08第八章 杂环类药物分析

null第八章 杂环类药物的分析 Analytical of Heterocyclic drugs第八章 杂环类药物的分析 Analytical of Heterocyclic drugs本章简介本章简介 本章介绍五类： 1、吡啶类：异烟肼、尼克刹米和硝苯地平 2、喹啉类：硫酸奎宁、奎尼丁、盐酸环丙沙星等 3、托烷类：硫酸阿托品、氢溴酸东莨菪碱等 4、吩噻嗪类：氯丙嗪、异丙嗪、奋乃静和盐酸硫利达嗪等 5、苯并二氮杂卓类：地西泮、奥沙西泮和氯氮卓等杂环化合物：碳环中夹杂有非碳原子的环状有机化合物，其中非碳原子称为杂原子，一般为O、S、N等。在化学合成药中，已成为现代药物中应用最多、最广的一大类。第一节 吡啶类药物第一节 吡啶类药物结构与化学性质 含有N原子的六元单环，例如：异烟肼、尼克刹米和硝苯地平主要化学性质与鉴别反应主要化学性质与鉴别反应 弱碱性：吡啶环N原子为碱性原子，吡啶环pKb为8.8（水中） 尼克刹米：除了吡啶环上的N原子外，吡啶环β位被酰氨基取代，遇碱水解释放二乙胺。 Chp2005鉴别：取本品10滴，加氢氧化钠试液3ml ，加热，即发生二乙胺的臭气， 能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色。 主要化学性质与鉴别反应主要化学性质与鉴别反应还原性：异烟肼吡啶环γ位被酰肼所取代，有较强的还原性，可被不同的氧化剂氧化，也可与某些含有羰基的化合物发生缩合反应。异烟肼与硝酸银－银镜反应 Chp2005：取本品约10mg，置试管中，加水2ml 溶解后，加氨制硝酸银试液1ml ，即发生 气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。 缩合反应缩合反应Chp2005异烟肼鉴别：取本品约0.1g，加水5ml 溶解后，加10％香草醛的乙醇溶液 1ml， 摇匀，微热，放冷，即析出黄色结晶；滤过，用稀乙醇重结晶，在105 ℃干燥后，依法 测定（附录Ⅵ C），熔点为228 ～231 ℃，熔融时同时分解。 异烟肼的其他鉴别反应异烟肼的其他鉴别反应与亚硒酸作用，可将其还原为红色硒的沉淀与1,2-萘醌-4-磺酸在碱性介质中，可缩合呈红色。红色主要化学性质与鉴别反应主要化学性质与鉴别反应吡啶环的特性： 吡啶环开环 \ 戊烯二醛反应（köning反应） 适用于α、α’位无取代的异烟肼、尼克刹米 Chp2005尼克刹米鉴别反应：取本品1 滴，加水50ml，摇匀，分取2ml ，加溴化氰试液2ml 与2.5％苯胺溶 液3ml ，摇匀，溶液渐显黄色。 主要化学性质与鉴别反应主要化学性质与鉴别反应吡啶环的特性： 二硝基氯苯反应（Vongerichten反应）：在无水的条件下，吡啶及其衍生物与3,4-二硝基氯苯混合共热或加热至熔融，冷却后，加醇制氢氧化钾溶液将残渣溶解，溶液呈紫红色。 异烟肼－氧化成羧基；尼克刹米－水解成羧基吡啶环的鉴别反应吡啶环的鉴别反应形成沉淀的反应 可与重金属盐类或苦味酸形成沉淀 尼克刹米的鉴别：取本品2滴，加水1ml ，摇匀，加硫酸铜试液2滴与硫氰酸铵试液3 滴，即生 成草绿色沉淀。 异烟肼、尼克刹米可与氯化汞形成白色沉淀。分解产物的鉴别反应分解产物的鉴别反应异烟肼、尼克刹米等与无水碳酸钠或氢氧化钙共热，可发生脱羧降解，并有吡啶臭味逸出。紫外吸收光谱鉴别紫外吸收光谱鉴别芳杂环在紫外光区有特征吸收有关物质检查有关物质检查一、异烟肼中肼的检查 异烟肼不稳定，游离肼即可能在原料中引入，又可能在贮藏过程中降解－诱变剂和致癌物质 1、TLC 检查方法：取本品，加水制成每1ml 中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼 加水制成每1ml 中含0.20mg（相当于游离肼50μg ）的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录ⅤB）试验，吸取供试品溶液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙醇(3:2) 为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15分钟后检视。