SephadexLH-20中药生物技术S0620336刘利基本内容1结构2性质3应用原理使用方法1一般使用过程2溶剂选择3再生方法4污染处理方法注意问
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基本内容1.SephadexLH-20结构特点SephadexLH-20是SephadexG-25经羟丙基化处理后得到的产物。葡聚糖凝胶中的葡萄糖部分与羟丙基结合成醚键形式。亲脂性的羟丙基是同时具备吸附性层析和分子筛功能的独特层析介质。交联葡聚糖凝胶的化学结构主要性能参数分离范围（球蛋白）100-4000颗粒大小（微米）20-150应用范围胆固醇，脂肪酸，激素，维他命，天然产物PH稳定性2-13最高流速（厘米／小时）5003应用原理凝胶层析的分子筛原理l分子大小不同混合物上柱；2洗脱开始，小分子扩散进人凝胶颗粒内，大分子被排阻于颗粒之外；3大小分子分开：4大分子行程较短，已洗脱出层析柱，小分子尚在进行中使用反相溶剂洗脱，极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。使用方法制备凝胶悬浮液装柱平衡上样洗脱再生污染处理制备凝胶悬浮液SephadexLH-20在使用之前必须进行溶胀。在室温下，将凝胶溶胀于层析溶剂中至少三小时。在溶胀的过程中，要尽量避免过分搅拌，否则会破坏球形胶粒，且要避免使用磁力搅拌器将干胶往水里加，边加边搅，以防凝胶结块，然后放到沸水浴中加热接近100℃，几个小时就可以使其溶胀，还可起到除去颗粒内部气泡和杀菌作用。使溶胀胶体积沉淀之后占总体积的75%，上层溶剂占25%，这时，悬浮液从一个容器倒入另一容器时胶粒可移动。LH-20在不同溶剂中的溶胀性能溶剂 溶胀体积溶剂 溶胀体积ml/g干胶 ml/g干胶二甲亚砜 4.2-4.4 乙醇 3.2-3.6吡啶 4.0-4.3 异丙醇 3.1-3.5水 3.8-4.2 四氢呋喃 3.1-3.5甲醇 3.7-4.2 二氯乙烷 3.5-4.0丙醇 3.4-3.8 甲苯 1.5-1.6一般是在柱内先装入约1/3高度的水或缓冲液，然后将溶胀好的凝胶在搅拌成稀浆的情况下慢慢倒入柱内，使其自然沉降。如此连续操作，可以得到一个均匀的柱床。平衡新柱装好后，要用洗脱缓冲液平衡，一般用3～5倍体积的缓冲液在恒压下流过床。上样前，用洗脱液平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为止。如改变溶剂应该注意凝胶在新溶剂中的溶胀性质，并根据性质确定柱高调节器的位置，如使用相同的溶剂，在以后的层析中柱平衡可以省略。洗脱所有的缓冲液都应该离心或经过0.45um的膜过滤以除去杂质。洗脱流速应根据情况而定，最大张性流速约12cm/min（反压1.5ba），建议流速为1-10cm/min。流速不宜过快且要稳定。洗脱液的成分也不应改变，以防凝胶颗粒的胀缩引起柱床体积变化或流速改变。溶剂的选择主要考虑能溶解样品、湿润凝胶、不腐蚀色谱仪、纯度高、毒性低、溶解性能好，能溶解多种高分子、粘度尽可能低。适用溶剂：满足上述条件，根据分离要求选择即可，如：水DMF丙酮乙醇乙酸乙酯甲醇氯仿THF正丁醇二氯乙烷常用溶剂：水 甲醇 丙酮 乙酸乙酯 二氯甲烷甲醇-水氯仿-甲醇用低级醇为溶剂时，对芳香族、杂环族化合物仍有吸附作用。但用氯仿时则可去除对上述化合物的吸附作用，而对含羟基与羧基的化合物却有吸附作用。再生方法凝胶再生通常是先用2-3个柱体积的洗脱液进行清洗，如更换洗脱液，则需要重新平衡在洗脱过程中，所有组分一般都可被洗脱下来，所以装好柱后，可反复使用，无需特殊的再生处理。多次使用后，凝胶颗粒可能逐渐沉积压紧，流速变慢。这时只需将凝胶自柱内倒出，重新填装。或使用反冲法，使凝胶松散冲起，然后自然沉降，形成新的柱床，这样流速会有所改善。污染处理方法SephadexLH20柱子被弄脏了，大多数情况下是由于样品没滤,将柱头堵住,或由于样品的死吸附(一般很少发生),使柱子的柱头部分污染。一般的处理是将被污染的柱头部分的填料弃去,具体做法很简单,只将被污染的柱头部分的填料用玻棒轻轻搅起,倒掉即可。因为是整个柱子被污染，所以污染物一定不会完全死吸附在柱上（如果完全死吸附在柱上，污染物一定会只在柱头部分），所以用合适的溶剂一定可以将之洗下来。NaOH-NaCl水溶液配法：8gNaOH,30gNaCl，1000ml水。保存方法暂时不用时可水洗-含水醇洗（醇的浓度逐步递增）-醇洗，最后泡在醇中贮于磨口瓶中备用。如长期不用时，可以在以上处理基础上，减压抽干，再用少量乙醚洗净抽干，室温充分挥散至无醚味后，60-80度干燥后保存。THANKYOU
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