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cmyc在成釉细胞瘤中的表达及与人端粒酶逆转录酶的活性

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cmyc在成釉细胞瘤中的表达及与人端粒酶逆转录酶的活性cmyc在成釉细胞瘤中的表达及与人端粒酶逆转录酶的活性 中国医科大学 硕士学位论文c-myc在成釉细胞瘤中的表达及与人端粒酶逆转录酶的活性 姓名:李自娟 申请学位级别:硕士 专业:口腔基础医学 指导教师:钟鸣 20040301 中文摘要 前 言 肿瘤形成的关键是细胞增殖和凋亡的失衡。普遍认为;—,,;可以促细胞的增殖、永生化、转化,抑制细胞分化并介导凋亡,在肿瘤的发生、发展中具有促细胞增殖和凋亡的双相性。,—,,;位于人染色体,?,,,该蛋白羧基端有碱性螺旋一环一螺旋拉链区(,,,,;—,,,,,—,,,,—,,...

cmyc在成釉细胞瘤中的表达及与人端粒酶逆转录酶的活性
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,(;—,,;表达与,,中,,,,,的活性水平有关,可能是调节,,,,,表达的重要因子。 关键词:成釉细胞瘤;牙源性角化囊肿;人端粒酶逆转录酶;;—,,; ?,? ,,,?,吲,,, ,, ;—,,,; ,,, ,?嘲, ,,,,,,,,,, ,,,,,?,, ,,,,,,,,,,蛾,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,”,,,,(,,,,,, ,)叩哪粥,,佃,, ;—,,, ,,, ,,,, ,,, ,,,,,, ,, , ,,,,瑚,, ,, ,,,,,, ;,,;,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,;,,,,, ,,,, ,,,陀,—,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,(,,,;,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ;,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,;—,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ;,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ;,,,, ,, ,,,,,,,,,(,,, ,,,,,,,—,,,,,,,, ,,,,;—,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,(,,王配),,,,,, ,, ;—,,, ,,,,, ,,,—,,,, , ,,,,,, ,,,,,,,—,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,;,,,; ,,,鸵一?,,,,,,,,,;,鹳,,, ,—,,, ,,,,,,,(,,;, ,,,,,,( ,,,,,,,,,, ,, , ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,;,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,(, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,(,, ,,;, ;,,, ,,,,,,,,,;,,,, ,,;,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,—,,,,,,, ,,,,,, ,,、,,;,,,, ,,,,,咖?;,,;, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,;,,, ;,,,,;,,,,,,,,,(,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,怕雠,,,,,,,,,,,,,(,,?,,,),,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,?,, ,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,(,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,;, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,(,,, ,,;,,, ,,,,,,,,;,,,,, ,, ,,,,, ,, , ,,,,;,,,,, ,,,,,, ,, ;—,,,,,,,,,,,,,,蛆,,,,,,,,, ,,;,,,,,, ,,, ;—,,,一珏,,,,, ,,,,,,,,,,碰,,( ,,,,,,,,,,,,,(,,),, ,,, ,,,, ,,,?,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,?,,,,;, ,, ,,,,,, ,, ,,(,,(,,, ,,,,,, ,,,,,,,,”,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,洲,,;,,,, ,,, ,,,,商,,,, ,日,,印枷,,,,,,,,正,,,,,,,,,,,鹅, ,,,,—,,,,,,,,;, ,,,,,(田地弘硼, ,,,由,,,, ,髓,,,弛,,,岛,嘲油,, ;—,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,, ,, ,,蛆, ,,,砷,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ;—,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,, ,,圮,,,,蛐, ,, ,,, ,,(,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,;舳, ,删,,,,,,,, ,,, ,,,,;,,,,,, ,,,,,,,, ;—,, , ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ?,?,,,,;,, ;,,,,;,,,,,,,;, ,, ,,, ,,,,, ,,,;,,,,, ,, ,, ,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,;,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,( ,,, ,,,;,,,,, ,,,, ,,,,,;,,,, ,,,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,,(,,,,,,,,, , , ;,,,,,,,;,,,,,, ,, ,, ;,,,,,,,,,,,,,, ,, , ,,,,粥,),,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,; ,,,,,,,,,,(,,,),,, , ,,,,,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,, ,,;,,,(,,,),, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,;,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,((,,,,(,, ,,,,;,,, ,—,,; ,,, ,,,,, ,,,, ,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,, ,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,, ,;,,,,:(一),,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,, ,,,,,,,,;(,),,,,,,,,,,,,,,,;(,,),,,一,,,,,,,,,,,;(,,,),,,, ,,,, ,,,,, ;,,, ,,,,,,,,(,,,, ,,, , ,(, ,,,,,,,,;,,,,,,,,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,, ,,,,( ,,,—,?,,,, ,,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,,,, ,,,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,;, ,,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,, ,,,?,,,;, ,, , ;,,, ,, , , , , ,,,,, ,,,,,(,,,,,,, ,,,, ;,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,—,,;,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,(,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,(,, ,,, ,,,,,,,,鹊,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,( ,,,,,, ,—,,; ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ;,,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,, ;,,,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,, ;,,,, ,, ,,(,,?, ,,,,;,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,(,,, ,,,,,,,,,, ,, ,—,,; ,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,, ,,,(,,(,,),,,,,,, ,, ,,,,,,,,通,,,(,,,),,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,, ,,(,,(,,),,,,,,;,,,,,,(,,,,, ,,, ,,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,(,,,,,(,,,,,,,(,,)(,,,,,,,,,,,;, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,;,,,(,,,,,(,,,,,,,(,,)(,, ,,,, ,,,,;,,,, ,,,, ,,,,, ,,, , ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, , —,,; ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,;,, ,,,,(,,,(,,)(,,, ,—,,; ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,, ;,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,( ?,? 