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毕业论文_牛血清白蛋白与核黄素荧光共振能量转移

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毕业论文_牛血清白蛋白与核黄素荧光共振能量转移毕业论文_牛血清白蛋白与核黄素荧光共振能量转移 牛血清白蛋白与核黄素荧光共振能量 摘要:本文采用荧光光谱法尝试在弱碱性溶液中以为给体为受体μL pH 7.43的Tris-HCl 缓冲液中,反应时间为8min,6.9×10-7mol/L CTMAB,核黄素的浓度为1.2×10-6,×10-5mol/L范围时,其线性回归方程Fa/Fd 0.0863+0.0884C 10-6 mol/L ,相关指数和检测限×10-8mol/L。该方法灵敏度高,为核黄素的测定提供了新的方法。 关键词荧光荧光共振能量转移 fluor...

毕业论文_牛血清白蛋白与核黄素荧光共振能量转移
毕业 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 _牛血清白蛋白与核黄素荧光共振能量转移 牛血清白蛋白与核黄素荧光共振能量 摘要:本文采用荧光光谱法尝试在弱碱性溶液中以为给体为受体μL pH 7.43的Tris-HCl 缓冲液中,反应时间为8min,6.9×10-7mol/L CTMAB,核黄素的浓度为1.2×10-6,×10-5mol/L范围时,其线性回归方程Fa/Fd 0.0863+0.0884C 10-6 mol/L ,相关指数和检测限×10-8mol/L。该方法灵敏度高,为核黄素的测定提供了新的方法。 关键词荧光荧光共振能量转移 fluorescence resonance energytransfer,FRET 是一种非辐射能量跃迁通过分子间的电偶极相互作用将给体激发态能量转移到受体激发态的过程FRET需要几个条件:供受体在空间上比较接近 1,10nm ;供体的荧光量子产率较高;供体的发射光谱与受体的吸收光谱要重叠;供、受体的发射光谱要足够分开[5, 6]。目前荧光共振能量转移技术已应用于无机离子的测定,8],维生素的测定[9,10],蛋白质 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 以及作为核酸荧光探针的研究等诸多领域以为给体为受体 实验部分 .1 仪器和试剂 F-4500型荧光分光光度计(日本日立公司配有R3896型红敏光电倍增管10mm 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 石英池);PHS-3CT型精密酸度计(上海大普仪器有限公司);mol/L 的BSA 标准溶液,6.0×10-4mol/L核黄素标准溶液,两种标准溶液均在0,4?冰箱中保存。实验所需浓度由此稀释而得。Tris,HCl,NaCl均为分析纯;水为双重蒸馏水。 1.2 实验方法μL pH 7.43的Tris-HCl缓冲溶液,60μL浓度为1.15×10-4 mol/L CTMAB溶液,100μL 浓度为1.0×10-4mol/L BSA,一定浓度的核黄素溶液,定容到10mL,放置8min,在荧光分光光度计上,以295nm为激发波长,测定Fa 和Fd,计算Fa/Fd,做标准工作曲线。 2 结果与讨论 2.1 FRET的构建 BSA与核黄素的荧光能量转移的首要条件就是给体的发射光谱和受体的吸收光谱要有相当程度的重叠[12]。在实验条件下,BSA的荧光峰 350 nm 与VB2的吸收峰 375nm 有较好的重叠。这样就为BSA和VB2的能量转移提供了前提条件。用波长为295nm去激发BSA和VB2的混合体系,既可以保证BSA有较大的发射,而VB2又不会被激发,使能量转移效果好。实验中观察到,在混合体系中,给体在295nm处的荧光峰比单独存在时明显下降,而VB2的荧光峰比单独存在时明显增强,这充分说明了在这两种物质间确实发生了荧光能量转移 图1 。加入NaCl溶液时对于体系,BSA荧光强度减小不明显,VB2 的荧光强度增大不明显,说明离子强度对体系影响不明显;加入CTMAB时BSA荧光强度减小明显,VB2 的荧光强度增大明显,且荧光峰位均没有变化,也就是说CTMAB对体系荧光共振能量转移的影响明显。 图 1 BSA-VB2荧光共振能量转移光谱图 1: BSA, 2: VB2, 3: BSA+VB2, 4: BSA+VB2+NaCl, 5: BSA+VB2+CTMAB 2.2 影响FRET的主要因素 考察酸度对体系的影响. 在激发波长为295 nm条件下,测定了不同pH的缓冲溶液对荧光强度的影响。 由实验结果发现,在BSA和VB2的浓度分别为2.0×10-6mol/L和1.2×10-5mol/L的条件下,pH 值为7.43,用量为80μL时Fa/Fd最大,所以本实验选用Tris-HCl缓冲溶液的pH值为7.43,用量为80μL,见图2和图3。 图2 PH值的影响 图3 缓冲溶液浓度的影响 考察CTMAB浓度对FRET体系的影响 在激发波长为295nm条件下,测定了不同浓度的CTMAB对荧光强度的影响,实验结果发现用6.9×10-7mol/L的CTMAB时Fa/Fd最大,所以本实验的最佳CTMAB的浓度为6.9 ×10-7mol/L,见图4。 