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腹膜透析液中添加黄芪对腹腔巨噬细胞功能的影响.pdf

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上传者: 136*****916@sina.cn 2012-07-05 评分 0 0 0 0 0 0 暂无简介 简介 举报

简介:本文档为《腹膜透析液中添加黄芪对腹腔巨噬细胞功能的影响pdf》,可适用于自然科学领域,主题内容包含第卷第期年月医学研究生学报JournalofMedicalPostgraduatesV.No.Feb.论著腹膜透析液中添加黄芪对腹腔巨噬细胞功能的影符等。

第卷第期年月医学研究生学报JournalofMedicalPostgraduatesV.No.Feb.论著腹膜透析液中添加黄芪对腹腔巨噬细胞功能的影响蒋春明张苗孙垮(南京大学医学院附属鼓楼医院肾脏内科江苏南京)摘要:目的:通过在腹膜透析液(PDF)中添加黄芪注射液后观察患者腹腔巨噬细胞功能的变化。方法:采用自身对照的方法在例连续性不卧床腹膜透析(CAPD)治疗患者的PDF中添加黄芪注射液(ml/L)后比较患者透出液巨噬细胞活性、吞噬功能及肿瘤坏死因子d(TNFd)和一氧化氮(NO)分泌的变化情况以及在不同剂量黄芪注射液的作用下巨噬细胞活性和细胞因子分泌改变的影响。结果:用药前后患者透出液中TNFd含量未出现显著变化分别为()ng/L()ng/L(P=.)腹腔巨噬细胞噬菌率分别为(..)%(..)%(P<.)杀菌率分别为(..)%(..)%(P<.)巨噬细胞经脂多糖(LPS)刺激其噻唑蓝(MYr)还原能力检测值(A值)分别为....(P<.)。上清液中NO含量分别为(..)trmol/L(..)trmol/L(P<.)。上清液中TNFd含量分别为(O)ng/L()ng/L(P<.)。分离的巨噬细胞在不同条件下共同孵育后PDF组和RPMI组巨噬细胞上清液中TNF、NO含量和沉渣Mrr还原能力较含黄芪注射液各组明显降低(P<.)黄芪组上清液中TNFd、NO含量和沉渣MTF还原能力以%和%黄芪组改善较为明显两组间比较无显著差异(P>.)。随着黄芪注射液剂量增高上清液中TNFd、NO含量和沉渣MT还原能力出现下降趋势%黄芪组NO含量和沉渣MTY还原能力与%黄芪组比较差异具有显著性意义(P<.)。结论:在透析液中添加黄芪注射液可提高巨噬细胞的活性增加巨噬细胞吞噬功能和TNFd、NO分泌能力从而增强腹腔局部免疫防御功能。关键词:黄芪腹膜透析巨噬细胞中图分类号:R文献标识码:A文章编号:()AdditionofastragalusintoperitonealdialysateimproveperitonealmacrophagesfunctioninCAPDpafien~JIANGChunmingZHANGMiaoSUNZheng(DepartmentofNephrologyGulouHospitalMedicalCollegeofNan~ngUniversity~njingJiangsuChina)Abstract:Objective:ToinvestigatetheeffectofAstragalusonperitonealmacrophagesfunctioninstablecontinuousambulatoryperitonealdialysis(CAPD)patients.Methods:stableCAPDpatientswereincludedinthisstudy.AllthepatientsweretreatedwithperitonealdialysisfluidcontainingAstraga.us(ml/L)nvivoforoneweek.Peritonealmacrophagesfunctionsuchasphagocytosisratio、bactericidalratio、excretionofcytokines(TNF一仅andNO)andmitochondfialdehydrogenasesactivity(Mtitassay)wereexaminedexvivojustbeforeandafterthetreatment.InvitroperitonealmacrophagesisolatedfromeffluentwereincubatedwithRPMI、CDForCDFcontainingvariousconcentrationsofAstragalusFhenperitonealmacrophagesfunctionmentionedabovewereexaminedagainandcompared.Re.suits:NosignificantdifferencewasfoundinTNF一仅levelineffluentbetweenbeforeandafterthetreatment()ng/Lvs()ng/L(P=.).whilecomparingwithpretreatmentperitonealmacrophagesfunctionwasimprovedsignificantlyaftertheadditionofAstragalusintodialysate(phagocvtosisratio:(..)