在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。 －－限度：0.02%。有关物质检查有关物质检查2、比浊法 JP(14)采用样品中加水杨酸的乙醇溶液观察浑浊的方法－专属性差 3、差示分光光度法 原理： 肼－对-二甲氨基苯甲醛→黄色缩合物（对-二甲氨基苯甲醛连氮）465nm波长有最大吸收 异烟肼－对-二甲氨基苯甲醛→缩合物（对-二甲氨基苄叉） 465nm波长无吸收 加入3%丙酮，可使得黄色缩合物（对-二甲氨基苯甲醛连氮）变为无色的二甲基甲酮连氮，继而作为参比，用于测定△A456nm，并以对照品比较法计算游离肼的含量。 －－专属、准确、灵敏，最低检测限可达0.1μg/ml。一、异烟肼中肼的检查有关物质检查有关物质检查二、尼克刹米中有关物质的检查 TLC 无杂质对照品－高低浓度对比法 检查方法：取本品，加甲醇制成每1ml 中含40mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加甲醇分别稀释成每1ml 中含0.4mg 和40μg的溶液，作为对照溶液(1)和(2) 。照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述三种溶液各10μl ，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以氯仿－丙醇(75:25)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液(2)的主斑点比较，不得更深 ；如有1点超过时，应不深于对照溶液(1)的主斑点。有关物质检查有关物质检查 遇光不稳定－光化学歧化作用HPLC法检查 (A) (B)三、硝苯地平中的有关物质检查HPLC法检查 硝苯地平中的有关物质检查HPLC法检查 硝苯地平中的有关物质检查避光操作 取本品，精密称定，加甲醇分别制成每1ml中含1mg和0.2mg的溶液，作为供试品溶液Ⅰ和Ⅱ。 取硝苯地平有关杂质对照品A和B各10mg， 精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液Ⅰ。分别精密量取供试 品溶液Ⅱ和对照品溶液Ⅰ各1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液Ⅱ。 照高效液相色谱法（附录Ⅴ D）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(3:2)为流动相；检测波长为235nm。取对照品溶液Ⅱ20μl注入液相色谱仪，调节 检测灵敏度，使杂质A和B成分色谱峰的峰高为满量程的20％；杂质A和B之间，杂质B与硝苯地平之间的分离度均应符合规定。 取供试品溶液Ⅰ和对照品溶液Ⅱ各20μl，分别注入液相色谱仪。 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液Ⅰ如出现与对照品溶液Ⅱ中杂质A和B相对应的峰，其峰面积不得大于对照品溶液Ⅱ中杂质A和B的面积；如出现除杂质A和B以外的其他杂质峰，其峰面积不得大于对照品溶液Ⅱ中硝苯地平的峰面积； 各杂质总量不得大于0.5％。供试品溶液Ⅰ中小于对照品溶液Ⅱ中硝苯地平峰面积的10％ 以下的杂质峰忽略不计。第二节 喹啉类药物第二节 喹啉类药物 硫酸奎宁 硫酸奎宁丁 盐酸环丙沙星 (quinine sulfate) (quinidine sulfate) (ciprofloxacin hydrochloride) 结构特点：含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，环上杂原子的反应性能基本与吡啶相同。主要化学性质主要化学性质碱 性： 喹啉环上的N原子具有碱性，与强酸成盐 环丙沙星： 盐酸； 奎宁、奎尼丁： 二元酸－硫酸（喹核碱含脂环氮，碱性强） 奎宁 (左旋体)：pKb1为5.07 pKb2为9.7，饱和水溶液pH为8.8，易溶 于氯仿－无水乙醇(2:1) 奎尼丁(右旋体)：pKb1为5.4 pKb2为10，易溶于沸水或乙醇。 