番石榴叶提取工艺研究

陕西中医 2009年第 3O卷第 11期 1529 · 方药纵横 · 番石榴叶提取工艺研究 李 玲 何字新△ 吴晶晶 陈慧娟▲ 西华大学生物 工程 路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理 学院(成都 610039) 摘 要 目的：考察番石榴叶的最佳提取工艺。方法 ：以总黄酮含量 、槲皮素含量、干膏收率为评价 指标 ， 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 正交试验考察 乙醇浓度、料液 比、提取时间、提取 次数对提取工艺的影响。结果 ： 用 70％ 乙醇，1O倍 乙醇量 ，提取 3次，每次 1h的方法可以获得较高的提取率。结论：优选 得到的提取工艺提取效果好且稳定可行。 主题词 番石榴叶 总黄酮 提取工艺 番石榴叶为桃金娘科植物番石榴的干燥叶及带叶 嫩茎。它性平，味干涩，具有收敛止泻、消炎止血的功 效。叶的主要化学成分有黄酮类化合物、鞣质、挥发油、 植物固醇、叶绿素和多糖等r】]。现代药理研究 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明，从 番石榴叶中提取出的总黄酮苷及单黄酮苷具有降血糖 作用 ]。本实验 旨在提供番石榴叶中有效成分最佳提 取条件的理论依据。 1 材料与仪器 1．1 材料 芦丁对照 品(中国 药 品生物制品检验所)；槲皮素对照 品(中国药品生物 制 品检 验所)；番石 榴 叶；甲醇 (分 析纯 )；乙醇 (分析 纯)；甲醇(色谱纯)；亚硝酸钠；硝酸铝；氢氧化钠 1．2仪器 SPD一20A高效液相色谱仪；紫外分光 光度仪；RE一52A旋转蒸发仪；SHB一。循环式真空泵； HH—s数显恒温水浴锅；ISO9001电子天平。 2 方法和结果 2．1总黄酮含量测定 2．1．1对照品溶液制备：精确称取芦丁 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 品 1o． 35mg用 甲醇溶解并定容 至 50mL容量瓶 中，得到 0． 207mg／mL芦丁标准溶液 。 2．1．2供试品溶液制备：称取 100g番石榴叶，加 800mL70％乙醇 回流提取 3次 ，每次 1h，合并药液并 浓缩至相对密度为 1．25(℃)；吸取 4mL样 品溶液定 容至 50mL，再吸取 2mL于 50mL容量瓶中，按标准曲 线制备方法处理样 品。 2．1．3最佳测定波长的确定：将对照品溶液于 200 ～ 800nm处进行波长扫描 ，确定含量测定的最佳波长 为 510nm。 2．1．4标准曲线制备 ：精密吸取芦丁标准溶液 2、 4、6、8、10、12mL于 50mL容量瓶中，各加 3O 乙醇至 12mL，加入 5 NaNO 2mL摇匀放置 6min；加入 10 A1(NO)。32mL 摇 匀 放 置 6min；加 入 4．3 NaOH20mL，再加 30 乙醇定容至刻度，放置 15min 后 ，在 510nm 处测定吸光度 。]；结果如表 1所示 。 表 1 标准曲线测定结果 如 表 1所 示 ：芦 丁 标 准 品溶 液 在 0．008～ 0． 048mg／mL范围内具有 良好的线性关系 ，以吸光度 Y 为纵坐标 ，浓度 X为横坐标绘制标准曲线。回归方程 为 ：Y一12．802X+0．0062，r=0．9996。 2．2总黄 酮转移率测定 精密称定粉碎后过 100 目塞的番石榴叶 0．1g于具塞锥形瓶 中，加人 甲醇溶液 25mL，称定质量 ，超声处理 45min，放冷，再称定质量 ， 用 甲醇溶 液补 足 损失 的质 量 ，摇匀 过 滤，吸取 滤 液 4mL于 50mL容量瓶中，按标准曲线制备方法制备； 结果如表 2所示 。 2．3槲皮素含量测定 2．3．1色谱条件与系统性 试验 ：色谱柱为 Diamonsil C18柱 5um(200×4．6ram)； 甲醇一0．4N磷酸溶液 (5O：50)为流动相；检测波长： 360nm；流速为 1．0mL／min；柱温：35℃[3]。在此条件 下，样品中槲皮素得到 良好分离。 