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功能因子冬虫夏草多糖的研究开发.pdf

功能因子冬虫夏草多糖的研究开发.pdf

上传者: chemidoctor 2012-07-26 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《功能因子冬虫夏草多糖的研究开发pdf》,可适用于工程科技领域,主题内容包含《中国食品添加剂ChinaFoodAdditivNo.一乙功能因子冬虫夏草多糖的研究开发/袁建国程显好、侯永勤孙玲庄志发(山东省食品发酵工业研究设计符等。

《中国食品添加剂ChinaFoodAdditivNo.一乙功能因子冬虫夏草多糖的研究开发/袁建国程显好、侯永勤孙玲庄志发(山东省食品发酵工业研究设计院济南)、)摘要:本文对冬虫夏草多糖的组分组成、理化性质、结构连接特性、毒理学性质及药理活性进行了研究并确定了可作为保健食品中功能因子的虫草多糖的生产工艺。关键词:冬虫夏草虫草多糖功能因子~r一r一V、f安录品l前言保健食品发展到今天已经过三个阶段第三代保健食品是最新一代保健食品它区别于第一、二代保健食品的一个显著特点是须明确其所含的功能因子的结构、含量及其作用机理。目前市场上第三代产品占极少数而且功能因子多数从国外引进缺乏我们自己的系统研究工作。冬虫夏草作为我国传统名贵的强壮滋补品在历史上很早就引起重视和应用近年来由于国家的重视和商业经济的需求对冬虫夏草的研究、生产和应用取得了迅速的发展。虫草多糖作为虫草中含量最高的生理活性物质也是其主要活性成分之一。本文对冬虫夏草多糖进行深入系统的研究旨在开发出可用于保健食品生产的功能因子对冬虫夏草多糖的组分组成、理化性质、结构连接特性、毒理及药理活性以及虫草多糖生产工艺进行了研究。材料与方法.原料冬虫夏草菌丝体由山东智灵生物工程有限公司提供所用其它药品为分析纯药品。.影响冬虫夏草多糖提取的因素采用正交试验测定了温度.盐浓度、加水量、提取时间个因素对虫草多糖提取的影响.确定了虫草多糖提取的工艺。.虫草多糖的分离纯化一..乙醇分级分离用%的虫草多糖溶液离心去沉淀以无水乙醇分级沉淀虫草多糖。当乙醇浓度达到O%时开始有大量沉淀产生将沉淀离心、干燥制备出来。继续加乙醇依次使乙醇浓度递增%每一级沉淀都离心制备出来直至沉淀完全。乙醇浓度达到%时基本沉淀完全共分出个分级组分。对各级的乙醇沉淀物以SephadexGl柱层析检测分子量是否均一结果只有%乙醇浓度下沉淀的多糖组分为单一峰即分子量基本均一定名为PCI其它个组分皆为多峰是多组分的混合物。所以将不纯的个分级组分合并后(PCⅡ)进行进一步的分离纯化。..PCⅡ的DEAEBiogelA层析将PCⅡ多糖组分进行了初步的SephadexG一柱层析测定其所含成分的复杂性以.%的溶液上柱蒸馏水进行柱平衡以硫酸一苯酚法检测洗脱液。结果表明PCⅡ的多糖组分非常复杂单通过分子量火小对其分离纯化很因难。多糖组分都带有肽链带有电荷所以选用DEAEBiogelA柱层析进行进一步分离纯化。PCⅡ的水溶液以.cm的DEAEBiogelA柱层析分离以蒸馏水维普资讯http:wwwcqvipcom《中国食品添加剂》ChinaFoodAdditiveslNo.进行柱平衡。先以蒸馏水洗脱.然后以.M、.M和lM的NaCl和lMNaOH洗脱含糖成分。蒸馏水洗脱成分再进行.cm的SephadexG一柱层析分成两个组分第一个峰收集并制备出来的为PCAI第二峰制备出的为PCAIT。虫草多搪(精品)I乙醇分缴沉淀PCI.‘一LPCⅡ台糖部分’PCAI含糖部分.MNaC洗脱物经SephadexG一柱层析分成两个峰前一个峰制备出的样品定名为PCBI后一个峰为PCBⅡ。IMNaCl洗脱物也经SephadexG一柱层析分成两个峰前一个峰制备的样品定名为PCCI后一个峰为PCCII。按以下流程共分离出个组分:MNaCl洗脱含糖部分一Scpha。dcxG晰厂一肺PCAⅡPCBIPCBⅡPCCIPCCⅡ.虫草多糖的理化性质研究..纯度鉴定对分离纯化出的种多糖组分进行电泳和柱层析鉴定其纯度以不连续盘状凝胶系统进行电泳蛋白质染色采用考马斯亮蓝G改良法多糖染色以D.Racusen法。根据所分离样品的分子量大小差异选用种凝胶进行柱层析以鉴定样品的均一性。