旋 光 性： 硫酸奎宁 (左旋体)，比旋度为-237°至-244° 硫酸奎宁丁(右旋体)，比旋度为+275°至+290° 盐酸环丙沙星，无旋光性 荧光特性： 硫酸奎宁和硫酸奎宁丁在稀硫酸中显蓝色荧光，盐酸环丙 沙星无荧光。鉴别试验鉴别试验一、绿奎宁反应（Thalleioquin） 用于奎宁和奎尼丁的鉴别鉴别方法：取本品约20mg，加水20ml溶解后，分取5ml，加溴试液3滴与氨试液1ml ，即显翠绿色。 鉴别试验鉴别试验二、光谱特征 紫外吸收光谱－盐酸环丙沙星：取本品，加0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中含8μg的溶液，照分光光度法(附录Ⅳ A)测定，在 277nm与315nm的波长处有最大吸收。 荧光光谱－硫酸奎宁：取本品约20mg，加水20ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸 性，即显蓝色荧光。鉴别试验鉴别试验 硫酸奎宁、硫酸奎尼丁→硫酸根－氯化钡＝白色沉淀 盐酸环丙沙星→盐酸根－硝酸银＝白色沉淀特殊杂质检查特殊杂质检查一、硫酸奎宁中的特殊杂质检查 酸度－酸性杂质 取本品0.2g，加水20ml溶解后，测定pH值应为5.7 ～6.6 。 氯仿－乙醇不溶物 取本品2g，加氯仿－无水乙醇 (2:1) 的混合液15ml，在50℃加热10min后，用称定重量的垂熔坩埚滤过，滤渣用上述混合液分5 次洗涤，每次10ml ，在105 ℃干燥至恒重，遗留残渣不得过2mg。 其他金鸡纳碱（TLC） 取本品，加稀乙醇制成每1ml 含10mg的溶液，作为供试品溶液；精 密量取适量，加稀乙醇稀释制成每1ml 中含50μg 的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱 法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯 仿－丙酮－二乙胺 (5:4:1.25)为展开剂，展开后，微热使展开剂挥散，喷以碘铂酸钾试 液使显色。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。 特殊杂质检查特殊杂质检查二、盐酸环丙沙星中特殊杂质检查 酸 度 取本品，加水制成每1ml中含25mg的溶液，测定 pH值应为3.0～ 4.5。 溶液的澄清度和颜色 取本品0.1g，加水10ml溶解后，溶液应澄清；如显色，与黄色或黄绿色4号 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 比色液(附录Ⅸ A)比较，不得更深。 有关物质（HPLC） ODS色谱柱；以0.05mol/L枸橼酸溶液-乙腈 (82:18)用三乙胺调节pH值至3.5为流动相；检测波长为277nm。理论板数按盐酸环丙沙星峰计算应不低 于2000，盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度应符合规定。 测定法 取本品适量，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度 和记录仪衰减，使主成分的峰高为记录仪满量程的2～4倍，记录时间应为主成分峰保留时间的2倍。按面积 归一化法计算，杂质总量不得过1.5％。 第三节 托烷类药物第三节 托烷类药物 硫酸阿托品 氢溴酸东莨菪碱 (atropine) (scopolamine hydrochloride)结构特点：大多数为莨菪烷衍生的氨基醇与不同的有机酸缩合成酯的生物碱，常见的有颠茄生物碱和古柯生物碱。化学性质化学性质水解性（酯水解生成醇和酸） 阿托品 莨菪醇 莨菪酸化学性质化学性质碱性 阿托品和东莨菪碱结构中，五原脂环含有叔胺氮原子，较强的碱性，易于酸成盐，如阿托品pKb1为4.35 旋光性 氢溴酸东莨菪碱含有不对称碳原子，左旋体比旋度为-24°至-27° 阿托品虽然含有不对称碳原子，但外消旋化，无旋光性鉴别试验鉴别试验托烷生物碱一般鉴别试验鉴别方法：取供试品约10mg，加发烟硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黄色的残渣，放冷，加乙醇2～3滴，加固体氢氧化钾一小粒，即显深紫色。