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番鸭呼肠孤病毒病病原学研究.pdf

番鸭呼肠孤病毒病病原学研究.pdf

上传者: luvie2011 2012-07-25 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《番鸭呼肠孤病毒病病原学研究pdf》,可适用于人文社科领域,主题内容包含生物技术通报BIOTECHNOLOGYBULLETIN综述与专论年第期收稿日期:基金项目:福建省科技厅农业科技攻关重点项目(N)作者简介:潘晓斌()符等。

生物技术通报BIOTECHNOLOGYBULLETIN综述与专论年第期收稿日期:基金项目:福建省科技厅农业科技攻关重点项目(N)作者简介:潘晓斌(),男,在读硕士研究生,从事动物病毒学研究Email:qqcom通讯作者:胡奇林(),Email:hqlsinacom番鸭呼肠孤病毒病,又称“肝白点病”,“花肝病”,是一种以软脚为主要特征的高发病率、高致死率的烈性传染病。该病发病于~d龄番鸭,尤以~d龄为甚。发病率为~,病死率达~。发病番鸭临床上表现为精神萎靡,拥挤成群,食欲下降,羽毛蓬松、直立且无光泽,呼吸急促,跛行,粪便呈绿色或白色。病程为~d,死亡高峰为发病后~d,死前以头部触地,部分鸭头向后扭转。病死番鸭肝脏、脾脏肿大、并出现大量白色针尖状坏死点,胰脏、肾脏出血,纤维素性心包炎,多数鸭还出现脑壳膜出血和肺部出血。病鸭耐过后生长发育不良,成为僵鸭。该病首次报道于南非(年),年法国学者Gaudry首次从患病番鸭中分离到番鸭呼肠孤病毒,随后该病在以色列、意大利、德国等国爆发~。自年以来,该病已相继在我国福建、广东、广西、浙江等省、自治区爆发,给番鸭业造成了重大的经济损失。病毒特性目前已证明,番鸭呼肠孤病毒为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属Ⅱ亚群成员。病毒核酸为dsRNA,病毒粒子呈球形或近球形,直径nm~nm,正二十面体,立体对称、无囊膜,有可见的双层衣壳结构。病毒对有机溶剂不敏感,如乙醚作用h、氯仿作用min、甲醛处理min、胰蛋白酶和处理h对pH、温度及紫外线敏感,如pH、处理min、处理h、处理h和紫外线照射。病毒对鸡、鸭、鸽和人型红细胞无血凝性。该病毒可在番鸭胚成纤维细胞(MDEF)和鸡胚成纤维细胞(CEF)中增殖传代,但国内株与国外株番鸭呼肠孤病毒病病原学研究潘晓斌,胡奇林陈少莺林锋强(福建师范大学生命科学学院,福州福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福州)摘要:番鸭呼肠孤病毒(Muscovyduckreovirus,MDRV)为番鸭“肝白点病”的病原体。该病毒自首次从发病番鸭中分离出来后,国内外各学者相继对各自分离株进行了研究,并在病毒特性、病毒基因组及病毒编码蛋白等方面取得了一定的进展。就该病毒的特性、基因组及其编码蛋白的研究作一综述,并指出了今后的研究重点。关键词:番鸭呼肠孤病毒基因组蛋白EtiologicResearchofMuscovyDuckReovirusDiseasePanXiaobin,HuQilinChenShaoyingLinFengqiang(CollegeofLifeSciences,FujianNormalUniversity,FuzhouHusbandryandVeterinaryResearchInstitute,FujianAcademyofAgriculturalScineces,Fuzhou)Abstract:Muscovyduckreovirus(MDRV)isthepathogenof“muscovyduckliverwhitespotsdisease”SinceMDRVwasisolatedin,thepathogeniccharacteristicsofthedifferentisolatesofMDRVhavebeeninvestigatedbyhomeandabroadscholar,andgainedmanyachievementsintheviruscharacteristics,genomeandtheirencodingproteinsetcThispapermainlyreviewedtheprogressesinMDRV’sviralcharacteristic,genomeandthefunctionallyimportantproteins,andpointedoutsomeimportantworksinthisareawhichmightneedtobecarriedoutinthenearfutureKeywords:MuscovyduckreovirusGenomeProteins年第期在细胞病变上有所差异。