%vs(..)%P<.bactericidalratio:(..)%(..)%P<.NO:(..)Ixmol/Lvs(..)mol/LP<.:TNF一仅:()ng/Lvs()ng/LP<.MTT:...收稿日期:o~修订日期:基金项目:江苏省社会科技发展基金资助项目(批准号:BS)作者简介:蒋春明(一)男江苏泰州人主治医师医学硕士从事肾脏内科专业。维普资讯http:wwwcqvipcom医学研究生学报年月第卷..P<O.O.nrtherewerenodifferencesbetweenRPMIgroupandCDFgroupinlevelsofTNF一、NOandmitochondrialdehydrogenasesactivity(P>.).TheresultsinthesetwogroupsweresignicantlylowerthanthoseinAstragalUSgroups(P<.).NosignificantdifferencewasfoundinlevelsofTNF一、Nandmitochondrialdehydrogenasesactivitybetween%Astragalusgroupand%Astragalusgroup(P>.).WhilesignificantdecreasinginNOlevelandmitochondrialdehydrogenasesactivitywereobservedin%AstragalUSgroupsascomparedwiththosein%Astragalusgroup(P<.).Conclusion:TheadditionofAstragalUSintoperitonealdialysisfluidcanimproveperitonealmacrophagesfunctioninCAPDpatientsenhancehostdefenseofperitoniumcavityKeywords:AstragalUSPeritonealdialysisMacrophages引言腹膜透析(peritonealdialysisPD)作为终末期肾病(endstagerenaldiseaseESRD)患者肾脏替代疗法已在临床上得到广泛应用而腹膜炎作为长期PD患者的主要并发症之一是导致透析技术性失败的重要原因。因此维护和促进作为腹腔免疫第一道防线的腹腔巨噬细胞(peritonealmacrophagesPM)免疫功能防止腹膜炎的发生具有重要的临床意义。黄芪是一种有效的免疫增强剂在动物实验中发现黄芪能拮抗透析液对PM活性的抑制作用J。然而目前有关这方面的报道较少本研究通过观察黄芪对PD患者PM功能的影响为临床减少腹膜炎和腹膜功能衰竭的发生提高PD疗效具有积极意义。资料和方法.研究对象年月至年月期间我科随访的ESRD行持续性不卧床腹膜透析(continuOUSambulatoryperitonealdialysisCAPD)治疗的患者例其中男例女例年龄为(平均..)岁。所有患者行标准的CAPD治疗(L次交换/d)平均透析时间(..)个月。原发病包括慢性肾小球肾炎例、高血压肾小动脉硬化例、糖尿病肾病例、慢性肾盂肾炎例和梗阻性肾病例。所有患者在观察期前个月及观察期内病情平稳无腹膜炎、感染以及心力衰竭等并发症发生。观察期内患者未使用免疫活性制剂。.试剂及主要仪器.%Baxter腹膜透析液(perieonealdialysisfluidPDF)为广州百特医疗用品公司产品pH.内含葡萄糖.mol/L、乳酸.mol/L黄芪注射液为成都地奥九泓制药厂产品规格ml/支相当于生药黄芪g磷酸盐缓冲液(PBS)、胎牛血清(FBS)、RPMI粉剂购自GIBCO公司噻唑蓝(Mrrr)、二甲亚砜(DMSO)、脂多糖(LPS)为Sigma公司产品肿瘤坏死因子(TNFOt)ELISA检测试剂盒购自深圳晶美生物公司一氧化氮(NO)检测试剂盒购自南京建成生物研究所。新鲜培养的白念珠菌由本院细菌培养室提供。完全培养液为含%FBS和Ou/L青链霉素的RPMI培养液。NUE二氧化碳培养箱为Nuaire公司产品全自动酶标仪(Sunrise)为Biobank公司产品。.研究方法..标本收集每例患者观察天第天采用.%BaxterPDS行CAPD治疗其后周给予含黄芪注射液ml/L的.%BaxterPDS行CAPD治疗第天和第天用无菌无热原盐水瓶收集前一天过夜透出液。..巨噬细胞分离在h内条件下离心(r/minmin)患者全部透出液部分上清液一保存检测TNF一含量沉渣先后用PBS、RPMI洗涤完全培养液配成细胞浓度为/ml的悬液。