鉴别试验鉴别试验氧化反应 水解生成的莨菪酸，在硫酸和重铬酸钾在加热条件下，发生氧化反应，生成苯甲醛，逸出苦杏仁的臭味。鉴别试验鉴别试验沉淀反应 碱性－生物碱沉淀剂生成沉淀 例：阿托品：氯化汞醇试液→黄色沉淀 东莨菪碱：氯化汞醇→白色复盐沉淀鉴别试验鉴别试验硫酸盐与溴化物反应 硫酸阿托品：水溶液加氯化钡生成白色沉淀，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解；加醋酸铅试液也生成白色沉淀，在醋酸铵或氢氧化钠试液中溶解。 氢溴酸东莨菪碱：水溶液加硝酸银试液，生成淡黄色凝乳沉淀，能在氨试液中微溶，但在硝酸中几乎不溶；滴加氯试液，溴即游离，加氯仿振摇，氯仿层显黄色或红棕色。氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查来 源： 茄科植物颠茄、白曼陀罗、莨菪中等提取 （我国，白曼陀罗的干燥品：洋金花中提取东莨菪碱，制成氢溴酸盐）制 法：洋金花粗粉乙醇/渗漉渗漉液减压蒸馏浸膏H2SO4/提取酸性提取液Na2CO3, CHCl3/提取总生物碱Na2CO3, CHCl3/分离东莨菪碱HBr/成盐氢溴酸东莨菪碱（粗品）75% C2H5OH/精制成品氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查氢溴酸东莨菪碱中特殊杂质检查酸度 取本品0.50g，加水10ml溶解后，依法测定（附录Ⅵ H），pH值应为4.0～5.5。－强酸弱碱 其他生物碱 取本品0.10g ，加水2ml 溶解后，分成两等份：一份中加氨试液2～3滴，不得发生浑浊；另一份中加氢氧化钾试液数滴，只许发生瞬即消失的类白色浑浊。－阿扑阿托品、颠茄碱 易氧化物 取本品0.15g,加水5ml溶解后，在15～20℃加高锰酸钾滴定液(0.02mol /L)0.05ml，10分钟内红色不得完全消失。－阿扑阿托品、其他含有不饱和双键的有机物质第四节 吩噻嗪类药物第四节 吩噻嗪类药物R’: -H、-Cl、-CF3、 -COCH3、-SCH2CH3 R: 具有2～3碳链的二甲或二乙胺基，或含氮杂环如哌嗪和哌啶的衍生物 典型药物：盐酸氯丙嗪、盐酸异丙嗪、奋乃静、盐酸氟奋乃静、癸氟奋乃静、盐酸三氟拉嗪和盐酸硫利达嗪等吩噻嗪类药物为苯并噻嗪的衍生物，分子结构中均含有硫氮杂蒽母核，基本结构如下：主要的化学性质主要的化学性质紫外吸收光谱特性 硫氮杂蒽母核为共轭三环的π系统，紫外区三个吸收峰值，约205nm、254nm、300nm，最强多在254nm附近，根据2位、10位取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。 当母核的二价硫被氧化为砜或亚砜，则呈现四个峰值。 红外吸收光谱特性 由于取代基R和R’的不同，具有不同的红外光谱，已被药典用于不同品种的鉴别。主要的化学性质主要的化学性质易氧化呈色 硫氮杂蒽母核中的二价硫易氧化，不同的氧化剂如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，母核易被氧化成亚砜、砜等不同的产物，随取代基的不同，呈现不同的颜色，可用于鉴别。 金属离子络合呈色 未氧化的硫可与金属钯离子形成配位化合物，而氧化产物亚砜、砜则不能，可用于鉴别和含有测定，具有专属性。鉴别试验鉴别试验紫外吸收光谱鉴别鉴别试验鉴别试验氧化显色反应鉴别试验鉴别试验与钯离子络合显色 鉴别方法：取本品约50mg，加甲醇2ml溶解后，加0.1%氯化钯溶液3ml，既有沉淀生成，并显红色，再加过量的氯化钯溶液，颜色变深。鉴别试验鉴别试验分解产物反应（如癸氟奋乃静等含氟有机药物） 鉴别方法：取本品15～20mg，加碳酸钠与碳酸钾各约0.1g，混匀，在600 ℃炽 灼15～20分钟，放冷，加水2ml使溶解，加盐酸溶液(1→2)酸化，滤过，滤液加茜素锆试液0.5ml，应显黄色。 特殊杂质检查－盐酸异丙嗪特殊杂质检查－盐酸异丙嗪合成工艺特殊杂质检查特殊杂质检查盐酸异丙嗪杂质来源使得最终合成产物变为：此异构体在丙酮中溶解度大，精制也不易除去。 