Malkinson等证明DRV能在番鸭胚成纤维细胞(MDEF)上增殖,其细胞病变为细胞融合和崩解胡奇林等证明DRV株等能在番鸭胚成纤维细胞和鸡胚成纤维细胞上繁殖并能在MDEF形成包涵体,病变为细胞圆缩、崩解,而无细胞融合现象,。病毒还能在BHK和Vero细胞上繁殖,并产生细胞病变,即细胞圆缩、崩解,但不能在PK和Marcle上繁殖。病毒接种~日龄番鸭胚,一般在~d后番鸭胚死亡。番鸭胚经卵黄囊、绒毛尿囊膜和尿囊腔接种病毒后,胚体枕部、颈部、背部出血。部分鸭胚肝、脾上有灰白色小点。死胚胚体呈紫色,尤以下颌部、背部、双翅及腿部皮肤更为严重,尿囊膜混浊增厚,尿囊液清澈。病毒基因组番鸭呼肠孤病毒核酸为dsRNA,由分节段的个基因片段组成。与禽类呼肠孤病毒(Avianreovirus,ARV)相似,根据SDSPAGE电泳迁移率的不同,可将其分为组:个大基因片段(L、L、L)、个中基因片段(M、M、M)、个小基因片段(S、S、S、S)。由于分节段的RNA病毒存在着频繁的基因交换和重组(重组率高达~)及不同病毒株编码同一蛋白的基因片段存在差异,便可导致个别片段的电泳迁移位置呈多态性,也使不同病毒株编码同一蛋白的基因片段在电泳条带的顺序发生互换。如SDSPAGE电泳迁移率分析表明,编码σB蛋白的基因的迁移率在某些毒株中有所差异,在DRV株中其基因片段处于S位置,而在DRV株中为S位置。另外,胡奇林等证实了DRV株M基因片段的迁移率与ARVS株有一定的差异,而在DRV及DRV中,M的迁移率与ARVS株具有一定的相似性。这些差异是否是由基因重组或是由RNA聚合酶低保真度所导致的某些基因高频率突变引起的还有待于进一步的研究。目前已有S组基因(S、S、S、S)及M组基因(M、M、M)共个基因片段得到克隆分析,。法国分离株DRV、DRVS组基因分析表明:这个基因在′端存在保守的七聚体GCTTTTT,′端存在保守的八聚体TATTCATC(除S基因的′末端仅一个核苷酸的差异(TACTCATC)外)。该保守的′TCATC序列存在于所有的正呼肠孤病属中,为正呼肠孤病毒属的标志性特征。较大的个S基因(S、S、S)为单顺反子,全长分别为bp、bp、bp小基因片段S为一个双顺反子,全长bp,包含两个重叠的开放阅读框ORFs(ORF、ORF)。M基因片段长为bp,与ARV的同源性分别为~,只含一个开放阅读框M基因长为bp,与ARV同源性分别为~M基因长为bp,含有与ARV共同的′GCUUUU,′CUACU。M、M基因的′末端分别为′ACUUUU,′UCUUUU。而在ARV中′端则为′GCUUUU。M组基因含有与ARV共有的′保守末端UCAUC′,这一保守的五聚体在病毒复制过程中起着重要的作用。目前国内都以DRV株及DRV株为参考,对各自分离的毒株进行研究。这些研究表明,国内DRV分离株与法国分离株有较高的同源性,均大于与ARV同源性较低,一般均在以下。胡奇林等克隆并分析了DRV株S的部分片断和S片断编码σC蛋白的基因,结果表明:DRV株S基因片断与番鸭呼肠孤病毒法国株S基因片断的同源性为、与鸡关节炎病毒相关基因同源性为S片断编码σC蛋白基因的核苷酸与DRV株的同源性为、与鸡关节炎病毒相关基因的核苷酸未发现同源性。吴宝成等分析了DRVYB株S组基因,结果显示:DRVYB的S组的个基因片段S、S、S、S与DRV株的核苷酸序列同源性为、、和。Yunzhang等分析表明,DRVSσB、σC蛋白基因核苷酸序列与DRV同源性分别为、~,而与ARV同源性仅有~、~M基因核苷酸序列与DRV株相应基因有的同源性,与ARV的同源性分别为~,。以上分析表明,各分离株间,其编码σC蛋白基因的核苷酸序列都表现出较高的同源性,具有一定的保守性,这可能跟σC蛋白的功能有很大关系。作为病毒外壳蛋白,σC蛋白基因上的任何重要变化都可引起其氨基酸序列的改变,进而导致病毒自身特潘晓斌等:番鸭呼肠孤病毒病病原学研究生物技术通报BiotechnologyBulletin年第期性发生变化。