部分细胞悬液用于巨噬细胞吞噬功能检测其余细胞悬液加至孔平底培养板(O.ml/~L)于%CO孵箱中孵育h后用PBS洗涤次弃去未黏附细胞即得巨噬细胞单层。..试验分组本试验分为腹腔内使用黄芪注射液前、后巨噬细胞功能比较和体外不同剂量黄芪注射液干预下巨噬细胞功能比较两部分。患者用药前、后透出液分离的巨噬细胞加入含LPSmg/L的完全培养液中在%CO、~C孵箱中孵育h(每份孔)上清液离心后一~C保存检测TNFOt和NO含量沉渣进行Mrrr还原能力检测。患者用药前、后透出液分离的细胞悬液用白念珠菌观察巨噬细胞噬菌率和杀菌率。患者用药前透出液分离的巨噬细胞分六组观察每组设孔。对照组(PDF组)为加入完全培养液和PDF各.mlRPMI组为加入RPMI和完全培养液各.ml%、%、%和%黄芪组分别为加入含黄芪注射液浓度(%、%、%和%)的PDF与完全培养液各.ml。上述各组巨噬细胞在%CO、~C。条件下孵育h后弃上清PBS洗涤次加入含LPSmg/L的完全培养液维普资讯http:wwwcqvipcom第期蒋春明等腹膜透析液中添加黄芪对腹腔巨噬细胞功能的影响’ml%CO、oC孵箱中孵育h后上清液离心一~C保存检测TNF一【和NO含量沉渣进行MTr还原能力检测。.检测指标..巨噬细胞吞噬功能新鲜培养的白念珠菌~C孵育h用完全培养液配成菌浓度为。/ml的悬液按菌:细胞=:与细胞悬液混合(份)~C孵育hr/rain离心min后涂片、干燥、甲醛固定美蓝染色高倍显微镜下连续观察个巨噬细胞计算巨噬细胞的噬菌率和杀菌率。噬茵率=(噬茵细胞娄细胞总数)%。杀菌率=(噬死茵细胞童噬茵细胞数)%..MTY还原能力完全培养液.Inl和浓度为mg/ml的Mr兀’(以.molpH.的PBS配制)Ixl加入培养孔中继续培养h弃上清液每孔加入DMSOml震荡混匀取加入孔板在nm处测光密度(A)值参考值为nm以A值表示巨噬细胞活性。..NO检测采用硝酸还原酶法检测参照试剂盒说明书中操作。..TNF一【检测采用ELISA方法检测参照试剂盒说明操作。.统计学方法结果用均数标准差(xs)表示用药前后组间比较采用配对t检验独立组间比较用方差分析以P.为差异有显著性意义。结果.用药前后透出液TNF一【含量例患者用药前、后无明显变化用药前为()ng/L用药后为()ng/LP=.。.使用黄芪注射液前后透出液巨噬细胞功能变化例患者用药后透出液中分离的巨噬细胞噬菌率和杀菌率较用药前有显著提高(P<.)。用药后巨噬细胞经LPS刺激其上清液中TNF一【和NO含量均显著高于用药前(P<.)沉渣MTY还原能力也较用药前显著升高(P<.)结果见表。表例患者用药前后巨噬细胞吞噬功能、细胞活性和上清液中细胞因子分泌情况TablelThechangesofphagocytosisratioandbactericidalratio、mitochondrialdehydrogenasesactivityandexcretionofTNF.a.NOofperitonealmacmphage与用药前比较{{P<.O。.不同剂量黄芪注射液对巨噬细胞功能的影响例患者透出液中分离的巨噬细胞经不同黄芪剂量PDF共同孵育后在LPS刺激下上清液中TNF一【、NO含量和沉渣MTY还原能力见表。PDF组和RPMI组巨噬细胞上清液中TNF一【、NO含量和沉渣MTY还原能力最低两组间比较差异无显著性意义(P>.)。在加入黄芪注射液的各组中NO含量和沉渣MTY还原能力以含%黄芪注射液组为最高显著高于PDF组和RPMI组(P<.).%和%黄芪组之间比较无显著差异(P>.)。上清液中TNF一含量以含%黄芪注射液组为最高显著高于PDF组和RPMI组(P<。)但与%、%组比较无显著差异(P>.)。随着黄芪注射液浓度的进一步增高上清液中TNF一【、NO含量和沉渣MTY还原能力出现了下降趋势%黄芪组NO含量和沉渣MTY还原能力与%黄芪组比较差异有显著性意义(P<.)。表不同剂量黄芪注射液作用下巨噬细胞细胞活性和细胞因子分泌变化Tablecm叫sonofmitochondrialdehydrogenasesactiVityandexcretionofTNF.NOofperitonealmacmphagearnongdi‰ntgroups维普资讯http:wwwcqvipcoml医学研究生学报年月第l卷讨论PD作为有效的肾脏替代治疗方法已经被越来越多的ESRD患者所接受。随着PD时间的延长腹膜功能衰竭是患者透析技术失败的最重要原因。反复腹腔感染的发生被认为是腹膜功能衰竭的原因之一。现有的商业化PDF对PM吞噬功能和细胞因子分泌等多种功能均有抑制作用使腹膜局部免疫防御能力下降导致腹膜炎发生机会增多。黄芪是一种有效的免疫增强剂本研究通过在透析液中添加黄芪注射液观察患者PM功能的变化并在体外条件下观察不同浓度黄芪注射液对巨噬细胞功能的影响。商业性PDF具有明显的生理不相容性透析液对腹膜的长期刺激使腹腔处于一种慢性炎症状态。有研究表明在无腹腔感染的PD患者其透出液中能检测到局部TNFd的分泌J。