叶绿素含量的测定
方法
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叶片叶绿素含量与光合作用密切相关，叶绿素含量的测定无论是在生理上 ，还是在 选育品种以及抗性研究等方面都很有必要。叶绿素含量的经典测定方法是光电比色法，即用光 电比色计以无机有色溶液为
标准
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进行比色测定。该方法不仅要配制无机标准溶液，而且不能 对溶液中不同色素分子进行定量测定；分光光度法则不需配制标准溶液，又可对溶液中不同 色素分子进行定量测定，已得到广泛应用。
分光光度法测定叶绿素含量，就是利用叶绿素 a和叶绿素b吸收光谱的不同，测定各 特定峰值波长下的光密度，再根据色素分子在该波长下的消光系数，计算出浓度 。 叶绿素 a、叶绿素b的丙酮溶液在可见光范围内的最大吸收峰分别位于 663nm、 645nm处，同时已知叶绿素a和叶绿素b在663nm处的消光系数分别为82.04和9.27；在645nm处的消光系数分别为16.75和45.60。这样叶绿素a和叶绿素b的浓度与他们在663nm、645nm处的光吸光密度的关系可用下式表示：
D
=82.04C+9.27C 663ab
D=16.75C+45.60C645ab
式中D 和D分别为叶绿素溶液在波长663nm、645nm处的光密度；C 、C分别663645ab
-1为叶绿素a和叶绿素b的浓度，单位g. ?L。解方程可得到：
C=12.7D663-2.59D645 a
C=22.9D645-4.67D663 b
C=20.3D645+8.04D663 a+b
-1C ,C 分别为叶a和叶b的浓度，C为叶a和叶b的总浓度，单位为mg?L aba+b
所测材料单位重量或单位面积的叶绿素含量可按下式进一步计算：
-1-2叶绿素含量（mg?L或mg?dm）= C*V
A*1000
-12式中C：叶绿素浓度（mg?L）；V：提取液总体积（ml）；A：叶片鲜重（g）或面积（dm）
：丙酮：乙醇按1：1体积混合成浸提液
：分光光度计
-1 -1 -1
：丙酮乙醇混合液法
1．将丙酮、无水乙醇按1：1比例配成混合浸提液 。
-2 2．称取 0.1g或用打孔器打取总面积为0．Ldm的叶圆片，剪成细丝置于盛混合液的试管
中， 加塞置于暗处，于室温（10-30 C）条件下浸提。每隔一定时间观察浸提情况，以材料
完全变白为准 。用混合浸提液作空白调零，测定663nrn、645nrn处测光密度（一般隔夜测定）。
3.按以上方法计算叶绿素含量 。
2001
浙公网安备 33021202002483