另外，异丙嗪不太稳定，易氧化，贮藏过程可能分解，特殊杂质检查特殊杂质检查检查方法: (TLC) 取本品，加二氯甲烷制成每1ml中含10mg的溶液，作为供试 品溶液；精密量取适量，加二氯甲烷稀释成每1ml 中含0.15mg和0.05mg的溶液，作为对照溶液(1)和(2) 。照薄层色谱法（附录Ⅴ B）试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以己烷－丙酮－二乙胺(8.5:1:0.5) 为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视，供试品溶液如显杂质斑点，不得多于3 个 ；其杂质斑点与对照溶液(2)的主斑点比较，不得更深；如有一点超过，应不深于对照 溶液(1)的主斑点。 注：避光操作；溶液临用新配。特殊杂质检查特殊杂质检查盐酸硫利达嗪中的有关物质检查 对光不稳定，无杂质对照品，TLC高低浓度对比法 检查方法：取本品，加氯仿制成每1ml中约含10mg的溶液，作为供试品溶液; 精密量取适量，加氯仿稀释成每1ml中约含50μg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法( 附录Ｖ Ｂ)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－异丙醇－浓氨溶液(74:25:1)为展开剂，展开后，晾干，先用碘化铋钾试液－冰醋酸－水(10:20 :70)的混合液喷雾，然后喷以过氧化氢试液，立即覆盖同样大小的洁净玻璃板，检视，供试 品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照溶液所显的主斑点比较，不得更深。 （避光操作）第五节 苯并二氮杂卓类药物第五节 苯并二氮杂卓类药物 地西泮 阿普唑仑 奥沙西泮 氯氮卓 (diazepam) (alprozolam) (oxazepam) (chlordiazepoxide)结构特点：含氮杂原子、六元和七元环双环并合而成，其中1,4-苯并二氮杂卓类药物是目前临床应用最广泛的抗焦虑、抗惊厥药。如：地西泮、硝基地西泮、艾司唑仑、氯氮卓、阿普唑仑、三唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮等，其中，除了氯氮卓外，均为地西泮的衍生物。化学性质化学性质碱 性： 非水溶液滴定法测定含量 水 解： 在强酸性溶液中，形成二苯甲酮衍生物，具有的特性可用于鉴别和含有测定鉴别试验鉴别试验1、沉淀反应 氯氮卓稀盐酸溶液 阿普唑仑稀盐酸溶液 盐酸氟西泮水溶液 氯硝西泮稀盐酸溶液碘化铋钾试液橙红色沉淀放置后 颜色变深 2、水解后呈芳伯胺反应 氯氮卓和奥沙西泮的盐酸溶液(1→2)，缓缓加热煮沸，放冷，加亚硝酸钠和碱性β-萘酚试液，生成橙红色沉淀，后者放置后颜色变暗。一、化学鉴别鉴别试验鉴别试验3、硫酸－荧光反应： 苯并二氮杂卓类药物溶于硫酸/稀硫酸在紫外光(365nm)下显不同的颜色。4、分解产物的反应 有机氯化合物，氧瓶燃烧法破坏，生成HCl，以5%氢氧化钠溶液吸收，硝酸酸化，显氯化物反应。 鉴别试验鉴别试验5、氯化铜焰色反应 分子结构含有氯元素，在铜网上燃烧发出氯化铜的绿色火焰。 一、化学鉴别鉴别试验鉴别试验二、紫外特征吸收IR：地西泮、阿普唑仑、艾司唑仑、盐酸氟西泮、氯硝西泮和奥沙西泮鉴别试验鉴别试验 硅胶G薄层板，苯－丙酮(3:2)为展开剂，稀硫酸喷雾，105℃干燥30min，紫外灯下检视荧光斑点：*s, m, w分别 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 示荧光的强、中、弱三、薄层色谱法鉴别试验鉴别试验酸水解产物的薄层色谱法 苯并二氮杂卓类经酸水解后生成二苯甲酮衍生物，但专属性差，不同的药物可能水解产生相同的二苯甲酮衍生物（三唑仑、阿普唑仑等经水解后不产生二苯甲酮衍生物，可以区别）。