图4 CTMAB浓度的影响 BSA: 2.0×10-6 mol/L; VB2: 1.2×10-5mol /L; Tris-HCl: 80μL pH 7.43 考察时间对FRET体系的影响 以激发波长为295 nm的波长激发,BSA和 VB2的浓度分别为2.0×10-6mol/L和1.2×10-5mol/L的条件下,测定不同时间对体系的影响,经实验发现在实验反应8min 时Fa/Fd最大(图5),所以本实验选用的反应时间为8min。 图5 反应时间对FRET的影响 BSA: 2.0×10-6 mol/L; VB2: 1.2×10-5mol/L; CTMAB: 6.9×10-7mol/L; Tris-HCl: 80μL; pH 7.43 考察BSA浓度对FRET体系的影响 在10 mL比色管中加入80μL pH 7.43的 Tris-HCl 缓冲溶液,60μL浓度为1.15×10-4 mol/L的CTMAB溶液,200μL浓度6.0×10-4mol/L的VB2,一定量的BSA溶液,定容到10mL,放置8min,在荧光分光光度计上,以激发波295nm 测Fa和Fd,如图6所示,实验数据 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明当BSA的浓度增大时,VB2 的荧光强度逐渐增强,说明在BSA与VB2 之间确实发生了共振能量转移;当BSA的浓度大于1.0×10-6 mol/L时继续增大BSA的浓度对VB2 的荧光强度没有明显的效果。因此本文的BSA的浓度为1.0×10-6 mol/L。 图6 BSA浓度的影响 From1 to 10, the concentration of BSA was 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2, 1.4, 1.6, 1.8, 2.0×10-6mol/L, VB2: 1.2×10-5mol/L, CTMAB: 6.9×10-6 mol/L, PH 7.43. 考察VB2浓度对FRET体系的影响 在10 mL比色管中加入80μL pH 7.43的Tris-HCl 缓冲溶液,60μL浓度为1.15×10-4 mol/L CTMAB溶液,100μL浓度1.0×10-4mol/L核黄素,一定量的核黄素溶液,定容到10mL,放置8min,以激发波长295nm测Fa和Fd,如图8所示。当VB2 的浓度由1.2×10-6 mol/L逐渐增大到1.2×10-5 mol/L时BSA的荧光强度逐渐降低,核黄素VB2 的荧光强度逐渐增大,也就是说随着VB2 的浓度逐渐增大,给体和受体间的能量转移效率不断提高,且Fa/Fd与VB2 的浓度之间存在良好的线性关系(图8)。 图7 VB2浓度的影响 From 1 to 10, the concentration of VB2 was 1.2, 2.4, 3.6, 4.8, 6.0, 7.2, 8.4, 10.8, 12.0×10-5mol/L, BSA: 1.0×10-6 mol/L, CTMAB: 6.9×10-6 mol/L, PH 7.43. 图8 工作曲线 牛血清白蛋白周围VB2分子数目的确定 设1个牛血清白蛋白 给体,用D表示 可同时与n个VB2 受体,用A表示 分子发生有效的荧光共振能量转移,则它们之间的关系可表示为:D,nA ,Dan,若固定牛血清白蛋白的浓度,改变VB2的浓度,随着VB2浓度的增加,由于荧光共振能量转移,牛血清白蛋白的荧光强度不断降低,而的荧光强VB2 浓度不断增强。当这种此消彼涨的变化进行到一定程度后,若VB2继续增加的浓度,由于“配位”饱和,则牛血清白蛋白和VB2的荧光强度不再发生明显的改变。以荧光强度为纵坐标,VB2和牛血清白蛋白的浓度之比为横坐标作图,采用两边切线外推,交点的横坐标即为n值。本文分别以VB2和牛血清白蛋白的荧光强度对CVB2/CBSA作图 图9 ,交点即n值约为10,表明在胶束介质中,能量 转移是在1个给体与10个受体分子之间进行的。 图9 荧光强度与CVB2/CBSA之间的函数关系 BSA:1.0×10-6mol/L, CTMAB: 6.9×10-7 mol/L, VB2:1.2, 2.4, 3.6, 4.8, 6.0, 7.2, 8.4, 10.8, 12.0 ×10-6mol/L, pH 7.43. 3 结论 研究了在CTMAB胶束介质中,以牛血清白蛋白为给体,VB2为受体的能量转移体系。并考察了牛血清白蛋白的浓度及体系酸度等对测量结果的影响。基于一定浓度范围内,建立了能量转移在偏碱条件下测定的方法。该方法可用于偏碱条件下能量转移的测定,结果令人满意,拓宽了能量转移的应用范围。 参考文献2009, 44 13 : 78-80. [6] 刘玲芝, 刘志洪, 何治柯, 等. 量子点FRET的新发展[J]. 化学进展, 2006, 18 2 : 45-48. [7] Li J, Mei F, Li W Y, et al. Spectrochim. Acta . 2008, 70, 811. [8] 王富强, 李亚明, 刘军等. 含均二苯乙烯荧光探针的合成及其对金属 离子的识别研究[J]. 化学学报, 2008, 66 1 :103-107. [9] Bhattar,S.L., Kolekar,G.B., Patil,. Fluorescence resonance energy trans
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