2．3．2标准品溶液制备：精密称取 5．8mg槲皮素 标 准品用 甲醇溶解 并定容 至 50mL，即得 0．116mg／ mL槲皮素标准品溶液。 表 2 总黄酮转移率结果 试验 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 总黄酮转移率(％) 53．47 16．90 62．33 64．64 58．86 50．42 39．70 56．23 28．81 *四川 省重点 学科 项 目 △ 通讯作 者 ▲四川省中医药科学院中医研究所 2．3．3供 试 品 溶 液 制 备 ：称 取 100g番 石 榴 叶，加 800mL70 乙醇回流提取 3次 ，每次 1h，合并药液并浓缩至相 对密度为 1．25(℃)；备用。 2．3．4线性关系考察：精密吸取浓度为 0．116mg／mL槲皮 1530 陕西中医2O09年第 3o卷第 11期 素标准品溶液 1、2、4、8、16uL，按上述色谱条件注入色谱仪，测 定峰面积；结果表明槲皮素在 0．116～1．856ug范围内呈良好 的线性关系。 2．4干膏收率的测定 精密量取样品溶液 2OraL 于干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，在 105℃干燥箱 中干燥 3h，冷却后称重，计算干膏收率。 2．5正交试验设计 称取番石榴 叶 lOOg，以乙醇 浓度、料液比、提取时间、提取次数为影响因素的三个 不同水平进行考察 ，以总黄酮含量、槲皮素含量、干膏 收率为评价指标，对提取工艺进行考察，确定最佳的提 取工艺参数。因素水平设计见表 3。 表 3 因素水平袁 按表 3的“因素水平表”进行试验 ，提取 9份滤液 为供试液，按总黄酮含量测定方法和槲皮素含量测定 方法进行含量测定 ，并计算 干膏收率 ，结果见表 4、表 5。 表 4 番石榴叶醇提正交试验结果 Y一(yl／ylmax)×5O+ (y2／y2max)×30+ (y3／y3max)×20 表 5 番石榴叶醇提方差分析表 表 6 番石榴叶醇提工艺验证试验 直观分析结果表明，乙醇提取番石榴叶总黄酮的 影响因素主次顺序为：D>c>A>B。 方差分析结果表明：D因素的影响最显著。确定最 佳工艺为 A2B3C1D3。 2．6番石榴叶醇提工艺验证试验 称取番石榴叶 3份，每份 lOOg，按上述最佳方案进行试验。结果如表 6所示 。 从上述试验结果可知，总黄酮平均含量为 7．11g／ lOOg；槲皮素平均含量为 12．44mg／lOOg；平均干膏收 率为 15．33％。说明所筛选出的工艺合理可行，具有可 操作性和重现性。 3 讨 论 本实验采用正交试验设计，以总黄酮 含量、槲皮素含量、干膏收率的综合评分为检测指标， 分析了得率和含量，比较客观的反映出各因素水平对 番石榴叶提取工艺的影响。从 R值分析得出，影 响乙 醇提取番石榴叶总黄酮的影响因素主次顺序为：D>C >A>B。即提取 3次时 ，番石榴叶中的总黄酮才能基 陕西中医 2009年第 30卷第 11期 1531 本 被 提 取 完 全。综 合 分 析 ，最 佳 工 艺 条 件 为 ： A2B3C1D3，70％乙醇，1O倍 乙醇 量，提 取 3次 ，每次 1h的方法可以获得较高的提取率。 参考文献 [1] 徐鸿华．中草药彩图手册(一)EM]．广州：广东科技出 版社 ，2003：124—125． E23 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草(第 五册)EM]．上海 ：上海科学技术出版社 ，1998：642． ‘ E33 黄 勇．郑 林．李勇军，等．养耳菊中总黄酮含量 测定研究EJ3．陕西中医，2008，29(1O)：1391—1392． [5] 国家药典委员会．中国药典一部．北京：化学工业出 版社 ，2005． (收稿 2009—05—15；修回 2009—07—29) HPLC法测定丹参茵陈胶囊中丹参酮 ⅡA的含量 谢 珊 贾宪生△ 杨基森▲ 贵阳中医学院第二附属医院(贵阳550003) 摘 要 目的：建立丹参茵陈胶囊中丹参酮 Ⅱ 含量的高效液相 色谱测定方法。