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刖 菁 肿瘤形成的关键是细胞增殖和凋亡的失衡。普遍认为,—,,;可以促细胞的增殖、永生化、转化,抑制细胞分化并介导凋亡,在肿瘤的发生、发展中具有促细胞增殖和凋亡的双相性。;—,,;位于人染色体,?,,…,是一种典型的异位激活原癌基因,常异位于人,,、,,和,号染色体, ,„。,—,,;蛋白的羧基端有碱性螺旋一环一螺旋拉链区(,,,,;—,,,,,—,,,,—,,,,—,,,,,, ,,,,,,,,,,,,),可与,,,结合形成异二聚体,与特定的序列一例如人端粒酶逆转录酶(,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,;,,,,,,,,,,,,,)启动子内的,—,,,序列结合,从而促进,,,,,的转录,,。;—,,;蛋白的氨基端含有高度保守的,,,盒?,为,—,,,作为反式作用元件激活靶基因所必需„“。 端粒是一种维持染色体稳定的特殊核蛋白,端粒酶能在端粒的末端加上(,,?,,,,)来补偿,,,合成过程中端粒的渐进性丢失,在细胞凋亡和肿瘤形成中有重要作用,端粒酶主要的限制因素是有逆转录酶活性的,,,,,”,。约有,,,的肿瘤均表达,,,,,,作为肿瘤形成过程中的早期事件,,,,,,过表达常伴随较差的预后,因此,阐明,,,,,的调节机制对于理解肿瘤的形成至关重要。大量研究证实,,,,,,是;—,,;的靶基因, ,,也就是说,—,,;可通过,,,,,诱导细胞永生化。 成釉细胞瘤(,,,,,,,,,,,,,,,,)是常见的牙源性肿瘤,虽生长缓慢但呈局部浸润性生长,常易复发?,,有研究显示其端粒酶表达为阳性??。在牙源性角化囊肿中(,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,)端粒酶也有较高表达?,,而且复发倾向也较大,但原因不清。本研究通过观察;—,,, ,,,,在,,和,,,中的表达,探讨,—,,,在二者中表达的意义,及其与,,的临床生物学行为,病理分型间的关系,从而得到对临床诊断、治疗有意义的结果。并与相同病例中,,,,, ,,,,表达的情况相比较,分析,,中二者表达是否具有相关性,并探讨,—,,,对,,,,,的调节机制,进一步理解二者关系在,,的形成中所具有的作用。 材料与方法 一、研究对象: ?,,? 取中国医科大学附属第一医院病理科,,,,—,,,,年存档蜡块,共收集,,,,例(其中原发,,例,复发,,例,恶变,例),,,例,,,和,例,,,。,,中男:女为,,:,,,年龄,—,,岁(平均为,,(,岁)。发病部位:,,(,,(,,例)发生在下颁前(磨)牙区,,,(,,(,,例)发生在下领磨牙和升支区,还有,(,,(,铡)发生于上颌骨,,(,,(,例)发生于外周。每例标本均经两位病理专家重新确诊,其中滤泡型,,例,丛状型,,例。所有病历均有完整资料和连续随访,,,例复发,,中复发时间最长为,,年,复发次数最少,次,最多,次,其中,例为颌骨移植术后复发。,例转移病例中,例肺转移,,例区域淋巴结转移。所有标本均经,,,中性甲醛固定,常规石蜡包埋,涂,一氨丙基三乙氧硅烷(,,,,)防脱片剂,切片,,,,厚,在含,(,,的焦碳酸二乙酯(,,,,)的双蒸水中展片。 二、实验用品 原位杂交所用;—,,; ;,,,探针制备:采用定向克隆法,,,,,?酶切,,,扩增产物和,;,,,,载体,纯化后连接,转化,碱裂解法制备质粒,,,,用,,,,,酶切鉴定,筛 选,线性化质粒,用体外转录法制备地高辛标记的,(,,,全长;—,,, ,,,,探针。,,,,, ,,,,探针制备采用,,, ,、,,,, ,酶切和,,,,,,;,,,,,,,载体,其它与前述一致。试剂,,,,变性鲑精,,,,硫酸葡聚糖钠,购自,,,,,公司;蛋白酶,,马血清,,,,—,,,,,,,,;,公司分装;封口膜(,,,,,,,,,,);抗地高辛抗体购白,,;,, ,,,,,,,,,;, ,,,,,,,,,,,,;,,,,,二甲苯,乙醇,,,,,,,,,,,,;,,柠檬酸钠,,,,,,,,,,,(,,,:,,。,,:,:均购自北京化工厂;去离子甲酰胺购自北京鼎国生物技术有限责任公司,为,,,,,公司产品的分装;多聚甲醛购自天津泰德精细化学有限公司。 切片机(,,,, ,,,,,,,,,,;,德国),电热恒温培养箱(,,,,沈阳医疗器械厂),电热恒温干燥箱(中国厦门),,,,,,,,显微镜(,,,,,,,, ,,,,日本),全自动高温高压灭菌器(,,,,,,,,,,,,一,,,,,,,德国),台式离心机(,,,一,,,,,上海安亭科学仪器厂),电子精密天平,,,,—,(,,,)(,,,,,—,,奥豪斯国际贸易有限公司上海)。 三、实验方法: 原位杂交:标本均经,,,中性福尔马林固定,常规石蜡包埋;浓硫酸泡玻片,,,,冲洗,,,,。,烤片,,,,,,,处理成防脱玻片;在含,(,,,,,,(焦碳酸二乙脂)的双蒸水中展片,将其粘贴在防脱玻片上;,,,,烤片,,,切片二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水至水化,,(,,,,,, ,,,处理室温,,分钟,,,,洗,秒两次;,,,,,,,,蛋白酶,消化,,分钟,,,,洗,秒两次;,,多聚甲醛后固定,,分钟,,,,洗,分钟,次,,,,冰乙醇脱水,,秒,晾干;浦加杂交液,封口膜覆盖,置, ,,,,湿盒中,,,?孵育过夜(,,—,,小时);,,?