病毒蛋白及其功能研究病毒编码个蛋白,包括构成衣壳结构的个结构蛋白和个非结构蛋白,共分为λ、μ和σ三组。DRV蛋白组成及功能研究目前仅见于S组基因及M组基因所编码的蛋白,而且对其中的部分蛋白的研究也还处于推测阶段,有待于继续深入研究。σC蛋白由S基因ORF编码,氨基酸序列及结构功能分析表明,DRVσC蛋白是由位于N末端的纤维状尾部、C末端部位的球状头部及连接尾部和跨β区域的羧基末端序列所形成的螺线管颈部组成。为一弱酸性蛋白,中间区域为一亲水性部位,N末端为疏水性部位。根据二级结构预测,DRVσC蛋白有如下特征:的残基是以α螺旋的形式存在,是以片层形式存在的,是以无规则卷曲形式存在。N末端大部分是以α螺旋的形式存在。与N末端相比,DRVσC蛋白的C末端是由α螺旋、β折叠及无规则卷曲混合组成。与ARV相比,其存在着几个潜在的磷酸化和四十烷酰化位点而无N糖基化位点。DRVσC蛋白在~区域存在着一个锌指基序,此基序相应地存在于ARV中,可能涉及到蛋白的寡聚化。这些结构说明,σC蛋白的N末端纤维状尾伸入到病毒核心内C末端球状结构,是病毒吸附至细胞特异性受体的结合蛋白,即受体结合区段,具有型特异性抗原决定簇。现除对σC蛋白了解比较透彻外,对于其他某些蛋白的研究还处于推测阶段。P非结构蛋白由S基因ORF编码,分子量大小为kDa。对p氨基酸序列的分析,发现其不存在任何潜在的跨膜域一种被认为是已鉴定的正呼肠孤病毒属与融合相关的小跨膜蛋白共同特征性的二级结构。对于DRVp是否在细胞融合方面起作用还需进一步的研究确证。外衣壳蛋白σB由S基因编码,含个氨基酸残基,分子量大小为kDa。其N末端含有锌指结构,起着稳定蛋白结构的作用C端含有KKVSHYR氨基酸序列,有dsRNA结合能力。非结构蛋白σNS由S基因编码,N末端富含正电荷碱性氨基酸,可与ssRNA结合,同时此区富含丝氨酸,在磷酸化后所带的负电荷可中和碱性氨基酸的正电荷,确保病毒粒子在包装前蛋白与RNA的分离。表明σNS在病毒的早期组装中起重要作用。μA蛋白由M基因编码,含个氨基酸残基,与ARV的同源性分别为~,大肠杆菌表达M基因产生kDa的蛋白。尽管μA在氨基酸序列上与MRVμ蛋白有一定的差异,但μA具有与MRVμ一样的ATPase基序,且在所感染的VERO细胞中的定位与MRVμ在L细胞中的定位相似。因此预计μA蛋白具有与MRVμ相似的功能,即RNA结合能力。μB由M基因编码,含个氨基酸残基,与ARV同源性为~。非结构蛋白μNS由M基因编码,为病毒复制与翻译所必需。μNS参与包涵体的建造,可自身连接形成寡聚体,也可与细胞内蛋白结合,将细胞内蛋白作为μNS蛋白或寡聚体结合的桥梁,形成包涵体基质μNS可与病毒编码的其他蛋白结合,如非结构蛋白σNS其还具有单链RNA结合活性,可将病毒负链RNA聚集在包涵体中。因此μNS蛋白能够将病毒复制所需成分聚集在包涵体中,参与ssRNA的转录起始与转录调节或病毒的包装机制,。在μA、μNS、μB这个蛋白中,μB与ARV的差异性明显要大于μA、μNS,这可能是作为外壳蛋白的μB承受着宿主更大的免疫压力所致。展望目前,国内都以σC蛋白作为保护性抗原来构建原核及真核表达系统以期获得有效的基因工程疫苗,然而这些σC表达产物的免疫保护作用都有待于进一步的验证。KuntzSimon等证明虽然以σC和σB联合免疫的番鸭对腱鞘炎的抑制比用σC免疫的缓慢,但与后者相比,其腱鞘炎引起的损害比较小。该学者认为,由于某些结构蛋白对于保证σC正确折叠成有效的抗原及行使免疫保护作用具有一定的作用。因此后续的研究可将σC与其他外壳蛋白相结合,以探寻其是否能产生更强的免疫保护力。同时,还需继续开展病毒基因及蛋白结构功能的研究工作,以揭示病毒抗原表位结构与功能关系、病毒蛋白与病毒毒力之间的关系、该病毒的致病机理等一系列问题,以期为研制更高效的基因工程疫苗鉴定基础。(下转第页)生物技术通报BiotechnologyBulletin年第期参考文献KaschulaVRJournalSouthAfricanVeterinaryMedicineAssociation,,:~GaudryD,CharlesJ,tektoffJComptesRendusdelAcademiedesScinces,,:~MalkinsonM,KPerk,YWeismanAvianPathology,,:~ReetzJ,AheCvonder,VonderAhe,CMonatshefteferVeterinarmedizin,,:PascucciS,GelmettiD,GiovannettiLClinicaVeterinaria,,:,~吕殿红,张毓金,黄忠,等中国家禽,,():~胡奇林,陈少莺,林锋强病毒学报,,():~胡奇林,陈少莺,江斌,等福建畜牧兽医,,():~HeffelsRedmannU,MullerH,KaletaEFAvianPathology,,:,~刘青珍,齐义鹏,李凌云,等生物多样性,,():~KuntzSimonG,LeGallReculeG,deBiossesonC,etalJGenVirol,,():~YunZhang,DongchunGuo,etalVirusResearch,,:~LeGallReculeG,CherbonnelM,ArnauldC,etalJGenVirol,,():~KuntzSimonG,BlanchardPhilippe,CherbonnelMartineVaccine,,(~):~胡奇林,林锋强,陈少莺,等中国预防兽医学报,,():~刘文兴,王劭,吴宝成畜牧兽医科技信息,,:~GillianAL,NibertMLVirology,,:~lZhangY,GuoD,LiuM,etalVetMicrobiol,,(~):~ShapouriMR,KaneM,LetarteM,etalJGenVirol,,:~TeresaJB,JonghwaK,CathyLM,etalJournalofvirology,,():~TeresaJB,AimeemMM,VictoriaEC,etalJournalofvirology,,():~结语总而言之,端粒酶在肿瘤的发生中具有重要的作用,有可能成为重要的肿瘤诊断和判断预后的指标。同时,它也可能成为肿瘤治疗的新靶点。参考文献GreiderCW,BlackburnEHCell,,:~YuGL,BradleyJD,AttardiLD,BlackburnEHNature,,:~ShampayJSzostakJW,BlackburnEHNature,,:~GreiderCW,BlackburnEHNature,,:~FengJ,FunkWD,WangSS,etalScience,,:~GilleyDandBlackburnEHProcNatlAcadSci,,:~WinsteinLB,SteitzJACurrOpinCellBio,l,:~ShayJW,BacchetiSEurJCancer,,:~HarleyCBMutatRes,,:~HarleyCB,FutcherAB,GreiderNature,,:~deLangeT,ShiueL,MyersRM,etalMolCellBiol,,:~RichardsEJIn:"Telomeres"pp~,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NewYorkHiragaS,AogiK,BukeyICancerRes,,:~LinY,UemuraH,FujinamiK,HosakaM,HaradaM,KubotaYJUrol,,:~YangCT,LeeMH,LanRS,ChenJKJClinOncol,,:~KavalerE,LandmanJ,ChangY,etalCancer,,:~KyoS,TakakuraM,KohamaT,InoueMCancerRes,,:~HoosA,HeppHH,KaulS,etalIntJCancer,,:~LangfordLA,PiatyszekMA,XuR,etalHumPatbol,,:~HiyamaE,GollahonL,KataokaT,etalJNatlCancerInst,,:~NakataniK,YoshimiN,MoriH,etalCancer,,:~HealyKCOncologyRes,,:ParkinsonEKBrJCancer,,:HamiltonSE,PittsAE,KatopallyRR,etalBiocbemistry,,:~MataJE,JoshiSS,PalenB,etalToxicolApplPbarmacol,,:~ZhaoJQ,HoareSF,McFarlaneR,etalOncogene,,:~!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!(上接第页)

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