特殊杂质检查特殊杂质检查TLC是本类药物较为常用的检查方法 例：地西泮 检查方法：取本品，加丙酮制成每1ml 中含100mg 的溶液，作为供试品溶液；精密 量取适量，加丙酮稀释成每1ml 中含0.3mg 的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附 录Ⅴ B）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶GF254 薄层板上，以醋酸乙酯－己烷(1:1)为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。特殊杂质检查特殊杂质检查HPLC法在杂质检查中的应用也逐渐增加 例：氯氮卓（USP24、BP2000采用薄层色谱法） HPLC检查法： 色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：甲醇－磷酸液(0.05mol/L)(60:40), 40%氢氧化钠调pH6.0；流速1ml/min，检测波长254nm。 结果：灵敏度高，可检测未知结构的痕量杂质。特殊杂质检查特殊杂质检查HPLC法用于地西泮降解产物的检查 色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水(70:30) 为流动相；检测波长为254nm 。理论板数按地西泮峰计算应不低于1500，地西泮峰和内标物质峰的分离度应符合要求。 检查方法： 取本品，加甲醇分别制成每1ml中含1mg的供试品溶液和每1ml中含5μg的对照溶液。照含量测定项下的色谱条件进行试验，取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的10％；再准确量取上述两种溶液各10μl分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍，供试品溶液的色谱图中主成分峰之后如显示杂质峰，量取各杂质峰面积的和，不得大于对照溶液主成分峰的峰面积。 第六节 含量测定第六节 含量测定高效液相色谱法非水溶液滴定法铈量法比色法紫外分光光度法气相色谱法非水溶液滴定法非水溶液滴定法原理 一般方法 冰醋酸作为溶剂，若滴定氢卤酸盐，则加5%醋酸汞的冰醋酸溶液，用高氯酸(0.1mol/L)滴定，并用空白试验校正。 问题讨论 适用范围：Kb＜10-8的有机碱盐 酸根影响：高氯酸＞氢溴酸＞硫酸＞盐酸＞硝酸 滴定剂稳定性：温度、贮藏条件都有影响 终点指示方法：结晶紫指示剂，电位法非水溶液滴定法非水溶液滴定法应用实例 游离弱碱性药物：地西泮、尼克刹米或氯氮卓，基于氮原子的弱碱性可以结晶紫为指示剂，非水溶液直接滴定，终点颜色绿色～蓝绿色～蓝色不等。 氢卤酸盐类药物：加入过量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成难电离的卤化汞，再用高氯酸滴定，可用结晶紫、橙黄Ⅳ作为指示剂，或用电位法指示终点。 硫酸盐类药物：硫酸为二元酸，但在非水介质中只显示一元酸解离为HSO4-硫酸奎宁的非水滴定硫酸奎宁的非水滴定硫酸奎宁的非水滴定硫酸奎宁的非水滴定非水溶液滴定法非水溶液滴定法应用实例 硝酸盐的滴定：由于硝酸的氧化性破坏指示剂变色，用电位法指示终点 磷酸盐与有机酸盐：直接滴定铈量法铈量法原理：氧化－还原 适用范围：硝苯地平－邻二氮菲指示剂(还原型) 红色 (氧化型) 浅蓝色C12H8N2溶于亚铁盐溶液吩噻嗪类药物－自身颜色的变化Free radical 红色自由基Bivalent cation 二价阳离子，无色比色法比色法一、酸性染料比色法 原理：在适当的介质中，碱性药物(B) 可与氢离子结合成(BH+)，而一些酸性染料可解离为(In-)，两者定量结合成有色络合物(BH+ In-)离子对，可被有机溶剂定量提取，在一定波长处测定其吸收，即可算出碱性药物的含量。null 对照品溶液的制备 精密称取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品对照品25mg，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸阿托品2.5mg ），置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并稀释至刻度，用干燥滤纸滤过，收集续滤液，即得。 