的,×,,,中揭封口膜,,,分钟洗三次,,,,洗,秒,,,,,,, ,洗,秒,马血清封闭孵育,,分钟;滴加,,,,—,,,—,,,孵育,,,,,,,,, ,洗,,分钟三次,,,,,,,,〕,,洗,分钟两次;,,,—,,,,显色,蒸馏水冲洗,蛋白明胶封片,观察。 四、结果判定: 原位杂交:胞浆中出现紫蓝色颗粒为阳性着色。,,,,计(一),,,,一,,,计(,),,,,一罚埃ゼ疲梗罚埃ゼ疲灰跣远哉瘴瞻锥哉眨ú患犹秸耄粜远哉瘴谇涣郯?浚省?五、统计方法 采用,,,,,,(,统计软件,进行,,检验和,,,,,,,秩相关分析,,,,(,,具有统计学意义。 实验结果 一、,—,,; ,,,,在,,、,,,、,,,中的表达 ,例,,,中仅有,例为弱阳性,阳性表达率为,,(,,。,,例,,,中,,例为阳性,表达率为,,,,表达主要在基底层或副基底层中,以弱阳性和中度阳性为主(图,、,)。,,例,,中,,例为阳性,表达率为,,(,,,,—,,; ,,,,阳性表达主要在胞浆,以中度阳性和强阳性为主,位于牙源性上皮的外周柱状或立方状细胞及中心星网状层细胞浆中(图,、,),代表终末分化的角化退变样细胞及颗粒性变细胞为阴性或弱阳性(图,)。间质除炎性淋巴细胞有阳性表达,大部分无,—,,; ,,,,表达,但在成纤维细胞密集增生区或较活跃区可见,—,,, ,,,,阳性表达(,,例),间质中牙源性上皮剩余有,—,,; ,,,,,强阳性表达的有,例。,,,、,,,和,,三组中;—,,; ,冰,阳性表达差异有显著性(,,,,,(,,,,,,,(,,)(表,)。 我们还把,,按临床生物学行为分组,原发,, 例,阳性率为,,,;复发,,例,阳性率为,,(,,;恶变,例,阳性率为,,,,。从表达趋势看,复发、恶变组,,的,—,,, ,,,,的阳性率和表达强度均升高(,,,,,(,,,,,,,(,,)(表,)。 ?,,? 表, ;—,,; ,,,,在,,、,,,及,,,中的表达 ,,,(, ,,,,,,,,,, ,, ;—,,; ,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,, 注:各组与,比较,?:,,,(,,,一:,,,(,,;?以下各组与?组比较,,:,,,(,,,”:,,,(,,;,以下各组与,组比较,,:,,,(,,,,,:,,,(,,;,组与,组比较,,:,,,(,,,“:,,,(,,。 此外我们把,,中;—,,; ,,,,的活性表达与其临床发生的年龄、性别、部位、单囊、多囊及组织病理学分型(滤泡型、丛状型)进行了统计学分析,结果无显著统计学意义(,,,(,,)(表,)。 表, ,—,,; ,,,,表达与,,临床病理特征关系 ?,,? 二、,,,,, ,,,,在,,、,,,、,,,中的表达 ,,,,, ,,,,阳性表达部位在胞浆,,例正常粘膜上皮中,只有,例上皮基底层为弱阳性,阳性率为,,(,,。,,例,,,中,,例阳性表达,阳性率为,,(,,。表达的范围由基底层向副基底层细胞扩张,阳性以弱至中度阳性为主,强阳性有,例,角化层细胞阴性表达(图,)。,,例,,中阳性率为,,。,,,阳性表达主要以中、高度为主,阳性部位主要位于外周柱状或立方状细胞及散在或密集增生的多边形、梭形细胞中(图,、,),代表终末分化的角化退变样细胞及颗粒性变细胞为阴性。间质除炎性淋巴细胞有阳性表达,大部分无,,,,, ,,,,信号,但在有成纤维细胞密集增生区或较活跃区可见,,,,,阳性信号(,例),在问质中的牙源性上皮剩余有强阳性,,,,,表达信号的有,例。,,、,,,与,,,的表达分组有显著差异(,,,,(,,,,,,,(,,,)(表,),此外,,与,,,(,,,,,(,,,,,,,(,,,)、,,,与,,,(,,,,,(,,,,,,,(,,)比较均具有显著统计学意义。 把,,按临床生物学行为分组,原发,,例,阳性率为,,(,,,复发,,例,阳性率为,,(,,,恶变,例,阳性率,,,,。从表达趋势看,伴随着,,的复发与恶变,,,,,, ,,,,阳性率及表达强度有所增高(,,,,,(,,,,,,,(,,)(表,)。 表, ,,,,, ,,,,在,,、,,,及,,,中的表达 ,,,(, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,,, 注:各组与,比较,?:,,,(,,,一:,,,(,,;?以下各组与?组比较,”:,,,(,,,蝴:,,,(,,;,以下各组与,组比较,,:,,,(,,,一:, ,,(,,;,组与,组比较,?:,,,(,,,??:,,,(,,。 ?,,? 此外我们把,,中,,,,, ,,,,的活性表达与其临床发生的年龄、性别、部位及组织病理学分型进行了统计学相关性分析,无显著统计学意义(,,,(,,)。 三、;—,,; ,,,,与,,,,, ,,,,表达的相关性 对,,中,—,,; ,,,,与,,,,, ,,,,表达的相关性采用秩相关分析,得到,,,,,,,相关系数,,,,(,,,(,,,(,,),说明二者表达中度正相关。此外,原发和复发,,组中;—,,;与,,,,,表达均呈正相关关系,,,,,(,,,,,,(,,,,均,,,(,,),由于恶性组表达的一致性,阳性率均为,,,,(,:,),而未能比较。 ?,,?图, ,—,,, ,,,,在,,,基底层和棘层细胞浆中强阳性表达(原位杂 交,,,,×) ?,,?图, ,—,,; ,,,,在,,,基底层和棘层细胞浆中强阳性表达(原位杂交,,,,×) ?,,? ,,,,图, ,,牙源性上皮的外周柱状或立方状细胞及中心星网状层细胞浆中;—,,;强阳性表达(原位杂交,,,, ,)图, ,,牙源性上皮的外周柱状或立方状细黻中心里网状层细胞浆中;—,弘,,,,强阳性表达(原位杂交,,,, ,) ?,,?图, ,,终末分化的角化退变样细胞及颗粒性变细胞;—,,; ,,,,表达为阴性或弱阳性(原位杂交,,,,×) 图, ,,,基底层中,,,,, ,,,,表达强阳性,角化层细胞阴性(原位杂交,,,,×) ?,,?.
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