氨苄西林与阿莫西林对金黄色葡萄球菌及

氨苄西林与阿莫西林对金黄色葡萄球菌及 大肠杆菌的体外抗菌后效应 王丽平 , 江善祥 , 史晓丽 , 郭永刚 , 陈绍峰 (南京农业大学动物医学院 , 江苏 南京 210095) 摘要 : 采用菌落计数法分别测定了氨苄西林和阿莫西林在 015、1、2、4 倍于各菌最小抑菌浓度 (MIC) 时对金黄色葡萄 球菌、大肠杆菌标准株及其临床分离株的体外抗生素后效应 (PAE) 。结果显示 , 氨苄西林和阿莫西林在 015、1、2、4 倍 MIC时对金黄色葡萄球菌 C26112及临床分离株均具有一定的 PAE , 且 PAE与浓度在一定范围内 (015～4 倍 MIC) 呈剂量依 赖性 , 当药物浓度达 4 倍MIC时 , PAE明显延长 ( P < 0105) ; 但两药对金黄色葡萄球菌 C26112及临床分离株的 PAE值仅在 4 倍 MIC时差异显著 ( P < 0105) 。在相同浓度下 , 两药对大肠杆菌 ATCC25922 和临床分离株的 PAE 很小甚至没有。提 示 : 在临床 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 给药 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 时 , 对金黄色葡萄球菌敏感株引起的感染 , 除了考虑药代动力学和 MIC 指标外 , 还应考虑 PAE 因素 , 可适当延长给药间隔时间 ; 而对 PAE无意义的大肠杆菌敏感株引起的感染 , 宜持续给药或缩短给药间隔时间。 关键词 : 氨苄西林 ; 阿莫西林 ; 抗菌后效应 ; 菌落计数法 ; 给药方案 中图分类号 : S859179 + 6 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 1000 2030 (2004) 01 0093 04 Po stantibiotic effect of ampicillin and amoxycillin on Staphylococcus aureus and Escherichia coli in vitro WANGLi2ping , J IANG Shan2xiang , SHI Xiao2li , GUO Yong2gang , CHEN Shao2feng (College of Veterinary Medicine , Nanjing Agricultural University , Nanjing 210095 , China) Abstract : The postantibiotic effect (PAE) of ampicillin and amoxycillin on Staphylococcus aureus and Escherichia coli in vitro was stud2 ied. Dilution method was used for the drugs removal and Muelle2Hinton agar colony counting method was used to monitored the growth of bacteria. The results showed that marked PAE was found even in the subinhibitory concentration (sub2MIC) when ampicillin and amoxy2 cillin were used against S . aureus C26112 and the isolate obtained from veterinary clinic at concentration of 015 , 1 , 2 , 4 ×MIC. The du2 ration of PAE was enhanced with the increasing concentration , showing strongly a concentration2dependent , especially at 4 ×MIC , the PAE was obvirously prolonged ( P < 0105) . Negative PAE was defined , when the two drugs were used against E1 coli at the same concen2 tration. It suggested that longer dosing interval should be recommended when the two drugs used against S1 aureus , however , successive dosing or shorted dosing interval should be taken when they used against sensitive E1coli . Key words : ampicillin ; amoxycillin ; postantibiotic effect (PAE) ; colony counting method ; dosing interval 抗菌后效应 (PAE) 系指细菌与抗生素经短暂接触后再去除药物 , 细菌生长仍受到抑制的现象[1 ] , 是近年来提出的抗菌药物药效学的新理论。与药物敏感性不同 , PAE研究侧重的并不是药物与细菌相互 作用的结果 , 而在于揭示它们之间相互作用的过程。在人类医学实践中 , 该理论为研究抗菌药物药效学 和设计给药新模式提供了重要参数 , 已开始用于指导临床感染性疾病的治疗[2 ,3 ] 。