别为89.62%、8.49%、 1.89%，b、B等位基因频率为93.9%和6.1%;Tru9I位点碱基为C/C、C/T和T/T，即基因型为TT、Tt和tt的频率分布分别为6 1.79%、33.96%、4.25%，T、t等位基因频率为78.8%和2 1.2%;ApaI位点碱基为C/C、C/A和A/A，即基因型为aa、Aa、AA的频率分布分别为60.38%、30.38%和8.96%，a、A等位基因频率为75.7%和24.3%。 2.3 遗传平衡检验 为了检验研究的样本VDR基因型频率是否具有群体代表性，对调查对象的基因型频率进行了Hardy-Weinberg平衡检验。将观察得到的等位基因频率代入基因型的平衡频率(p2， 2pq，q2)，再乘以总人数得到预期基因型分布，然后与实际数进行卡方检验。结果表明，所有基因型的观察值较好地与期望值吻合(均P0.05)，表明样本具有代表性(见表1)。