TNFd作为一种炎症因子对于维持腹膜防御功能起到重要作用但另一方面长期的这种炎症状态也是导致腹膜硬化的原因之一J。本研究通过在透析液中添加黄芪注射液后患者透出液中TNFd未出现显著变化P=.提示黄芪注射液对商业PDF导致的腹腔慢性炎症状态无明显影响。从表可以看出用药后患者PM白念珠菌噬菌率和杀菌率明显提高与用药前比较差异有显著性意义(P<.)说明应用黄芪注射液后患者PM的吞噬功能明显改善。这一结果与童孟立等的研究结果相似他们在对初始PD患者的研究中发现应用黄芪组患者透出液巨噬细胞吞噬能力明显高于对照组。用药后透出液中巨噬细胞MTI"还原能力显著高于用药前(P<.)提示用药后巨噬细胞的活性明显改善。NO和TNFd在巨噬细胞腹腔免疫防御中起到重要作用。NO参与巨噬细胞内杀菌过程J有文献报道ESRD患者PD透出液中NO的含量明显降低提示腹膜防御功能的损伤。传统PDF显著抑制巨噬细胞TNFd分泌使腹膜局部免疫防御能力下降导致腹膜炎发生机会增多。从表的结果可以看出用药后患者巨噬细胞经LPS刺激其上清液中NO和TNFd含量显著高于用药前(P<.)提示用药后巨噬细胞细胞因子分泌作用增强。因此通过在透析液中添加黄芪注射液后患者巨噬细胞的细胞活性、吞噬功能和细胞因子分泌能力均明显改善从而加强腹腔的免疫防御能力可能减少腹膜炎的发生。表结果表明RPMI组巨噬细胞虽然脱离了PDF的作用其TNFd、NO分泌和沉渣MqT还原能力与PDF组相比并无明显差异(P>.)提示商业性PDF对巨噬细胞活性的抑制作用比较持久。从黄芪组的结果可以看出培养液中添加黄芪注射液后巨噬细胞上清液中TNFd、NO含量和沉渣MqT还原能力均较PDF组明显改善(P<.)其中以含%和%黄芪注射液组改善最为明显。随着黄芪注射液浓度的进一步增加上清液中TNFd、NO含量和沉渣MqT还原能力并未出现增高而出现了下降趋势%黄芪组NO含量和沉渣MqT还原能力显著低于%黄芪组(P<.)但仍显著高于PDF组和RPMI组(P<.)。说明在透析液中添加黄芪注射液可以拮抗商业性PDF对巨噬细胞功能的抑制作用但增加黄芪的浓度并不能进一步改善巨噬细胞的功能。综上所述通过在透析液中添加黄芪注射液可拮抗商业性PDF对PD患者PM活性、细胞吞噬功能以及TNFd、NO分泌的抑制作用从而增强腹腔局部免疫防御功能减少腹膜炎的发生给长期PD患者带来益处。由于本研究用药时间较短长期应用的效果有待进一步研究。参考文献ThodisEPassadakisPVargemezisVeta.Peritonealdialysis:betterthanequaltoorworsethanhemodialysisDataworthknowingbeforechoosingadialysismodalityJ.PetitDialInt():.DevtieseASSiskaMortierNorbertHeta.WhathappenstothepetitonealmembraneinlongtermpetitonealdialysisJPetitDialInt(S):$.刘旭生杨霓芝林启展等.黄芪注射液对实验性大鼠腹膜透析并发腹膜炎的影响J.广州中医药大学学报():.TopleyN.BiocompatibilityofperitonealdialysissolutionsandhostdefenceJ.AdvRenReplaceTher():.BergstromJ.LindhoimB.LaesonEeta.Whatarethecaulsandconsequenceofthechronicinflammatorystateinchronicdialysispafien~J.SeminDial():..童孟立楼正清王宇晖等.黄芪改善腹透患者腹腔巨噬细胞功能的研究J.中国中西医结合肾脏病杂志():.【PacelloR.WinkDACookJAeta.NitricoxidepotentiateshydrogenperoxideinducedkillingofEscherichiaJ.JExpMed():..SchmidtRJYokotaSTraeyTSeta.NitricoxideproductionislowinendstagerenaldiseasepatientsonperitonealdialysisJ.AmJPhysiol():~.MackenzieRKHilmesCJMoseleyAeta.Bicarbonate/lactate.andbicarbonatebufferedperitonealdialysisfluidsimproveexvivopetitonealmacrophageTNFalphasecretionJ.JAmSocNeph.rol.():..(责任编辑:张锐英文编辑:徐军)维普资讯http:wwwcqvipcom

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