PCI和PCAI进行SepharoseB柱层析PCBI和PCCI进行SephadexG一柱层析PCAⅡ、PCBⅡ和PCCⅡ进行SephadexG一柱层析。..分子量测定以柱层析法测定各样品的分子量其中PCB工、PCCI、PCAⅡ、PCBⅡ以.cm的SephadexG一柱层析测定以蓝葡聚糖和铬酸钠上柱测定其外水体积和内水体积以Dextran、T、TIO及Dextrinl为标准分子量作标准曲线。PCI和PCAI分子量太人采用SepharoesB柱层析测定。..样品【}】糖含量与蛋白含量的测定以硫酸一苯酚法测定样品中的糖含量以甘露糖作标准曲线以Folin一酚法测定样品中的蛋白含量以牛血清蛋白做标准曲线。..多糖样品中的单糖组成测定采用纸层析定性测定了样品的单糖组成以气相色谱分析法定性和定量测定了单糖组成及比例。..儿种多糖组分的氨基酸成分分析对几种主要的大分子多糖组分PCAI、PCBI和PCI进行酸水解后测定了其氨基酸组成。..红外光谱分析对样品PCI、PCAI、PCBI、PCAII、PCBⅡ、PCCⅡ进行KBr压片测定红外吸收光谱图。..核磁共振分析对几种水易溶的样品PCAIPCBIPCAIIPCBII进行了核磁共振分析。条件:溶剂Do温度管径mm参考标准DSS观察核”C观察频率MHz观察道偏置KHz数据点一l一维普资讯http:wwwcqvipcom《申国食品添加剂》ChinaFoodAdditivesNo.K累加l万次谱宽,irz。.虫草多糖急性毒性试验口服给药的急性毒性试验采用体重lg小鼠只雌雄各半用虫草多糖药液.g/ml按.ml/唣灌胃于给药当日灌胃次连续观察天。测试冬虫夏草多糖对小鼠经口灌胃急性毒性反应.虫草多糖对小白鼠免疫功能的影响测定了复合虫草多糖、虫草多糖PCAI、PCBI对小鼠单核吞噬细胞系统碳粒廓清能力的影响及对小鼠免疫器官重量的影响以探讨复合虫草多糖及经分纯后的虫草多糖对小鼠免疫功能影响的差别。.虫草多糖的抑瘤作用研究了虫草多糖对小鼠肿瘤S的抑制作用及虫草多糖与环磷酰胺合用对小鼠移植肿瘤S的影响。.虫草多糖的中试生产通过反复提取实验采用了以下生产工艺:加lO倍水提取液()加倍水提取液()加倍水/提取液()原料过滤残渣过滤/残渣过滤hhlh残渣提取液合并后浓缩、酒精沉淀、干燥结果与讨论.温度、盐浓度、加水量、提取时间个因素对虫草多糖提取的影响正交分析表明温度以最佳.加水倍数以倍最佳盐浓度以最佳时间以h最佳.一次性提取提取率最大达%.多糖组分的颜色及溶解性(见表).组分PCAI、PCBI、PCI、表多糖组分的物理性状PCAⅡ、PCBⅡ及PCCⅡ电泳结果结果表明个组分都为单一带而且糖染色和蛋白染色区带位置相同表明样品达到电泳纯PCI、PCAI采用SepharoseB柱层析PCBI和PCCI采用SephadeGl柱层析PCBⅡ、PCAⅡ、PCCⅡ采用SephadexG一柱层析结果表明各组分达到层析纯为均一组分.分子量测定结果为PCAI.万PCI万PCBI万PCCI.万PCAⅡl.PCⅡPCCⅡ分子量太小未能测出.各组分糖含量与蛋白含量结果(见表)表样品中糖含量和蛋白含量.纸层析结果结果表明PCAI和PCBI含甘露糖和半乳糖PCI、PCAⅡ、PCB则含有种单糖甘露糖、半乳糖和葡萄糖一一气相色谱结果表明PCI含甘。露糖、半乳糖、葡萄糖摩尔比l:.:.PCAI含甘露糖和半乳糖.摩尔比l:lPCBI含甘露糖和半乳糖摩尔比为l:维普资讯http:wwwcqvipcom《中国食品添加剂ChinaFdAdditiveslNo.PCA含露糖、半乳糖、葡萄糖摩尔比为:.:.PCBⅡ含露糖、半乳糖、葡萄糖摩尔比为:.:.。.PCI、PCAI、PCBI三种组分的氨基酸组成(见表).红外光谱分析和核磁共振谱图解析表PCAI、PCBI和PCI的氨基酸组成注:氨基酸含量单位为每g样品中氨基酸的毫克数。PCAI的结构连接点为l一连接的吡喃甘露糖构成主链侧链由单一的或多个单位的呋喃半乳糖组成侧链与主链连接点有l一、l一、l一等连接方式而且侧链偶尔夹杂一些吡喃半乳糖与主链以l一、l一方式连接。PCBI的结构特点是l一连接的吡喃甘一露糖构成主链侧链主要由呋喃半乳糖构成也有少量吡喃甘露糖和吡喃半乳糖构成的侧链。主链峰和侧链峰的相对高度差别不太显著表明有许多侧链重复性很高即分子中分枝很多PCBI为高度分枝的半乳露糖。