方法：采用 ZoRBAX SB C18柱，4．6×150mm(Agilent公 司)，甲醇 ：水 (75：25)为流动相，流速： lmL／min，柱温：30|C，检测波长 270nm。结果：丹参酮 ⅡA在 8．69 g～86．88 g范围内线 性关系良好；r一0．9998，平均回收率为 98．38 ，RSD一0．70 。结论 ：本法简便 ，重现性 良好 ，可用于丹参茵陈胶 囊的质量控制。 主题词 复方／化学 丹参酮 Ⅱ ／分析 色谱法，高效液相 丹参茵陈胶囊是治疗肝 炎的经验方 ，由丹参、茵 陈、白术和泽泻等多味中药组成，经加工制备而成的新 药制剂。丹参为方中主药，丹参酮 Ⅱ 是中有效成分之 一 ，其药材含量测定方法报道有用高效液相色谱法测 定[1]，本文报道用高效液相色谱法测定丹参酮 Ⅱ_A含 量的方法[2]，为丹参茵陈胶囊质量标准的建立提供含 量测定方法 。 1 仪器与试药 日本岛津 LC一20AT高效液相 色 谱仪 (二元泵 ，SPD一20A 紫外检测器 ，HF一230A 柱温箱，LC—Solution色谱工作站)；丹参酮 ⅡA对照品 由中国药品生物制 品检定所提供 (批号 0766—9606)； 电子天平 (METTLER XS205，瑞 士)，实验室专用超 纯水机 (WP—UP—III—lO，四川沃特尔科技发展有 限公司)。甲醇为色谱纯(天津科密欧化学试剂开发中 心)，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。丹参茵陈胶囊 及缺丹参阴性样 品，由本院制剂室制备 。 2 方 法 与 结 果 2．1 色谱 条 件 色 谱 柱 ： ZORBAXSB C18Column(150ram×4．6mm，5 m)，流 动相 ：甲醇 ：水 (75：25)；紫外 检测波长：27Ohm；柱 温 ：3O℃，流速 ：lmL／min，进样体积 ：5 L。在上述条件 下，丹参茵陈胶囊中丹参酮 Ⅱ 达到基线分离，且样品 中其它成分色谱峰对丹参酮 Ⅱ 测定无干扰。 2．2 对照品溶液的制备 精密称取丹参酮 Ⅱ 对照品适量，用 甲醇溶解，转移至 50mL棕色容量瓶 △通讯作者； ▲贵阳 中医学院 (55ooo2) 中，加甲醇至刻度 ，摇匀 ，制成每 lmL含 0．2172mg的 对照品溶液储备液。精密量取 4mL对照 品溶液储备 液 ，置 100mL棕色容量瓶 中，加 甲醇至刻度 ，摇匀 ，制 成每 lmL含 0．00869mg的对照品溶液。 2．3 供试品溶液的制备 取丹参茵陈胶囊内 容物 1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇 50mL， 称定重量 ，水浴上 回流提取 1h，放冷 ，再称定重量，用 甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，作为供试 品溶液 。另取去除丹参的阴性对照样品，按供试品溶液 的制备方法，制备阴性样品溶液。 2．4 线性关系考察 分别精密吸取丹参酮 Ⅱ 对照品溶液 1，2，4，6，8，lOlL，注入液相色谱仪 ，按上 述的色谱条件测定峰面积 ，以丹参酮 Ⅱ 峰面积值为 纵坐标 ，进样量( g)为横坐标 ，绘制标准曲线。 结果表 明，丹参酮 ⅡA在 8．69 g～86．88 g范 围 内线性关系良好 。 2．5 精密度试验 精密吸取丹参酮 Ⅱ 对照品 溶液 5 L，按照“色谱条件”中的方法测定，重复进样 5 次 ，RSD为 0．96 。 2．6 重复性试验 分别取同一批丹参茵陈胶囊 内容 财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容 物 5份，按 2．3项下“供试液的制备”操作，按上述 “色谱条件”下进行测定，计算丹参酮 Ⅱ 的平均含量 为 0．27mg／g，RSD为 0．73 。 2．7 稳定性试验 取同一份供试品溶液，室温 放置，分别于 0，2，4，6，lOh测定峰面积值，结果表明， 丹参酮 Ⅱ 在 10h内稳定性良好，RSD为 1．O4 。 2．8 回收率试验 取已知含量的丹参茵陈胶