测定方法 精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置预先精密加入氯仿10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液〔取溴甲酚绿50mg与邻苯二甲酸氢钾1.021g，加0.2mol/L氢氧化钠溶液6.0ml使溶解，再加水稀释至100ml，摇匀，必要时滤过〕2.0ml，振摇提取2min后，静置使分层，分取澄清的氯仿液，照分光光度法（附录Ⅳ B），在420nm的波长处分别测定吸收度，计算，并将结果与1.027 相乘，即得供试量中含有(C17H23N O3)2·H2SO4·H2O的重量。 例：硫酸阿托品片的含量测定比色法比色法一、酸性染料比色法 影响因素 水性最佳pH值：使得BH+和In-最多 酸性染料及其浓度：定量结合，产物溶解性好；可稍过量 有机溶剂的选择：提取效率高，氯仿最理想 水分的影响：影响结果，脱水剂或滤纸除去水分 比色法比色法二、钯离子比色法 原理：吩噻嗪类药物的二价硫在pH2±0.1缓冲液中可与钯离子(Pb2+)形成红色络合物，10min呈色完全，可稳定2hour，在500nm波长附近有最大吸收，最适宜范围50μg~ 250μg紫外分光光度法紫外分光光度法直接分光光度法 对照品溶液同时测定 百分吸收系数（ ） 例：奥沙西泮含量测定 取本品约15mg，精密称定，置200ml 量瓶中，加乙醇150ml，于温水浴中加热，并时时振摇，使奥沙西泮溶解，放冷，用乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml ，置100ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀，照分光光度法（附录Ⅳ A），在229nm 的波长处测定吸收度；另精密称取奥沙西泮对照品约15mg，同法操作并测定；计算，即得。 紫外分光光度法紫外分光光度法萃取后分光光度法 碱化，有机溶剂萃取游离型碱，使其与制剂辅料分离，再用分光光度法测定 萃取－双波长分光光度法 碱化，有机溶剂萃取，在254nm、277nm波长处测定吸收，用吸收度之差计算含量，以消除抗氧剂的干扰。 二阶导数分光光度法气相色谱法气相色谱法分离效能好、灵敏度高、选择性好、用量少、分析速度快 有机碱或其盐类均可直接GC分析，但盐解离的酸对色谱柱和检测器会损害，因此一般将生物碱盐的水溶液先碱化，用有机溶剂提取游离碱后再分析。高效液相色谱法高效液相色谱法反相高效液相色谱法 用于杂环类药物分析一般加入扫尾剂二乙胺或三乙胺 例：盐酸环丙沙星滴眼液 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05mol/L枸橼酸溶液-乙腈(82:18)用三乙胺调节pH值至3.5为流动相；检测波长为277nm。理论板数按盐酸环丙沙星峰计算应不低于 2000，盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度应符合规定。 测定法 精密量取本品2ml(约相当于环丙沙星6mg)，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取在105℃干燥至恒重的盐酸环丙沙星对照品适量(约相当于环丙沙星20mg)，置50ml量瓶中，加水适量使溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别取供试品溶液与对照品溶液各10μl 注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。 高效液相色谱法高效液相色谱法离子对色谱法 原理：将待测组份的反离子加入流动相中，与呈离解状态的药物作用，生成可逆的离子对化合物。 测定杂环类药物中吡啶类、喹啉类等药物时，主要采用烷基磺酸盐（如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠）或其他盐类。 影响条件： 流动相一般呈酸性，以利于生物碱的离解；离子对试剂的非极性部分越大，形成的离子对分配系数越大，保留时间越长（十二烷基磺酸钠＞庚烷磺酸钠＞戊烷磺酸钠）。