在兽医领域中仅见少 数抗菌药物诸如恩诺沙星、替米考星、二氟沙星、泰乐菌素、土霉素的体外 PAE 研究[4～6 ] , 而对青霉 素类抗生素 PAE的研究较少。在兽医临床感染中 , 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌是引起动物感染的重要 病原 , 且两菌所产生的耐药性也有不断上升的趋势[7 ] 。故本试验测定了以氨苄西林、阿莫西林为代 　　收稿日期 : 2003 03 11 　　基金项目 : 南京农业大学青年科技创新基金 ( KJ03010) 　　作者简介 : 王丽平 (1971 ) , 讲师 , 在读博士 , 主要从事兽医药理学与毒理学的研究。E2mail : WLP71 @1631com 　南京农业大学学报 　2004 , 27 (1) : 93～96 Journal of Nanjing Agricultural University 表的青霉素类抗生素对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的标准株及临床分离株的 PAE , 为兽医临床更加合理 应用青霉素类抗生素 , 有效控制疾病提供参考资料。 1 　 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 和方法 111 　实验材料 11111 　药品与试剂 　氨苄西林 , 齐鲁制药厂生产 (批号 0207084) ; 阿莫西林 , 哈尔滨制药厂生产 (批 号 C020903) 。M2H肉汤和 M2H 琼脂自制 : 水解酪蛋白 1715 g , 可溶性淀粉 115 g , 牛肉浸汤加至 110 L , 用 MgCl2和 CaCl2调整至 Ca2 + 50～100 mg·L - 1 , Mg2 + 20～35 mg·L - 1。 11112 　菌株 　金黄色葡萄球菌 C26112 和大肠杆菌 ATCC25922 , 均由东南大学医学院微生物教研室提 供。金黄色葡萄球菌和大肠杆菌临床分离株 , 均由南京农业大学微生物教研室提供。 112 　抗菌活性测定 采用标准肉汤二倍微量稀释法分别测定氨苄西林和阿莫西林对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的最小抑 菌浓度 (MIC) , 重复 3 次。 113 　抗菌后效应的测定 参照文献 [8 ] 推荐的方法 , 做适当修改。 11311 　菌悬液的制备 　将待测菌株接种 M2H琼脂 , 孵育过夜后取 4～6 个单菌落接种于 2 mL M2H 肉汤 中 , 37 ℃培养过夜 , 分光光度计测定 D580。取 D 值约为 013 时的稀释菌液 (此时活菌计数为 107～108 CFU·mL - 1) 为待测菌液。 11312 　抗菌药物溶液制备 　以灭菌磷酸盐缓冲液 (pH618) 配成 50、100、200、400 倍于受试菌 MIC 的 药物溶液 , 过滤除菌后分装。 - 20 ℃贮存 , 临用前将各菌稀释成 015、1、2、4 倍 MIC。 11313 　测定方法 　将上述各菌株的菌悬液与不同浓度的药物在 37 ℃培养 1 h 后 , 用新鲜 M2H 肉汤做 1 000倍稀释去除药物 , 并立即置于 37 ℃水浴培养。分别在孵育 0、1、2、3、4、5、6、7 和 8 h 时取样 , 采用菌落计数法 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 细菌恢复生长的过程。同时分别设不含药菌液和非残余药物影响两组对照。 11314 　PA E 值计算 　PAE为与抗菌药作用过的细菌和未与抗菌药作用过的细菌各自活菌数增加 1 lg (10 倍) 所需的时间差 , 即 PAE = T - C , ( T、C 分别为试验管和对照管细菌各自增加 1 lg (10 倍) 所 需的时间 , 可通过细菌生长动力学曲线求出) 。 114 　数据的统计分析 实验数据均以 x ±SD 表示 , 数据的统计分析和差异性分析采用单因素方差分析和不成对 t 检验法。 2 　结　果 211 　氨苄西林和阿莫西林的体外抗菌活性 氨苄西林和阿莫西林对金黄色葡萄球菌的体外最小抑菌浓度分别为 015～4μg·mL - 1和 01125～2μg· mL - 1 ; 对大肠杆菌的体外最小抑菌浓度分别为 2～8μg·mL - 1和 2～4μg·mL - 1。两药对金黄色葡萄球菌 和大肠杆菌均表现出强大的抗菌活性 , 尤其对金黄色葡萄球菌的抗菌活性更强。 212 　氨苄西林和阿莫西林对 4 株细菌的体外 PAE 表 1 结果显示 , 氨苄西林和阿莫西林对金黄色葡萄球菌的标准株与临床株的体外 PAE 在 1～215 h 和 113～316 h。两药相比较 , 仅在 4 倍MIC 时金黄色葡萄球菌标准株的 PAE差异显著 ( P < 0105) 。两药 在不同浓度时所测得的 PAE值也有所不同 , 且在亚抑菌浓度下 (015 倍 MIC) , 两药对金黄色葡萄球菌 也有一定的 PAE。PAE在 015～4 倍 MIC 浓度范围内呈一定的依赖性。两药对金黄色葡萄球菌标准株与 临床分离株的 PAE差异不显著。若以 PAE小于 013 h 为无意义 , 则氨苄西林和阿莫西林对大肠杆菌基本 上不存在 PAE。 由图 1 和图 2 可见 , PAE测定过程中所设的细菌对照管与残留药物对照管细菌生长一致 , 说明各实 验管中细菌生长所受到的抑制为 PAE造成的 , 而不是残留药物的作用。同时说明 1 000 倍稀释基本上可 以去除药物。 ·49· 　　　　　　　　　　　　　　南 　京 　农 　业 　大 　学 　学 　报 　　　　　　　　　　　　　　第 27 卷 表 1 　氨苄西林和阿莫西林对 4 株细菌的体外 PAE Table 1 　PAE of ampicillin and amoxycillin on 4 strains ( n = 4) 菌株 Bacterial strains 氨苄西林 Ampicillin 阿莫西林 Amoxycillin 015 ×MIC 1 ×MIC 2 ×MIC 4 ×MIC 015 ×MIC 1 ×MIC 2 ×MIC 4 ×MIC 金黄色葡萄球菌 C26112 S1 aureu C26112 1114 ±3105 1162 ±2111 1187 ±1170 △ 2145 ±1131 △3 1147 ±0193 1184 ±1125 2136 ±0123 △ 3160 ±1130 △3 金黄色葡萄球菌分离株 S1 aureu from clinic 1105 ±1184 1138 ±1125 1156 ±1135 △ 2129 ±2104 △3 1138 ±1101 1144 ±1139 1197 ±0158 △ 2116 ±1142 △3 大肠杆菌 ATCC25922 E1coli ATCC25922 0119 ±0193 0104 ±1141 0125 ±1172 0137 ±1109 0111 ±0182 0117 ±0197 0113 ±0147 0131 ±0194 大肠杆菌分离株 E1coli from clinic 0109 ±1107 0111 ±2151 0118 ±0197 0129 ±3105 0103 ±1146 0115 ±1121 0121 ±0183 0132 ±1123 　　注 : 1) △: 与 015 ×MIC比较 , P < 0105 ; 2) 3 : 与 1 ×MIC比较 , P < 0105。 Notes : 1) △: Compared with 015 ×MIC , P < 0105 ; 2) 3 : Compared with 1 ×MIC , P < 0105. ◆: Bacteria control ; ■: Residual dry control ; ▲: 4 ×MIC; ○: 2 ×MIC; 3 : 1 ×MIC; ●: 015 ×MIC 图 1 　氨苄西林 PAE期金黄色葡萄球菌 C26112 (A) 及其临床分离株 (B) 的生长动力学曲线 Fig11 　Growth curves of S1 aureu C26112 (A) and S1 aureu from clinical (B) during PAE of ampicillin ◆: Bacteria control ; ■: Residual dry control ; ▲: 4 ×MIC; ○: 2 ×MIC; 3 : 1 ×MIC; ●: 015 ×MIC 图 2 　阿莫西林 PAE期金黄色葡萄球菌 C26112 (A) 及其临床分离株 (B) 生长动力学曲线 Fig12 　Growth curves of S1 aureu C26112 (A) and S1 aureu from clinical (B) during PAE of amoxycillin 3 　讨　论 传统的给药方案设计要求血浆和组织药物浓度要维持在 MIC 以上[9 ] 。PAE 的提出在较大程度上完 善了药效学评价指标 , 改变了抗生素传统应用的观念 , 故可利用 PAE 的特点来指导临床合理用药。对 有明显 PAE且毒性较低的药物 , 可减少用药次数和提高单次给药量 , 这样不仅方便用药 , 也能保持或 提高疗效。 本试验结果中 , 两药对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌 PAE 所呈现的差异 , 可能与β2内酰胺类抗生素 PAE产生机制有关。关于β2内酰胺类抗生素 PAE 产生机制尚未明确 , 可能因为药物与细菌的青霉素结 ·59·第 1 期 　　　　　　王丽平等 : 氨苄西林与阿莫西林对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的体外抗菌后效应 合蛋白 (PBPS) 共价结合 , 造成细菌非致死性损伤 , 细菌恢复再生长的时间延长从而产生 PAE。革兰氏 阳性球菌合成 PBPS 较慢 , 故 PAE较长。而革兰氏阴性杆菌可迅速重新合成 PBPS , 且在与β2内酰胺类抗 生素短暂接触后 , 革兰氏阴性杆菌可变形成丝状体 , 能迅速裂解为数十个菌体 , 故 PAE 较短甚至可出 现负值[10 ,11 ] 。 本试验结果还显示 , 氨苄西林和阿莫西林均对金黄色葡萄球菌产生一定的 PAE 并呈剂量依赖性 , 且两药在亚抑菌浓度下 (015 ×MIC) 对金黄色葡萄球菌仍存在一定的 PAE。这意味着两药在低于MIC 浓 度时仍能发挥抗菌效应 , 似可解释体内 PAE大于体外 PAE的原因 , 因药物在体内的消除是逐渐进行的 , 药物浓度从峰浓度下降到低于MIC 过程中始终与细菌接触 , 故在体内产生叠加的 PAE ; 而体外药物的消 除较彻底 , 残余药物浓度大大低于 MIC , 且不存在亚抑菌浓度作用 (见结果) 。 综上结果 , 在临床设计给药方案时 , 对革兰氏阳性球菌感染 , 除了考虑药代动力学和 MIC 指标外 , 还应考虑 PAE因素 , 可适当延长给药间隔时间 ; 而对大肠杆菌敏感株引起的感染在使用上述两药治疗 时应持续给药或缩短给药间隔时间。 参考文献 : [1 ] 　Spivey J M. 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