[课程]实验一、槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
实验一 槐米中芦丁的提取、分离和鉴定
一、概述
槐米系豆科植物槐树(Sophora japonica L.)的花蕾(槐米)。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。
药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12,20%。
主要化学成分的结构及理化性质:
芦丁(rutin):CHO?3HO，浅黄色针状结晶，mp174,178?(含三分子2730162
:180,水);188?(无水物)。难溶于冷水(1:8000,10000)，可溶于热水(1200)，热甲醇(1:10)，冷甲醇(1:100)，热乙醇(1:60)，冷乙醇(1:650);难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。
槲皮素(quercetin):CHO?2HO，黄色结晶，mp313,314?(2分子结151072
晶水)，316?(无水物)。能溶于冷乙醇(1:290)，易溶于沸乙醇(1:23)，可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等;难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
二、实验部分
(一)实验目的
1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。
2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的
方法
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。
3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。
(二)实验原理
1、芦丁的提取原理:芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。
2、芦丁的分离原理:芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。
3、芦丁的鉴定原理:芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性
分析
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，Rf值也应不同。
(三)实验药材、仪器与试剂
1、药材:槐米50g(每组)。
2、仪器:电炉子、不锈钢锅、量杯、1000ml烧杯、冰箱、滤纸、PH试纸、减压抽滤装置、锥形瓶、玻璃漏斗、纱布、电子天平、聚酰胺薄膜。
3、试剂:0.4%硼砂水溶液、石灰乳、2%硫酸溶液、浓盐酸、蒸馏水、镁粉、浓硫酸、甲醇、90%乙醇、1%三氯化铝醇溶液、醋酸镁乙醇液等。
(四)实验方法
1、芦丁的提取:(碱提酸沉法)
取槐米50g，加0.4%硼砂水溶液400ml至小锅中，加热煮沸，用石灰乳调节PH=9，加热微沸30min，随时补充失去的水分及控制PH值，四层纱布过滤，药渣再重复处理一次(不用调PH值)。合并两次滤液，用浓盐酸调PH=3，放入冰箱中析晶。
2、芦丁的精制:(水重结晶法)
(1)抽滤:用虹吸法先除去上清液，再进行抽滤，可更换滤纸。
(2)精制:取全部芦丁粗品，加入蒸馏水800ml，煮沸至全部溶解(15min)，趁热抽滤，放入冰箱析晶。
3、芦丁的水解:(酸水解法)
取芦丁1g，加入2%硫酸150ml，小火加热微沸30min，注意观察现象:溶液由浑浊变澄清，逐渐析出黄色结晶，抽滤，得到槲皮素粗品。剩下的芦丁要妥善保管，下次课还要带来。
4、鉴别反应
(1)称槲皮素重量，计算水解率。
(2)薄层色谱鉴定
样品:自制芦丁及槲皮素的1mg/ml甲醇溶液。(每组称取20mg)
对照品:芦丁及槲皮素对照品的1mg/ml甲醇溶液。
展开剂:90%乙醇溶液
显色:喷三氯化铝溶液，紫外光(365nm)观察荧光。
实验结果
记录
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:观察斑点颜色，记录图谱并计算Rf值。
(3)显色反应
?Molish反应:取芸香苷及槲皮素样品分别1ml，加入3%α-萘酚溶液1滴，振摇，沿壁滴加浓硫酸1ml，观察现象。
?盐酸-镁粉反应:分别取样品1ml，加入浓盐酸2-3滴，再加入少许镁粉，观察现象。
?纸片反应:取一张滤纸，分别滴加样品1滴，在上面再滴加三氯化铝溶液1滴，观察现象。(同理，再用醋酸镁显色)
(五)注意事项
1、提取时控制小火加热，微沸即可。
2、加热完成后要放冷抽滤。
3、用石灰水调节芦丁提取溶液的PH，既可以达到碱提取芦丁的目的，还可以除去槐米中含有的大量粘液质。但钙离子浓度及pH值均不宜过高，否则多余的钙能与芦丁形成螯合物沉淀，同时黄酮母核在强碱性条件下易被破坏。
4、用HCl调PH时，应注意PH不要过低，因为PH过低(PH2以下)会使芦丁形成钅羊 盐而使已形成的沉淀重新溶解，同时黄酮母核也会在强碱性条件下被破坏，导致收率下降。
5、Molish反应中加入浓硫酸后不可振摇。
6、纸片反应待溶液干燥后观察荧光效果好，否则荧光颜色淡或没有。
(六)思考题
1、如果碱或酸加过量会对实验有何影响,
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