PCAⅡ含有个单糖分子即有吡喃形式的又有呋喃形式的它们是分子的甘露糖分子的半乳糖和分子的葡萄糖构成非一条链连接的杂多糖。PCBⅡ中糖的结构特点是分子的单糖(分子甘露糖、分子半乳糖、分子葡萄糖)以l一方式线性连接起来至于个单糖分子的排列次序尚不能分析清楚。.虫草多糖的急性毒性实验结果按虫草多糖最高浓度%及小鼠最大灌胃容量.ml/lO计算灌胃剂量为.g/l(g只小鼠天内无一中毒及死亡可以认为LD大于mg/kg。根据急性毒性分级标准为无毒物质。.虫草多糖对小鼠单核吞噬细胞系统碳粒廓清能力的影响试验结果虫草多糖PCBImg/kg、复合虫草多糖mg/kg、ip可明显提高正常小鼠血中碳粒廓清速度(P<.)虫草多糖PCAImg/kg、复合虫草多糖.mg/kg有提高正常小鼠血中碳粒廓清速度的趋势。虫草多糖对小鼠免疫器官重量的影响试验结果表明虫草多糖PCAI、PCBI及复合虫草多糖.mg/kg均能程度不同的增加正常小鼠胸腺和脾脏的重量。本研究结果显示虫草多糖及分离纯化的虫草多糖PCAI、PCBI可使中枢免疫器官胸腺重量明显增重有的报道称其能使小鼠胸腺缩小由此可以推论冬虫夏草内含有使胸腺重量增加和缩小的两种组分使胸腺增重的有效赓分由本实验可以确定为虫草多糖导致胸腺缩小的成分有待于进一步分离纯化深入探讨。本实验对虫草多糖可增加胸腺重量这一发现可充分地完善虫草抑瘤作用机理。因老年人血清中胸腺激素水平降低可能是老年人易患自身免疫性疾病和肿瘤的重要原因之一。因此虫草多糖可使胸腺增重这一发一l一维普资讯http:wwwcqvipcom《中国食品添加剂》ChinaFoodAdditiveslNo.现对于冬虫夏草用于治疗肿瘤有着极高的学术价值和应用价值有必要进一步深入研究探讨。.l复合虫草多糖的抑瘤试验结果虫草多糖对小鼠S劬有明显的抑瘤作用抑瘤率可达.%与CTX合用抑瘤呈协同作用并能减轻用CTX对免疫功能的损伤.与CTX合用具有增效减毒的作用。根据我国中草药抑制实体瘤疗效评价标准实体瘤疗效以瘤重抑制百分率表示抑制率大于%合成药大于%并经统计学处理有明显差异时而认为系有苗头的抗肿瘤药物。目前既能抗癌又有增加机体特异性和非特异性免疫的单一成分的药物极少因此很有必要对虫草多糖进一步从化学及药效等方面深入探讨和研究。.中试生产结果结果表明虫草多糖提取收率可达到%以上。根据虫草多糖的药理试验结果每人每天食用.g就可产生免疫调节作用。虫草多糖无色、无味、稳定性好其水溶适合在各种形式的保健食品中应用。StudyonPlysaccharidefromCordycepsasFunctionalFactorYunnJianguoChengXianhaoHouYongqinSunLingZhuangZhifa(ShandonoFood&FermentationResearr.h&InstituteJinan)ABSTRACT:Thecomponentphysicalchemicalpropertiesstructurepropertyandtoxicologicpharmacodynamicpropertiesofpolysaccharidefromcordycepswerestudiedandthetechologicalprocessforproducingpolysaccharidesfromcordycepsasafunctionalfactorhasbeenestablished.KEYWORDS:cordycepssinensispolysaccharidefromcordycepsfunctionalfactor几种抗氧化剂对鲲鱼油的抗氧化作用的研究一i一直李浩明E丽王建国刘玉申(青岛大学天然色素研究所青岛)鲞(青岛大学化学系v/燕、青岛)中摘要:研究了维生素E(使用浓度为O.%.%TBHQ(叔丁基对苯二酚.使用浓度为O.%、O.O%)和生姜油溶性提取物(使用浓度为O.%.O.%)对鲲鱼油的抗氧化作用。结果表明.浓度为O.%的维生素E的抗氧化效果最好。关键词:鱼油.抗氧化刺一一一一牡妻E丁.蜘睡物色定白才维普资讯http:wwwcqvipcom

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